生物医药层析验证员考试试卷与答案

生物医药层析验证员考试试卷与答案单项选择题（每题2分，共10题）1.以下哪种层析介质常用于离子交换层析？A.葡聚糖凝胶B.硅胶C.离子交换纤维素D.琼脂糖凝胶答案：C2.层析柱的理论塔板数越高，说明（）A.分离效果越差B.分离效果越好C.与分离效果无关D.柱效越低答案：B3.用于蛋白质层析分离，最常用的缓冲液pH范围是（）A.2-4B.4-6C.6-8D.8-10答案：C4.亲和层析的原理是（）A.利用分子大小差异B.基于电荷不同C.生物分子间特异性相互作用D.溶解度差异答案：C5.衡量层析分离效率的指标是（）A.分辨率B.回收率C.纯度D.以上都是答案：A6.以下哪种物质不能作为洗脱剂用于层析洗脱？A.水B.高盐溶液C.有机溶剂D.固体颗粒答案：D7.凝胶过滤层析中，小分子物质（）A.先流出层析柱B.后流出层析柱C.与大分子同时流出D.不流出层析柱答案：B8.离子交换层析中，改变洗脱液的什么可以实现物质分离？A.温度B.离子强度C.体积D.颜色答案：B9.等度洗脱适用于（）A.复杂样品分离B.简单样品分离C.所有样品分离D.难分离样品答案：B10.制备型层析的主要目的是（）A.分析成分B.检测纯度C.获得大量目标产物D.研究相互作用答案：C多项选择题（每题2分，共10题）1.常用的层析方法有（）A.吸附层析B.分配层析C.离子交换层析D.亲和层析答案：ABCD2.影响层析分离效果的因素有（）A.层析介质性质B.洗脱条件C.样品浓度D.层析柱的装填答案：ABCD3.下列属于亲和层析配体的有（）A.抗体B.酶底物C.金属离子D.多糖答案：ABC4.离子交换层析中，可作为离子交换剂的有（）A.强酸性阳离子交换树脂B.弱碱性阴离子交换树脂C.纤维素离子交换剂D.葡聚糖离子交换剂答案：ABCD5.凝胶过滤层析的应用包括（）A.蛋白质分子量测定B.脱盐C.蛋白质浓缩D.蛋白质分离纯化答案：ABD6.层析验证的内容包括（）A.系统适用性B.线性C.回收率D.耐用性答案：ABCD7.高效液相层析的特点有（）A.分离效率高B.分析速度快C.灵敏度高D.可自动化答案：ABCD8.用于生物样品层析分离的缓冲液应具备（）A.合适的pHB.一定的离子强度C.良好的化学稳定性D.对生物分子无毒性答案：ABCD9.层析柱装填的要求有（）A.均匀B.紧密C.无气泡D.有一定高度答案：ABC10.洗脱曲线包含的信息有（）A.峰位置B.峰面积C.峰高D.基线答案：ABCD判断题（每题2分，共10题）1.层析过程中，流速越快分离效果越好。（×）2.所有蛋白质都适合用离子交换层析分离。（×）3.亲和层析的特异性很高，可用于复杂体系分离。（√）4.凝胶过滤层析中，柱子越长分辨率越高。（√）5.制备型层析对设备的通量要求较低。（×）6.等度洗脱和梯度洗脱不能在同一实验中使用。（×）7.层析介质使用后可直接重复使用，无需处理。（×）8.离子交换层析中，离子强度越低，洗脱能力越强。（×）9.高效液相层析只能用于分析小分子物质。（×）10.层析验证是确保层析方法可靠的重要环节。（√）简答题（每题5分，共4题）1.简述亲和层析的基本原理。答案：亲和层析基于生物分子间特异性相互作用，如抗原-抗体、酶-底物等。将具有特异性亲和力的配体固定在层析介质上，当样品通过层析柱时，目标物质与配体特异性结合，其他杂质不结合而先流出，再通过改变条件使目标物质与配体解离，从而实现分离。2.列举三种提高层析分辨率的方法。答案：一是选择合适的层析介质，不同介质对物质的保留和分离能力不同；二是优化洗脱条件，如采用合适的洗脱液成分、梯度洗脱等；三是保证层析柱装填均匀紧密，减少柱内的扩散和涡流，提高柱效。3.说明离子交换层析中选择洗脱液的原则。答案：首先要考虑洗脱液的pH，应能改变目标物质的带电状态，使其与离子交换剂的结合力改变；其次是离子强度，合适的离子强度可实现物质的逐步洗脱；此外，洗脱液应不影响目标物质活性，且化学稳定性好，对设备无腐蚀。4.简述凝胶过滤层析分离蛋白质的依据。答案：依据蛋白质分子大小不同。凝胶过滤层析介质有一定孔径范围，大分子蛋白质不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒间隙流过，先流出层析柱；小分子蛋白质可进入凝胶颗粒内部，路径长，后流出层析柱，从而实现按分子大小分离。讨论题（每题5分，共4题）1.在生物医药生产中，层析验证的重要性体现在哪些方面？答案：层析验证确保层析方法的可靠性。能保证产品质量的一致性，验证系统适用性可保证设备和方法达到分离要求；线性验证为定量分析提供准确依据；回收率验证能判断方法对目标物质的提取效率；耐用性验证可确定方法在不同条件下的稳定性，确保生产过程稳定、产品质量合格。2.比较不同层析方法在生物医药领域的应用优势与局限性。答案：吸附层析操作简单，适用于初步分离，但选择性有限。分配层析分离效果较好，可用于多种物质分离，但对固定相和流动相要求高。离子交换层析依据电荷分离，对带电生物分子有效，但受样品带电性质影响大。亲和层析特异性高，能从复杂体系分离目标物，但配体制备成本高。凝胶过滤按分子大小分离，可测分子量、脱盐等，但分辨率有限。3.当层析分离效果不佳时，从哪些方面进行排查和改进？答案：从设备方面排查，检查层析柱是否装填均匀、有无堵塞，泵的流速是否稳定。分析层析介质，看是否选择不当或使用时间长性能下降。洗脱条件也关键，如洗脱液的成分、pH、离子强度及洗脱方式是否合适。此外，样品的预处理是否充分，浓度是否过高也会影响分离效果，需综合考虑改进。4.如何根据目标产物的性质选择合适的层析方法？答案：若目标产物带电，可考虑离子交换层析