（正式版）DB6111∕T 171-2021 《草莓脱毒苗育苗技术规程》

ICS65.020.20CCSB61DB6111杨凌农业高新技术产业示范区地方标准Technicalstandardforvirus-freebreedingofstrawberryseedlings杨凌示范区市场监督管理局发布IDB6111/T171—2021本文件依据GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》起草。本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司提出。本文件由杨凌示范区农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学、蛟河市草莓研究所。本文件主要起草人：赵磊、李怀财、刘占杰、巨兴耀、吴云锋。本文件由杨凌龙德盛农业科技有限公司、西北农林科技大学负责解释。联系人：赵磊联系方式18792627895联系地址：杨凌示范区邰城路3号DB6111/T171—20211草莓脱毒苗育苗技术规程本文件规定了草莓脱毒苗育苗技术的术语与定义、脱毒原原种苗、脱毒原种苗和脱毒商品苗的生产技术。本文件适用于杨凌示范区草莓脱毒苗的培育管理。生态环境、物候条件相似地区可参考执行。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T406-2000脱毒草莓种苗病毒检测技术规程3术语和定义下列术语与定义适用于本文件。3.1茎尖培养脱毒methodforviruseliminationbyshoottipculture用植株茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。3.2超低温脱毒methodforviruseliminationbycryotherapy植株茎尖经过预培养、冷冻保护剂（PVS2）处理、液氮冷冻、复苏后组织培养，获得脱毒植株的过程。3.3热处理脱毒thermotherapy-basedmethodforviruseradication组培苗在35℃~40℃条件下，光照继代培养1个月～2个月，取茎尖经组织培养获得脱毒植株的过程。3.4脱毒原原种苗breeder’sviruseradicationstock经脱毒处理的原始植株。3.52DB6111/T171—2021脱毒原种苗originalviruseradicationstock用脱毒原原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。3.6脱毒商品苗viruseradicationculturestock用脱毒原种苗匍匐茎繁殖出的脱毒植株。4脱毒原原种苗生产4.1外植体建立在封闭无害虫的设施内选择表现品种特性的健壮待脱毒植株，采集2cm匍匐茎顶端，置于组培瓶中，加入适量中性洗涤剂在流动的自来水下冲洗1h～2h。用75%乙醇表面消毒30s，再用2%次氯酸钠溶液消毒10min，无菌水冲洗5遍。用滤纸吸干水分，将茎尖置于MS＋0.1mg/LNAA＋0.5mg/L6-BA＋8g/L琼脂＋30g/L蔗糖(pH5.8)培养基中无菌培养1个月左右。培养条件为温度23℃,光照时间16h/d，光照强度2400Lx。4.2病毒检测培养得到的外植体，按NY/T406-2000的规定检测病毒。4.3检测后处理4.3.1无毒外植体直接作为脱毒苗原原种使用。4.3.2带毒外植体4.3.2.1茎尖培养经检测只携带草莓轻型黄边病毒的外植体，在超净工作台中用无菌刀片切取0.2mm～0.5mm生长点茎尖，接种到MS＋0.05mg/LNAA＋0.3mg/L6-BA＋8g/L琼脂＋30g/L蔗糖培养基中，在23℃,光照时间16h/d，光照强度2400Lx条件下培养50d～60d。注：超净工作台使用前打开紫外消毒灯消毒30min，关闭紫外灯，打开风机用中等风量通风1h后方可使用。无菌刀片使用前，用75%酒精消毒，再在酒精灯上烧1min以上，冷4.3.2.2超低温脱毒经检测携带草莓斑驳病毒（strawberrymottlevirus,SMoV）或同时携带草莓斑驳病毒与草莓轻型黄边病毒（strawberrymildyellowedgevirus,SMYEV）的组培苗，在超净工作台中用无菌刀片切取1.0mm～2.0mm草莓生长点茎尖，接种到MS＋2mol/L甘油＋0.3mol/L蔗糖的预培养基上，在4℃黑暗条件下培养3d。切取1.0mm～2.0mm茎尖，在室温下用60%PVS2（含0.6mol/L蔗糖的MS与100%PVS2体积比2:3混合）加载40min，更换100%PVS2于0℃条件下处理1h。将茎尖转移至装有新鲜100%PVS2冷冻管中，投入液氮30min～60min。在40℃水浴锅中解冻2min，用MS＋1.2mol/L蔗糖培养基冲洗DB6111/T171—202132～3次，每次10min。将茎尖置于MS＋0.05mg/LNAA＋0.3mg/L6-BA＋8g/L琼脂＋30g/L蔗糖培养基中，在23℃下黑暗培养1周，转入23℃、光照时间16h/d、光照强度2400Lx环境下培养50d～60d。4.3.2.3热处理经检测携带草莓镶脉病毒（strawberryveinbandingvirus,SVBV）或同时携带草莓镶脉病毒及其它病毒的外植体，将组培苗置于白天36℃、黑夜32℃,光照时间16h/d，光照强度2400Lx的条件下培养30d。在超净工作台中用无菌刀片切取0.5mm左右的草莓生产点茎尖，接种到MS＋0.05mg/LNAA+0.3mg/L6-BA＋8g/L琼脂＋30g/L蔗糖培养基中，在23℃、光照时间16h/d、光照强度2400Lx的条件下培养50d～60d。4.4茎尖分化按照4.4处理过的茎尖分化成带有叶原基的小芽后，转移到新的分化培养基中。长出叶片后，转移到MS＋0.05mg/LBA＋0.02mg/LIBA＋0.1mg/LGA3＋8g/L琼脂＋30g/L蔗糖中，在23℃、光照时间16h/d、光照强度2400Lx的条件下培养50d～60d。4.5病毒检测茎尖分化成苗后，按NY/T406-2000的规定检测病毒。4.6检测后处理淘汰带毒植株，保留无毒植株。4.7无毒植株培育4.7.1生根无毒植株剪去基部小芽，接种于1/2MS＋0.1mg/LIBA＋6g/L琼脂＋30g/L蔗糖的生根培养基中，在23℃、光照时间16h/d、光照强度2400Lx的条件下培养30d～40d后。4.7.2移栽在100目防虫网温室中练苗7d。取出组培苗，用清水冲洗干净培养基，移栽于穴盘中（培养基质配方为草炭土：蛭石：椰糠=1:1:1）。置于有100目防虫网的温室中，在穴盘上搭建小拱棚，覆盖塑料薄膜，控制温度15℃~25℃。移栽后7d内湿度保持在80%以上，7d后逐渐降低湿度。生长50d～60d即获得可定植的脱毒原原种苗。5脱毒原种苗生产脱毒原原种苗抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定，保证通风透光。匍匐茎抽生出的苗即为脱毒原种苗。6脱毒商品苗生产6.1生产方式脱毒原种苗在100目防虫网室中抽生匍匐茎后，疏理匍匐茎蔓，使其伸展分布在子苗槽内并固定，保证通风透光。匍匐茎抽生出的苗即为脱毒商品苗。DB6111/T171—202146.2培育管理水肥要小水勤浇，脱毒原种苗定植20d后开始冲施水溶肥，每次冲施5kg/667m2。第一次N:P:K比例为15:15:15；10d后冲施第二次，N:P:K比例为15:10:10；20d后冲施第三次，N:P:K比例为15:8:30。匍匐茎大量发生时期，冲施3次含腐殖酸的水溶肥，每次5kg/667m2，N:P:K比例为15:15:15，每次间隔10d。及时摘除枯黄老叶、残叶。6.3起苗一般在每年的8月中旬到9月中旬，苗龄90d～120d时，根据生产需