2025年临床基因扩增试题及答案

2025年临床基因扩增试题及答案一、单项选择题（每题1分，共30分。每题只有一个最佳答案，请将正确选项字母填入括号内）1.在实时荧光定量PCR中，用于校正不同反应孔间荧光强度差异的常用内参染料是（）A.SYBRGreenIB.ROXC.FAMD.HEX答案：B解析：ROX为被动内参染料，不参与扩增，仅用于校正孔间荧光波动。2.下列哪项不是临床PCR实验室“三区两缓”布局中的“三区”之一（）A.试剂储存与准备区B.标本制备区C.扩增与产物分析区D.办公休息区答案：D解析：办公休息区属于辅助区域，不在核心三区之列。3.关于UNG酶防污染体系，下列说法正确的是（）A.可水解含dUTP的RNA产物B.需在95℃灭活5min以上C.对天然DNA模板无影响D.必须在扩增前加入逆转录酶答案：C解析：UNG仅水解含U的DNA，对天然含T的DNA无作用。4.在ARMS-PCR检测EGFRT790M突变时，引物3′端最末位碱基设计为（）A.AB.TC.CD.G答案：C解析：突变位点C与T790M的T→G突变配对，可特异性延伸。5.数字PCR中，计算拷贝数时不需要的参数是（）A.微滴总数B.阳性微滴数C.扩增效率D.泊松分布校正答案：C解析：数字PCR为终点检测，无需扩增效率参数。6.下列哪种质控品最适合监测核酸提取全过程（）A.弱阳性血清B.含内参的假病毒C.扩增产物稀释液D.无模板对照答案：B解析：假病毒颗粒可模拟真实样本经历提取、逆转录、扩增全过程。7.在CFTR基因ΔF508突变检测中，引物跨越外显子边界的主要目的是（）A.提高Tm值B.避免基因组DNA扩增C.降低二聚体D.增加扩增长度答案：B解析：跨外显子设计可确保仅扩增cDNA，排除gDNA干扰。8.关于qPCR标准曲线，下列哪项错误（）A.斜率反映扩增效率B.R²≥0.99表示线性良好C.截距代表初始模板量D.效率90–110%为可接受范围答案：C解析：截距对应Ct值与Log浓度关系，不直接等于模板量。9.下列哪项不是逆转录酶常见突变改造方向（）A.降低RNaseH活性B.提高热稳定性C.增加3′→5′外切酶活性D.提高持续合成能力答案：C解析：逆转录酶无3′→5′外切校正活性，该改造方向不存在。10.在HBVDNA定量检测中，采用内标法的主要优势是（）A.降低试剂成本B.消除样本抑制物干扰C.缩短扩增时间D.提高荧光强度答案：B解析：内标与靶序列共提取共扩增，可识别抑制导致的假阴性。11.下列哪种荧光探针无需淬灭基团（）A.TaqManB.MolecularBeaconC.ScorpionD.Sunrise答案：D解析：Sunrise引物自淬灭，探针本身不含额外淬灭基团。12.在多重PCR中，引物二聚体最可靠的判断方法是（）A.琼脂糖凝胶电泳B.熔解曲线C.高分辨溶解曲线D.毛细管电泳答案：C解析：HRM可区分1℃差异，准确识别非特异产物。13.关于CRISPR-basedSARS-CoV-2检测，下列哪项正确（）A.必须依赖T7转录B.灵敏度低于qPCRC.可用LFD读取结果D.不能实现定量答案：C解析：Cas12a切割后释放单链DNA报告分子，可在试纸条显色。14.在NGS建库中，磁珠法纯化PCR产物的最佳比例是（）A.0.5×B.0.8×C.1.0×D.1.2×答案：B解析：0.8×可去除引物二聚体同时保留>200bp目标片段。15.下列哪项不是临床PCR报告必须包含的内容（）A.检测方法B.靶基因名称C.扩增仪型号D.结果解释与参考范围答案：C解析：仪器型号属内部记录，无需写入患者报告。16.在HPVE6/E7mRNA检测中，采用NASBA技术的核心酶是（）A.BstDNA聚合酶B.T7RNA聚合酶C.AMV逆转录酶D.以上均需答案：D解析：NASBA需逆转录酶、T7聚合酶及RNaseH协同。17.关于微滴式数字PCR的“合并误差”，正确的处理策略是（）A.增加微滴体积B.降低模板浓度C.使用泊松校正D.提高循环数答案：C解析：高浓度下多模板微滴需泊松公式修正。18.在白血病BCR-ABL1检测中，国际标准化的IS值计算需要（）A.内参基因ABL1拷贝数B.质粒标准品C.国际参考品转换系数D.以上全部答案：D解析：IS值需参考品、转换系数及内参共同计算。19.下列哪项不是荧光定量PCR“基线期”特征（）A.荧光信号呈指数增长B.背景荧光波动小C.Ct值计算起点D.通常设为3–15循环答案：A解析：指数增长为对数期特征，基线期荧光无显著增长。20.在HCVRNA定量检测中，采用一步法逆转录-qPCR的主要优势是（）A.减少开盖污染B.提高逆转录效率C.降低探针成本D.增加熔解曲线功能答案：A解析：一步法将RT与PCR同管完成，减少转移步骤。21.下列哪种突变检测技术不依赖PCR扩增（）A.Sanger测序B.ARMS-PCRC.HRMD.CRISPR-Cas12a答案：D解析：Cas12a可直接识别靶序列并切割报告分子，无需预扩增。22.在PCR反应体系中，K⁺的最适浓度范围是（）A.10–20mmol/LB.30–60mmol/LC.70–100mmol/LD.120–150mmol/L答案：B解析：K⁺30–60mmol/L可稳定引物模板复合物。23.关于TaqManMGB探针，下列说法错误的是（）A.3′端含MGB基团B.可缩短探针长度C.提高Tm值D.5′端标记ROX答案：D解析：MGB探针5′端标记FAM/VIC，ROX为内参染料。24.在PCR实验室生物安全要求中，BSL-2适用于（）A.结核分枝杆菌DNA检测B.肠道病毒RNA检测C.疟原虫DNA检测D.以上全部答案：D解析：上述病原体均属于BSL-2级风险。25.下列哪项不是qPCRCt值的影响因素（）A.引物二聚体B.模板降解C.探针浓度D.报告基因长度答案：D解析：报告基因长度不影响Ct，仅影响最终荧光强度。26.在多重PCR中，平衡各靶点扩增效率的最佳策略是（）A.统一引物长度B.调整引物浓度C.降低退火温度D.增加Mg²⁺浓度答案：B解析：通过浓度梯度优化可补偿效率差异。27.关于环介导等温扩增（LAMP），下列哪项正确（）A.需4条引物B.扩增产物为单链C.依赖Bst酶链置换活性D.需温度循环答案：C解析：LAMP依赖Bst酶在65℃恒温完成链置换。28.在PCR污染监测中，“阴性对照”出现弱阳性条带，最可能原因是（）A.引物降解B.模板浓度过高C.气溶胶污染D.dNTP失效答案：C解析：气溶胶携带扩增产物导致假阳性。29.下列哪种方法可最有效去除PCR产物污染（）A.紫外线照射B.75%乙醇擦拭C.10%次氯酸钠处理D.紫外线+UNG酶联合答案：D解析：紫外线交联+UNG水解可双重清除污染。30.在NGS靶向捕获中，高GC区域覆盖度低的最主要原因是（）A.引物结合困难B.聚合酶延伸受阻C.片段化过度D.磁珠富集偏差答案：B解析：高GC模板易形成二级结构，阻碍聚合酶延伸。二、配伍题（每题1分，共10分。每组选项可重复选用，但每题只有一个最佳答案）A.FAMB.VICC.CY5D.ROXE.HEX31.用于HPV16E6基因检测的TaqMan探针5′端标记（）32.用于内参基因β-globin检测的探针标记（）33.用于多重PCR中通道3的探针标记（）34.用于校正孔间差异的被动染料（）35.常用于CRISPR荧光报告分子的标记（）答案：31A32B33C34D35AA.0.5×磁珠B.1.0×磁珠C.80%乙醇D.10mmol/LTrisE.无核酸水36.用于去除大片段引物二聚体（）37.用于洗脱纯化后DNA（）38.用于磁珠洗涤（）39.用于保留小片段<100bp（）40.用于溶解冻干质粒（）答案：36A37D38C39B40E三、填空题（每空1分，共20分）41.在qPCR中，效率E=10^(-1/斜率)-1，若斜率为-3.32，则效率为________%。答案：10042.数字PCR中，若微滴总数20000，阳性微滴1800，则拷贝数/微滴为________。答案：0.09543.临床PCR实验室空气流向要求为________压差。答案：正-负-负44.依据WHO指南，BCR-ABL1IS值≤________%视为主要分子学反应。答案：0.145.在ARMS-PCR中，引物3′端第-2位引入额外错配的目的是________。答案：增强特异性46.用于RNA提取的Trizol主要成分为________。答案：异硫氰酸胍47.在LAMP反应中，白色沉淀由________副产物形成。答案：焦磷酸镁48.依据CNAS-CL02，PCR检测项目验证最少需________例阳性标本。答案：2049.高分辨熔解曲线区分突变需温度精度达________℃。答案：0.0250.在CRISPR检测中，Cas13a切割的是________链。答案：单链RNA51.用于去除gDNA的DNaseI最适温度为________℃。答案：3752.在NGS文库定量中，Qubit使用________染料。答案：dsDNAHS53.依据CLSIEP17-A2，LoB是指________。答案：空白限54.在PCR反应中，DMSO常用浓度为________%。答案：5–1055.用于长片段扩增的酶具有________结构域。答案：3′→5′外切酶56.在HPV分型中，SPF10引物靶向________基因。答案：L157.依据ISO15189，文件控制需________年复审一次。答案：358.在qPCR中，Ct值标准差>________需重复实验。答案：0.559.用于冻干PCR试剂的赋形剂常用________。答案：海藻糖60.在数字PCR中，微滴体积通常为________nL。答案：0.85四、简答题（每题6分，共30分）61.简述临床PCR实验室发生假阳性常见原因及预防措施。答案：原因：1.气溶胶污染；2.试剂污染；3.操作交叉；4.设备污染。预防：1.严格三区隔离；2.UNG体系；3.阴性对照；4.定期清洁；5.独立器具；6.正压通风。62.说明数字PCR与qPCR在定量原理上的本质区别。答案：qPCR依赖标准曲线与Ct值间接推算，受扩增效率影响；数字PCR将样本分割至单分子水平，通过终点阳性比例直接计数，无需标准曲线，绝对定量且不受抑制物影响。63.列举三种RNA提取后质量评估方法并说明其标准。答案：1.Nanodrop：A260/A280=1.8–2.1；2.Agilent2100：RIN≥7；3.qRT-PCR：内参Ct<30；4.凝胶：28S/18S≈2；5.Qubit：浓度≥50ng/μL。64.简述CRISPR-Cas12a检测临床样本的步骤。答案：1.样本裂解免提取；2.RPA等温扩增；3.Cas12a-crRNA与靶DNA结合；4.反式切割荧光报告分子；5.试纸条或荧光读取；5min完成，灵敏度达10拷贝。65.说明多重PCR引物设计的关键原则。答案：1.各引物Tm差<2℃；2.产物长度差>50bp；3.避免引物间互补；4.优化浓度平衡效率；5.探针染料通道无串扰；6.共用热循环条件；7.软件验证二聚体。五、案例分析题（每题10分，共30分）66.患者男，58岁，CML，服用伊马替尼3个月，BCR-ABL1定量结果：外周血IS值1.2%，ABL1内参拷贝数32000，实验室转换系数0.89。分析是否达到治疗里程碑并给出建议。答案：IS值1.2%高于早期分子学反应（EMR）≤10%，但高于最佳≤0.1%，提示疗效不佳。建议：1.依从性评估；2.突变检测（T315I）；3.考虑换用二代TKI；4.1个月后复查。67.某实验室新开发HPV16/18E6mRNA检测，验证时发现阴性对照多次Ct35–36，阳性对