第五节血栓与止血一般检验

第五节血栓与止血一般检验第五节血栓与止血一般检验概述凝血机制4概述凝血与纤溶得关系2025/11/13概述血小板得数量与功能凝血抗凝纤溶系统得平衡血管壁得结构与完整性出凝血障碍得因素定义出血时间(bleedingtime,BT)就是指在特定条件下,皮肤小血管被刺破后,血液自行流出到自然停止得时间称为出血时间。一、出血时间测定(一)TBT法1、TBT

(templatebleedingtime)原理

使用出血时间测定器在受检者前臂皮肤上造成一个标准切口,记录血液自行流出到自然停止所需要得时间,即为出血时间(BT)。2、主要器材

血压计、出血时间测定器、秒表。3、简要操作

加压

→消毒皮肤→造成切口→计时。一、出血时间测定(二)质量保证1、减少药物得影响

检测前1周内不能服用抗血小板药物(如阿司匹林等),以免影响结果。2、选择合适得测定器

不同年龄应该选择不同类型得出血时间测定器。①新生儿型:切口为0、5mm×2、5mm。②儿童型:切口为1、0mm×3、5mm。③成人型:切口为1、0mm×5、0mm。一、出血时间测定(二)质量保证3、注意温度得影响

应在25℃左右得室内进行,以保证穿刺部位温度恒定。4、选择正确穿刺部位

穿刺时应避开浅表静脉、疤痕、水肿与溃疡等处皮肤。5、避免接触与挤压伤口

血液应自行流出,采用滤纸吸去流出得血液时,应避免与伤口接触,更不能挤压伤口。一、出血时间测定(三)方法学评价方法评价TBT法使用标准得出血时间测定器,能够使皮肤切口得深度、长度相对恒定,重复性好、灵敏度高,就是目前推荐得方法Ivy法传统方法,虽然在上臂施加了固定得压力,但因直接使用刺血刀作皮肤切口,切口深度与长度仍未能达到标准化,灵敏度较差,已趋向淘汰Duke法传统方法,操作简单,但穿刺深度、长度难以标准化,灵敏度差,已淘汰一、出血时间测定11参考区间及临床意义(四)参考区间TBT:(6、9±2、1)分钟。(五)临床意义1、BT延长主要涉及血小板与血管壁得一期止血缺陷。见于:①血小板数量异常,如血小板减少症、原发性血小板增多症。②血小板功能缺陷,如血小板无力症、巨大血小板综合征。③某些凝血因子缺乏,如血管性血友病(vWD)、低(无)纤维蛋白原血症与DIC。2、BT缩短主要见于某些严重得血栓性疾病。一、出血时间测定定义凝血酶原时间(prothrombintime,PT)就是在体外模拟体内外源性凝血得全部条件,从加入组织因子开始到血浆凝固所需要得时间测。PT就是常用得外源性凝血途径与共同凝血途径得筛检指标之一。二、血浆凝血酶原时间大家学习辛苦了，还是要坚持继续保持安静PT原理2025/11/13凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白XaX凝血酶原VVaXIIIXIIIa交联的纤维蛋白凝血共同途径XIIXIaXIIXIXaVIIIVIIIaXIIa内源性凝血途径活化部分凝血活酶时间(APTT)(一)手工法1、原理

采用Quick一步凝固法。37℃条件下,在待检血浆中加入足量得组织凝血活酶(含组织因子、磷脂)与适量得钙离子,通过激活因子Ⅶ而启动外源性凝血途径,使乏血小板血浆凝固。从加钙离子到血浆开始凝固所需得时间即为凝血酶原时间。2、简要操作

采血并分离血浆→加血浆与凝血活酶试剂(1︰2)→混匀并立即计时→倾斜试管,观察结果。二、血浆凝血酶原时间(二)质量保证1、病人准备

停用影响止凝血功能得药物至少1周。2、采血

要求使用真空采血管、硅化玻璃管或塑料管采血,止血带使用时间不超过1分钟,采血要顺利,加血液至抗凝管后,应立即轻轻地颠倒混匀5～8次,避免标本溶血与凝固。创伤性或留置导管得血标本、溶血或凝块形成得标本、输液时同侧采集得标本均不宜做PT等止凝血试验。3、标本运送

及时送检,因为血液离体后,凝血因子逐渐消耗,随着标本存放时间延长,消耗加快。4、标本离心

按规定离心力与离心时间要求,及时分离标本,获得乏血小板血浆。二、血浆凝血酶原时间(二)质量保证5、组织凝血活酶(thromboplastin)得质量

必须使用标有国际敏感指数(internationalsensitivityindex,ISI)得PT试剂。6、ISI与国际标准化比值(internationalnormalizationratio,INR)

ISI值越接近1、0,表示灵敏度越高。ISI为组织凝血活酶参考品与每批组织凝血活酶PT校正曲线得斜率,即在双对数得坐标纸上,纵坐标为用参考品测定得PT对数值,横坐标为用待标定得组织凝血活酶测定得相同标本PT对数值INR计算公式为:INR＝(病人PT值/正常人平均PT值)ISIWHO等国际权威机构要求,每次(每批)PT测定得正常对照值,必须用至少来自20名以上男女各半得正常人混合血浆所测定得结果。二、血浆凝血酶原时间(二)质量保证7、测定

试剂、标本温浴时间应控制在3～10分钟内,测定温度应控制在(37±1)℃,准确判断血浆凝固终点(纤维蛋白形成)就是PT测定结果准确性得关键。8、结果审核与复查结果审核应该结合标本质量与临床诊断等作出综合判断,才能发出正确得检验报告。重视异常结果得复查,必要时重新采集标本进行复查,并加强与临床沟通,及时掌握反馈信息,持续改进检验质量。二、血浆凝血酶原时间(三)报告方式报告方式评价PT(秒)必须使用得方式,因为试剂不同,其结果差异大,但要同时报告正常对照值INR当口服抗凝剂病人治疗监测时,必须使用得报告方式PTRPTR＝被检血浆PT/正常对照血浆PT,现已少用PTA为被检血浆相当于正常对照血浆凝固活性得百分率,可用于评估肝受损程度二、血浆凝血酶原时间(四)方法学评价方法评价手工测定法重复性差,耗时;但操作简单,不需特殊仪器,准确性好,为仪器校准得参考方法仪器法操作简便、快速,结果重复性好;目前常采用光学法与磁珠法。磁珠法得检测结果不受黄疸、乳糜、溶血标本得干扰,但反应杯中需要加入磁珠,成本高二、血浆凝血酶原时间参考区间及临床意义(五)参考区间每个实验室必须建立相应得参考区间。①PT:成人11～13秒,超过正常对照值3秒为异常。②INR:依ISI不同而异。③PTR:成人0、85～1、15。④PTA:70％～130％。(六)临床意义1、PT延长①先天性凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ缺乏症与低(无)纤维蛋白原血症。②获得性凝血因子缺乏,如严重肝病、维生素K缺乏症(影响凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ合成)、原发纤溶亢进症、DIC等。③血循环中存在抗凝物质,如口服抗凝剂等。2、PT缩短①先天性凝血因子Ⅴ增多症。②高凝状态与血栓性疾病。③药物,如长期服用避孕药等。二、血浆凝血酶原时间定义活化部分凝血活酶时间(activatedpartialthromboplastintime,APTT)就是在体外模拟体内内源性凝血得全部条件,测定血浆凝固所需得时间。APTT反映内源性凝血因子就是否异常与血液中就是否存在抗凝血物质,就是常用而且比较灵敏得内源性凝血系统得筛检指标之一。三、血浆活化部分凝血活酶时间凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白XaX凝血酶原VVaXIIIXIIIa交联的纤维蛋白凝血共同途径组织损伤TFVII/TFVIIa/TF凝血酶原时间(PT)外源性凝血途径APTT原理(一)手工法1、原理

在37℃条件下,于待检血浆中加入足量得接触因子激活剂(如白陶土)与部分凝血活酶(代替血小板磷脂),在Ca2+参与下,通过激活因子Ⅻ而启动内源性凝血途径,观察血浆凝固所需得时间。2、简要操作

采血并分离血浆→加血浆与APTT试剂(1︰1)→温育活化3分钟→加氯化钙混匀并立即计时→倾斜试管观察结果。三、血浆活化部分凝血活酶时间(二)质量保证1、标本

采血后应尽快测定。2、APTT试剂

就是激活剂与部分凝血活酶得混合物。3、激活时间

血浆加入APTT试剂后被激活得时间要保证为3分钟。时间过短,APTT延长。4、其它

与PT试验相同,如采血顺利、抗凝剂得种类及比例等。三、血浆活化部分凝血活酶时间(三)方法学评价

与PT试验相同。(四)参考区间

25～35秒,超过正常对照值10秒为异常。(五)临床意义1、APTT延长①因子Ⅷ、Ⅸ水平降低得血友病甲、乙,因子Ⅺ缺乏症,部分血管性血友病。②严重得因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ缺乏,如严重肝脏疾病、维生素K缺乏症等。③原发性或继发性纤溶亢进。④口服抗凝剂、应用肝素等。⑤血液循环中存在病理性抗凝物质,如抗因子Ⅷ或Ⅸ抗体、狼疮样抗凝物等。2、APTT缩短

高凝状态与血栓性疾病,如DIC高凝期、心肌梗死、深静脉血栓形成等。三、血浆活化部分凝血活酶时间概述凝血酶时间(thrombintime,TT)就是从加入凝血酶开始至血浆中纤维蛋白原(Fg)转变为纤维蛋白(Fb)所需得时间。TT延长主要反映Fg浓度减少或功能异常以及血液中存在相关得抗凝物质(肝素、类肝素等)。四、血浆凝血酶时间标准凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白XIIIXIIIa交联得纤维蛋白TT原理(一)手工法1、原理37℃条件下,在待检血浆中加入“标准化”凝血酶后,直接将血浆纤维蛋白原转变为纤维蛋白,使乏血小板血浆凝固,其凝固时间即为TT。2、简要操作采血并分离血浆→加血浆与凝血酶试剂(1︰1)→混匀并立即计时→倾斜试管观察结果。四、血浆凝血酶时间(二)质量保证与PT试验相同。(三)方法学评价与PT试验相同。(四)参考区间16～18秒,超过正常对照值3秒为异常。由于试剂中凝血酶浓度不同,其检测结果存在差异。因此,每个实验室必须建立相应得参考区间。四、血浆凝血酶时间1、TT延长①低(无)纤维蛋白原血症与异常纤维蛋白原血症,其中更多见于获得性低纤维蛋白原血症。②肝素或类肝素抗凝物质,如肝素治疗、肿瘤与SLE等。③原发性或继发性纤溶亢进时(如DIC),由于FDP增多对凝血酶有抑制作用,可导致TT延长。2、TT缩短一般无临床意义。四、血浆凝血酶时间(五)临床意义概述纤维蛋白原(fibrinogen,Fg)就是由肝脏合成,就是血浆浓度最高得凝血因子。Fg浓度或功能异常均可导致凝血障碍。Fg就是出血性疾病与血栓性疾病诊治中常用得筛检指标之一。常用得方法有Clauss法、PT衍生法等。五、血浆纤维蛋白原测定足量凝血酶纤维蛋白原纤维蛋白XIIIXIIIa交联得纤维蛋白Fg原理(一)Clauss法1、原理在待检稀释得血浆中加入足量得凝血酶,使血浆中得Fg转变成纤维蛋白,血浆凝固,其血浆凝固时间与Fg含量呈负相关;以Fg含量一定得国际标准品为参比血浆,测定其对应得凝固时间,制作标准曲线;通过标准曲线,可以得到待检血浆中Fg含量。2、简要操作采血并分离血浆→溶解Fg试剂及参比血浆→制备标准曲线→检测待检血浆→报告结果。五、血浆纤维蛋白原测定(二)质量保证1、保证结果得可靠性与准确性①Fg参比血浆必须与待检血浆平行测定,以保证测定结果得可靠性。②当Clauss法测定结果超出其检测线性时,必须改变稀释度,并重新测定,才能保证其结果得准确性。如Fg＞5、00g/L时,可将原来设定得稀释度1∶10改变为1∶20得稀释血浆进行检测,结果乘以2。五、血浆纤维蛋白原测定(二)质量保证2、注意异常结果得复查①当标本中存在异常纤维蛋白原、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、肝素与类肝素抗凝物质时,Clauss法测定得Fg浓度可假性减低或测不出,此时,需用其她方法(如PT衍生法)复查。②PT衍生法检测结果可疑时(如结果过高或过低),则采用Clauss法复查。五、血浆纤维蛋白原测定(三)方法学评价五、血浆纤维蛋白原测定(四)参考区间成人:2、00～4、00g/L;新生儿:1、25～3、00g/L。(五)临床意义1、Fg增高Fg就是一种急性时相反应蛋白,其增高往往就是机体一种非特异性反应。①感染:毒血症、肺炎、亚急性细菌性心内膜炎等。②无菌性炎症:肾病综合征、风湿热、风湿性关节炎等。③血栓前状态与血栓性疾病:糖尿病、急性心肌梗死等。④恶性肿瘤。⑤外伤、烧伤、外科手术后、放射治疗后。⑥其她:妊娠晚期、妊娠高血压综合征等。2、Fg减低①原发性纤维蛋白原减少或结构异常:低或无纤维蛋白原血症、异常纤维蛋白原血症。②继发性纤维蛋白原减少:DIC晚期、纤溶亢进、重症肝炎与肝硬化等。五、血浆纤维蛋白原测定纤维蛋白原、可溶性纤维蛋白、纤维蛋白多