化学农药环境安全评价试验准则 第10部分：蜜蜂急性毒性试验

GB/T31270.10-XXXX

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的

规定起草。

本文件是GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》的第10部分。GB/T31270已经发布

了以下部分：

——第1部分：土壤代谢试验；

——第2部分：水解试验；

——第3部分：水中直接光解试验；

——第4部分：土壤吸附/解吸试验；

——第5部分：土壤淋溶试验；

——第6部分：挥发性试验；

——第7部分：生物富集试验；

——第8部分：水-沉积物系统代谢试验；

——第9部分：鸟类短期饲喂毒性试验；

——第10部分：蜜蜂急性毒性试验；

——第11部分：家蚕急性毒性试验；

——第12部分：鱼类急性毒性试验；

——第13部分：溞类急性活动抑制试验；

——第14部分：藻类生长抑制试验；

——第15部分：蚯蚓急性毒性试验；

——第16部分：土壤微生物毒性试验；

——第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验；

——第18部分：天敌两栖类急性毒性试验；

——第19部分：非靶标植物影响试验；

——第20部分：家畜短期饲喂毒性试验；

——第21部分：大型甲壳类生物毒性试验；

——第22部分：土壤表面光解试验；

——第23部分：鸟类急性经口毒性试验。

本文件代替GB/T31270.10-2014《化学农药环境安全评价试验准则第10部分：蜜蜂急性毒

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性试验》，与GB/T31270.10-2014相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：

a)增加了蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验方法（见4.3、5.2、6.1、6.2.2、6.3、7.2、7.3、7.6、

8.2、9.3、10.2、11.2、12.2）；

b)增加了规范性引用文件一章（见第2章）；

c)更改了术语与定义，新增了蜜蜂幼虫、成年工蜂、子脾的定义，删除了被试物、化学农

药、原药、制剂、有效成分、参比物质（见3.2、3.3、3.4，2014版的2.2、2.3、2.4、2.5、

2.6、2.7）；

d)增加了试剂或材料一章，列出了试验所需的试剂（见第6章）；

e)增加了样品一章，增加了参比物相关要求（见8.2，2014年版的4.1.2）；

f)更改了试验数据处理方法（见第10章，2014版本的4.3.1、4.3.2、4.3.3、4.3.4）；

g)删除质量控制中，投喂药品及饲养期间,供试物含量不能低于规定含量的80%的要求（见

第11章，2014年版的4.4）；

h)删除了农药对蜜蜂毒性等级划分（见2014年版的附录A）；

i)增加了附录A：蜂王产卵控制器示意图（见附录A）；

j)增加了附录B：蜜蜂幼虫饲养单元孔示意图（见附录B）；

k)增加了附录C：蜜蜂幼虫急性毒性试验流程图（见附录C）。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中华人民共和国农业农村部提出并归口。

本文件起草单位：农业农村部农药检定所、中国农业科学院植物保护研究所。

本文件主要起草人：袁善奎、朱丽珍、吴迟、陈朗、周艳明、苍涛、卜元卿、刘琼、赵常升、

张海情、朱昱璇、廖建华。

本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：

——2014年首次发布为GB/T31270.10-2014。

——本次为第一次修订。

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GB/T31270.10-XXXX

化学农药环境安全评价试验准则

第10部分：蜜蜂急性毒性试验

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安

全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件规定了蜜蜂急性毒性试验的试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试

验数据处理、质量控制以及试验报告等的基本要求。

本文件适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂急性经口毒性试验、急性接触毒性试验和蜜蜂幼

虫单次暴露毒性试验。本文件不适用于易挥发的化学农药。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引

用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T4195.1农药登记环境影响试验生物试材培养第1部分：蜜蜂

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

半致死剂量medianlethaldose

指在急性经口试验和急性接触以及急性幼虫毒性试验中，引起50％的受试生物死亡时被试物

剂量，用LD50表示.

注：单位为μg./蜂或μg./幼虫。

蜜蜂幼虫larvaofhoneybee

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指蜜蜂卵孵化后至变态化蛹前的虫态。

成年工蜂Adultforagerhoneybee

在蜜蜂种群繁殖期，指蜂群中具备外勤采集能力和行为的蜜蜂。

子脾Broodcomb

蜂群中包含大量蜂卵、不同日龄幼虫以及蛹的巢脾。

4原理

蜜蜂急性经口毒性

将不同剂量的被试物分散在蔗糖溶液中饲喂成年工蜂，药液消耗完后测定药液的消耗量，并

换喂不含被试物的蔗糖溶液。观察、记录48h内蜜蜂的中毒症状及死亡数，处理组24h和48h

的死亡率差异＞10%时，观察时间还应延长至最多96h。求出24h、48h和试验延长后72h、96h

的LD50值及其95%置信区间。

蜜蜂急性接触毒性

在蜜蜂被麻醉后，将不同浓度试验药液点滴在受试蜜蜂的中胸背板处，待溶剂挥发后，将蜜

蜂转入试验笼中，用不含被试物的蔗糖溶液饲喂。观察、记录48h内蜜蜂的中毒症状及死亡数，

处理组24h和48h的死亡率差异＞10%时，观察时间还应延长至最多96h。求出24h、48h和试

验延长后72h、96h的LD50值及其95%置信区间。

蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验

在试验第1天（D1），分别从3个繁殖蜂群中移取1日龄蜜蜂幼虫至育王台基，然后一并放

入48孔细胞培养板，在板孔中人工标准化饲养。在试验第4天（D4），将被试物按不同浓度梯

度与人工饲料混合，按单次剂量一次性投喂蜜蜂幼虫。记录试验第5天（D5）、第6天（D6）和

第7天（D7）蜜蜂幼虫的中毒症状、异常行为以及死亡数。求出染毒72h的LD50及其95%置信

区间。

5试验条件

5.1蜜蜂急性经口和急性接触试验在温度（25±2）C，相对湿度50%～70%，黑暗条件下进行。

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5.2蜜蜂幼虫急性毒性试验在温度34℃~35℃，相对湿度95%，黑暗条件下进行。观察和饲喂时

温度可出现一定的偏差，但不应低于23℃或高于40℃，且每24h内出现的偏差不应超过一次，

持续时间不应超过15min。

6试剂或材料

试剂

除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。

6.1.1乐果（C5H12NO3PS2，CAS号：60-51-5）。

6.1.2硫酸钾（K₂SO₄，CAS号：7778-80-5）。

6.1.3丙酮（C3H6OCAS号：67-64-1）。

6.1.4二甲基甲酰胺（C3H7NO，CAS号：68-12-2）。

6.1.5二甲基亚砜（C2H6OS，CAS号：67-68-5）。

6.1.6葡萄糖-D（C6H12O6，CAS号：50-99-7）。

6.1.7果糖-D（C6H12O6，CAS号57-48-7）。

6.1.8酵母提取物（CAS号：8013-01-2）。

6.1.9蔗糖（C12H22O11，CAS号：57-50-1）。

6.1.10蜂王浆（CAS号：8031-67-2）。

6.1.1175%酒精消毒液（CH3CH2OH，CAS号：64-17-5）。

供试生物

6.2.1蜜蜂成蜂的获取

6.2.1.1应采用同一蜂群的蜜蜂成年工蜂进行试验，宜选用意大利蜜蜂（Apismellifera），按照NY/T

4195.1的要求饲养，受试蜜蜂应为健康、大小一致的个体。用于急性经口毒性试验的蜜蜂应在试

验前饥饿2h。

6.2.1.2不宜在早春和晚秋进行蜜蜂试验，如在早春和晚秋进行试验，应在试验环境下以蜂巢花粉

饲喂1周；蜜蜂接受抗生素、抗螨虫药物后4周内不得用于试验。

6.2.1.3供试蜜蜂应在清晨或前1日傍晚收集，不宜直接在蜜蜂子脾上采集。

6.2.2蜜蜂幼虫的获取

6.2.2.1试验用蜜蜂幼虫从3个不同的蜂群收集，蜂群健康，生活史和生理状况已知。如果在试验

前对蜂群进行了卫生处理（如螨虫或疾病治疗），需要记录处理日期和所用药物的信息。在试验

开始前四周内，不允许对蜂群进行任何处理。

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6.2.2.2试验前将蜂王隔离在蜂箱中放置有空巢脾的蜂王产卵控制器（参见附录A的图A.1）内，

该控制器应避免放置在蜂箱边缘。第2天检查新卵产出情况，并从产卵控制器中移出蜂王，避免

在试验蜂脾上再次产卵。蜂王的隔离时间最多不超过30h。

6.2.2.3移虫前将移虫针、人工育工台基浸没在75%酒精（体积比）或其他消毒液中至少30min

进行消毒后，晾干待用。蜂王产卵3d后用移虫针将1日龄的幼虫随机转移至育王台基中（移虫

环境温度不低于20℃）。为了避免由幼虫之间个体差异所产生的偏差，宜收集新孵化的幼虫，即

还没有变为“C”字形的幼虫。每个台基放入1头幼虫，在试验条件下，用人工饲料饲养。

人工饲料

6.3.1人工饲料组成

不同日龄蜜蜂幼虫使用的3种饲料配方如下（均为质量比）：

a）饲料A：酵母提取物：葡萄糖：果糖：无菌水：鲜蜂王浆=1：6：6：37：50；

b）饲料B：酵母提取物：葡萄糖：果糖：无菌水：鲜蜂王浆=1.5：7.5：7.5：33.5：50；

c）饲料C：酵母提取物：葡萄糖：果糖：无菌水：鲜蜂王浆=2：9：9：30：50。

6.3.2人工饲料配制与储存

6.3.2.1应待酵母提取物、葡萄糖、果糖完全溶解于无菌水后，再与蜂王浆混合。

6.3.2.2整个试验期间，在每次试验开始前配制好新鲜饲料并放置在≤5℃的冰箱中储存。

7仪器设备

7.1试验蜂笼（易清洁、通风好，材质可为不锈钢、金属丝网、塑料、一次性木笼等，宜每笼10

只蜜蜂，试验笼的大小应与蜜蜂的数量相称，提供足够的空间）

7.2蜂王产卵控制器，构成见附录A的图A.1。

7.3移虫针。

7.4恒温恒湿培养箱。

7.5温湿度记录仪。

7.6聚苯乙烯或聚丙烯材质的育王台基，构成见附录B的图B.1。

7.7分析天平（感量0.0001g及以上）。

7.8人工气候室。

7.9微量点滴仪。

7.10紫外杀菌灯。

7.11饲喂器等。

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8样品

被试物

农药原（母）药或制剂。

a)水中溶解度；

b)有机溶剂中的溶解度；

c)代表性制剂的田间推荐施药量及其使用次数等。

参比物

宜选用乐果原药为参比物。

9试验步骤

蜜蜂急性经口毒性

9.1.1预试验

按正式试验的条件，以较大间距设置4个～5个处理组，以确定正式试验的剂量范围。

9.1.2正式试验

9.1.2.1试验设计

根据预试验确定的剂量范围按一定比例间距（几何级差应控制在2.2以内）设置5个~7个处

理组，并设空白对照组，使用有机溶剂、乳化剂、分散剂等助溶的还需增设溶剂对照组。每组3

个重复，每个重复至少10只蜜蜂。

9.1.2.2试验药液配制

如被试物可溶于水，直接用500g/L（50%w/v）蔗糖溶液配制。对于水溶性较低的被试物，

可使用有机溶剂、乳化剂或对蜜蜂毒性较低的分散剂（如丙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等）

助溶。有机溶剂使用量不应超过1%（v/v），且各处理组用量一致。

9.1.2.3染毒

将蜜蜂引入试验笼中，然后在饲喂器（如离心管，注射器等）中加入100µL~200µL试验药

液。待药液消耗完（通常需要3h~4h，最多延长至6h），将饲喂器取出，换喂不含被试物的蔗糖

水（不限量）。

9.1.2.4药液消耗量测定

通过测定染毒前后食物重量计算药液消耗量。

9.1.2.5观察

观察并记录24h、48h后各个处理组和对照组的中毒症状和死亡数。在对照组的死亡率＜10%

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的情况下，处理组24h和48h后的死亡率差异＞10%时，还应将观察时间延长，最多至96h。

9.1.3限度试验

设置上限剂量100µga.i./蜂，即在被试物达100µga.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试

验。

9.1.4参比物质试验

定期（至少6个月一次）进行参比物质急性经口毒性试验。

9.2蜜蜂急性接触毒性

9.2.1预试验

按正式试验的条件，以较大间距设置4个～5个处理组，以确定正式试验的剂量范围。

9.2.2正式试验

9.2.2.1试验设计

根据预试验确定的剂量范围按一定比例间距（几何级差应控制在2.2以内）设置5个～7个处

理组，同时设空白和溶剂对照组，每组3个重复，每个重复至少10只蜜蜂。

9.2.2.2试验药液配制

被试物用丙酮等溶剂溶解，配制成不同浓度的药液。

9.2.2.3染毒

用微量点滴仪将1.0μL试验药液点滴至蜜蜂中胸背板处，晾干后转入试验笼中，用50%蔗糖

水饲喂。

9.2.2.4观察

观察并记录24h、48h后各个处理组和对照组的中毒症状和死亡数。在对照组的死亡率＜10%

的情况下，处理组24h和48h后的死亡率差异＞10%时，还应将观察时间延长，最多至96h。

9.2.3限度试验

设置上限剂量100μga.i./蜂，即在被试物达100μga.i./蜂时仍未见蜜蜂死亡，则无需继续试

验。

9.2.4参比物质试验

定期（至少6个月一次）进行参比物质急性接触毒性试验。

9.3蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验方法

9.3.1暴露条件

按一定比例间距设置至少5个处理组（几何级差应控制在3以内）。同时设置空白对照组、

参比物对照组，使用溶剂助溶时还应增设溶剂对照组。每组均设3个重复，3个重复受试幼虫应

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分别采自3个不同的蜂群。每个重复至少12只蜜蜂幼虫，且各个重复所使用的幼虫数应一致，并

置于同一细胞培养板中，每孔一个育王台基一只幼虫。每组处理组用一个细胞培养板，培养板应

随机摆放。

9.3.2预试验

按正式试验的条件，以5倍~10倍几何级差设置处理组，以确定正式试验的剂量范围。

9.3.3限度试验

设置上限剂量100μga.i./幼虫。处理组、对照组和参比物对照组均设3个重复，3个重复受试

幼虫应分别采自3个不同的蜂群。每个重复至少12只蜜蜂幼虫，且各个重复所使用的幼虫数应一

致，并置于同一细胞培养板中。如果与空白对照组相比，死亡率具有统计学上的显著性差异，应

重新开展正式试验。

9.3.4参比物质试验

每次试验均应设置参比物对照组，乐果暴露剂量为（8.8±0.5）μg/幼虫。

9.3.5试验准备

9.3.5.1含被试物饲料的配制

a）用无菌水或有机溶剂将被试物溶解并稀释至不同浓度，将不同浓度被试物溶液分别与人

工饲料混合制成含被试物饲料。

b）用水溶解被试物的，饲料中被试物溶液的量不应超过最终投喂饲料量的10%（例如，D4

投喂量为30μL最多只能加3μL被试物溶液）。

c）用有机溶剂溶解被试物的，饲料中被试物溶液的量不应超过最终饲料投喂量的5%（例如，

D4投喂量为30μL，最多只能加人1.5μL被试物溶液）。如使用有机溶剂，应增设溶剂

对照组。

9.3.5.2蜜蜂幼虫的室内饲养

在试验开始时将带有1日龄幼虫的蜂脾从蜂群中取出，置于隔离容器中转移到实验室，在通

风橱或其他洁净条件下，从蜂巢中用移虫针或毛笔将幼虫移入已投加饲料A的育王台基，将装有

幼虫的育王台分别放入48孔细胞培养板中。每孔中可添加一段医用牙科棉或脱脂棉用于垫高育王

台基（参见附录B）。所有幼虫每天定时（±0.5h）投喂一次（除第2d），投喂前将饲料预热至

20℃以上，但不得高于35℃。第1d每头幼虫投喂20μL饲料A。第2d不需要投喂，第3d每头

幼虫投喂20μL饲料B。在整个试验过程中，尽可能密闭。

9.3.6染毒

试验流程见附录C。蜜蜂幼虫达到4日龄当天，每头幼虫投喂30μL含被试物的饲料C。每

个培养板装来自1个蜂群的12只幼虫，放在培养箱中密封容器内的单独一层。在放进培养板之前，

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该容器已在培养箱中调节到34℃~35℃。

9.3.7培养与观察

9.3.7.1染毒后24h（D5）、48h（D6）每头幼虫分别投喂40μL、50μL不含被试物溶液的饲料C，

饲喂的同时检查并记录死亡数、中毒症状，取出死亡幼虫。染毒后72h（D7）观察和记录死亡数、

中毒症状。

9.3.7.2判断蜜蜂幼虫死亡的标准为：僵硬不动，或用移虫针、毛笔触碰无反应。

9.3.7.3试验结束时，记录剩余饲料的情况。

9.3.8试验终止

在第7天（D7），在≤-10℃冷冻培养板，试验结束。

10试验数据处理

10.1蜜蜂急性经口和急性接触毒性试验

以表格形式总结数据，给出每个观察时间，处理组和对照组中每个重复的受试蜜蜂数量、死

亡率和中毒症状。以浓度对数为横坐标，以累积死亡百分率对应的概率单位为纵坐标，绘制每个

暴露周期内的剂量-效应曲线，并选择适宜的统计方法和程序估算LD50及其95%置信区间。

10.2蜜蜂幼虫单次暴露毒性试验

10.2.1通过Abbott公式校正后，按公式（1）计算死亡率:

P−T

푀=×100................(1)

100−T

式中：

M--用死亡幼虫数占初始总数（即试验开始时幼虫总数）的百分比表示的校正后的死亡率（%）；

P--被试物处理组的死亡百分比（%）；

T--空白对照组死亡百分比（%）。

10.2.2列表汇总出每个被试物处理组、空白对照组和参比物程序对照组的数据，记录受试幼虫的

数量，D5、D6和D7的死亡数（即分别为被试物处理后的24h、48h和72h）。用适当的统计

学方法（如概率单位法、移动平均、二项式概率等）分析死亡数据。在每个观察时间点绘制剂量

反应曲线（即被试物处理后的24h、48h和72h）在95%置信限计算曲线斜率和半数致死量（LD50）。

用被试物质量与幼虫数量之比表示LD50，单位为ug/幼虫。

11质量控制

11.1蜜蜂急性经口毒性和急性接触毒性试验质量控制条件包括：

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a)试验结束时，对照组死亡率不超过10%；

b)参比物乐果对蜜蜂急性经口试验结果LD50(24h)应在0.10μga.i./蜂～0.35μga.i./蜂范围之

内，乐果对蜜蜂急性接触试验结果LD50(24h)应在0.10μga.i./蜂～0.30μga.i./蜂范围之内。

11.2蜜蜂幼虫急性毒性试验质量控制条件包括：

a)从第4天（D4）到第7天（D7），对照组的幼虫累积校正死亡率应≤15%；

b)到第7天（D7）、用参比物对照组中幼虫累积死亡率应＞50%。

12试验报告

12.1蜜蜂急性经口毒性试验和蜜蜂急性接触毒性试验报告应至少包括下列内容：

a）被试物:

1）供试农药的通用名、化学名称、结构式、CAS号、化学鉴定数据、纯度、来源等；

2）被试物基本理化性质（水中溶解性、溶剂中溶解性、蒸汽压）等。

b）供试生物:

1）供试蜜蜂的引种来源、种属、学名等基本情况；

2）收集试验用蜂的采集方法、采集日期、大概日龄（以周计算）、健康状况、饲养情况、

预处理等。

c）试验条件:

1）试验室的温度以及相对湿度；

2）试验容器条件，包括蜂笼类型、尺寸大小和材质；

3）试验给药方法，包括使用的载体溶剂、使用的试验溶液的体积、使用的麻醉方式等；

4）试验设计，例如，所使用试验浓度和数量，对照组数量，各处理笼重复数以及每笼中蜜

蜂数量；

5）试验开展的地点和日期。

d）试验结果:

1）预试验浓度范围；

2）每个观察时间点死亡率的原始数据；

3）LD50统计分析方法；

4）试验药液的浓度，LD50（24h）、LD50（48h）值和95%置信区间，在对照组的死亡率低

于10%的情况下，若处理24h和48h后的死亡率差异达到10%以上时，还需将观察时间

最多延长至96h，并给出所采用的计算方法；

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5）对照组蜜蜂死亡数量及异常反应；

6）观察到的其他生物效应，如受试蜜蜂的任何不正常的行为（包括供试物达到一定剂量时，

蜜蜂拒食情况）、处理组和对照组食物的消耗率、中毒症状等；

7）对本指南文件的任何偏离及其他相关信息情况的解释。

12.2蜜蜂急性幼虫毒性试验报告应至少包括下列内容：

a）被试物:

1）供试农药的通用名、化学名称、结构式、CAS号、化学鉴定数据、纯度、来源等；

2)被试物基本理化性质（水中溶解性、溶剂中溶解性、蒸汽压）等。

b）供试生物

1)蜜蜂的来源、种类及亚种、来源供应商及所使用的培养条件；

2）试验所用蜂群的健康状况；

c）试验条件

1）试验地点及日期；

2）幼虫试验系统的描述：所用培养板的类型，每个处理组和对照组所用幼虫的数量所用溶剂

及其浓度（如有）,被试物的试验浓度；

3）幼虫试验培养条件：温度（平均值、标准偏差、最大值和最小值）、相对湿度及试验方

法；

4）在每个处理重复死亡的幼虫数量和百分比，参比物（乐果）作为对照组的结果；

5）贮备液中被试物的配制浓度和实测浓度，实测浓度与配制浓度的偏差应在20%范围内；

6）D5、D6和D7的死亡量和D7置信区间为95%的72h-LD50，拟合模型曲线图，浓度-反应

曲线的斜率和标准误差，用于测定LD50的统计学/数学方法；

7）其他观察到的现象，包括试验结束时未吃完的饲料；

8）对本文件的任何偏离及相关解释。

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附录A

(资料性)

蜂王产卵控制器示意图

蜂王产卵控制器示意图见图A.1。

图A.1蜂王产卵控制器示意图

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附录B

(资料性)

蜜蜂幼虫饲养单元孔示意图

B.1幼虫应在透明的聚苯乙烯材质的育王台基（内直径为8.8mm，深度为9.5mm）或聚丙烯材质

的育王台基（内直径为8.5mm，深度为8.3mm）中饲养。育王台基在试验开始时进行杀菌，如可

用酒精或其他杀菌溶液浸泡30min，取出后在通风橱中晾干，将育王台基每个格放置于48孔细胞

培养板的一个小孔中。宜将一片牙科棉吸入加有150g/L甘油的杀菌液500μL放入孔的底部，使育

王台基的顶部与培养板保持水平（见图B.1）。

B.2将这些培养板放入密封的有机玻璃干燥器。为保持干燥器中空气水分饱和，其中放一个盛有

硫酸钾（K2SO4）饱和溶液的培养皿。将干燥器置于一个配有强制空气循环系统的培养箱中，试

验期间，培养箱温度保持在34℃~35℃。

B.3蜜蜂幼虫毒性试验人工饲养单元孔构成见图B.1。

图B.1蜜蜂幼虫毒性试验人工饲养单元孔示意图

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GB/T31270.10-XXXX

附录C

(规范性)

蜜蜂幼虫急性毒性试验流程图

蜜蜂幼虫急性毒性试验流程见图C.1。

图C.1蜜蜂幼虫急性毒性试验流程图

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GB/T31270.10-XXXX

参考文献

[1]OECD(1998a)Guideline213:Honeybees,acuteoraltoxicitytest,OECDGuidelinesforthe

TestingofChemicals.

[2]OECD(1998b)Guideline214:Honeybees,acutecontacttoxicitytest,OECDGuidelinesforthe

TestingofChemicals.

[3]OECD(2013)Guideline237:Honeybee(Apismellifera)larvaltoxicitytest,singleexposure,

OECDGuidelinesfortheTestingofChemicals.

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ICS65.100

CCSB13

中华人民共和国国家标准

GB/T31270.10—××××

代替GB/T31270.10-2014

化学农药环境安全评价试验准则

第10部分：蜜蜂急性毒性试验

Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides-Part10:

Honeybeeacutetoxicitytest

（征求意见稿）

在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。

××××-××-××发布××××-××-××实施

GB/T31270.10-XXXX

化学农药环境安全评价试验准则

第10部分：蜜蜂急性毒性试验

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安

全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本文件规定了蜜蜂急性毒性试验的试验条件、试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、试

验数据处理、质量控制以及试验报告等的基本要求。

本文件适用于为化学农药登记而进行的蜜蜂急性经口毒性试验、急性接触毒性试验和蜜蜂幼

虫单次暴露毒性试验。本文件不适用于易挥发的化学农药。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引

用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

NY/T4195.1农药登记环境影响试验生物试材培养第1部分：蜜蜂

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

半致死剂量medianlethaldose

指在急性经口试验和急性接触以及急性幼虫毒性试验中，引起50％的受试生物死亡时被试物

剂量，用LD50表示.

注：单位为μg./蜂或μg./幼虫。

蜜蜂幼虫larvaofhoneybee

4

GB/T31270.10-XXXX

指蜜蜂卵孵化后至变态化蛹前的虫态。

成年工蜂Adultforagerhoneybee

在蜜蜂种群繁殖期，指蜂群中具备外勤采集能力和行为的蜜蜂。

子脾Broodcomb

蜂群中包含大量蜂卵、不同日龄幼虫以及蛹的巢脾。

4原理

蜜蜂急性经口毒性

将不同剂量的被试物分散在蔗糖溶液中饲喂成年工蜂，药液消耗完后测定药液的消耗量，并

换喂不含被试物的蔗糖溶液。观察、记录48h内蜜蜂的中毒症状及死亡数，处理组24h和48h

的死亡率差异＞10%时，观察时间还应延长至最多