DBS52- 023-2017 食品安全地方标准 食品中13 种水溶性合成着色剂的测定

DBS520232017食品安全地方标准食品中13种水溶性合成着色剂的测定本标准规定了食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、赤藓红、喹啉黄、专利蓝V、酸性蓝74和靛蓝等13种水溶性合成着色剂的高效液相色谱测定方法。本标准适用于各类食品中上述13种水溶性合成着色剂的测定。本标准的第一法为高效液相色谱二极管阵列检测器法，第二法为高效液相色谱串联质谱法。第一法适用于食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、赤藓红、喹啉黄、专利蓝V、酸性蓝74和靛蓝的测定；第二法适用于食品中柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、酸性红、赤藓红、喹啉黄、专利蓝V、酸性蓝74和靛蓝的确证和定量分析。本标准的方法检出限为：柠檬黄0.5mg/kg，新红0.5mg/kg，苋菜红0.5mg/kg，胭脂红0.5mg/kg，日落黄0.5mg/kg，诱惑红0.5mg/kg，亮蓝0.5mg/kg，酸性红0.5mg/kg，赤藓红0.5mg/kg，喹啉黄0.5mg/kg，专利蓝V0.5mg/kg，酸性蓝740.5mg/kg，靛蓝0.5mg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T5009.1食品卫生检验方法理化部分总则GB/T27404实验室质量控制规范食品理化检测3原理3.1第一法高效液相色谱二极管阵列检测器法试样中的水溶性合成着色剂经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，浓缩后用高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。3.2第二法高效液相色谱串联质谱法试样中的水溶性合成着色剂经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化，浓缩后用高效液相色谱分离，串联质谱检测，外标法定量。4试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1试剂4.1.1甲醇（CH₃OH）：色谱纯。4.1.2乙腈（CH₃CN）：色谱纯。4.1.3乙酸铵（CH₃COONH₄）：色谱纯。4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.5氨水（NH₃·H₂O）：质量分数25%~28%。4.1.6乙酸（CH₃COOH）：色谱纯。4.2标准品4.2.1柠檬黄（C₁₆H₉N₄Na₃O₉S₂）：纯度≥95%。4.2.2新红（C₁₈H₁₄N₂Na₂O₇S₂）：纯度≥95%。4.2.3苋菜红（C₂₀H₁₁N₂Na₃O₁₀S₃）：纯度≥95%。4.2.4胭脂红（C₂₀H₁₁N₂Na₃O₁₀S₃）：纯度≥95%。4.2.5日落黄（C₁₆H₁₀N₂Na₂O₇S₂）：纯度≥95%。4.2.6诱惑红（C₁₈H₁₄N₂Na₂O₈S₂）：纯度≥95%。4.2.7亮蓝（C₃₇H₃₄N₂Na₂O₉S₃）：纯度≥95%。4.2.8酸性红（C₂₀H₁₃N₂NaO₅S）：纯度≥95%。4.2.9赤藓红（C₂₀H₆I₄Na₂O₅）：纯度≥95%。4.2.10喹啉黄（C₁₈H₉NNa₂O₈S₂）：纯度≥95%。4.2.11专利蓝V（C₂₇H₃₁N₂NaO₆S₂）：纯度≥95%。4.2.12酸性蓝74（C₂₂H₁₄N₂Na₂O₉S₂）：纯度≥95%。4.2.13靛蓝（C₁₆H₈N₂Na₂O₈S₂）：纯度≥95%。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器。5.2高效液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg。5.4离心机：转速≥4000r/min。5.5旋涡混合器。5.6超声波清洗器。5.7氮吹仪。5.8固相萃取装置。5.9有相滤膜：0.22μm。5.10pH计：精度±0.02。5.11容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。5.12移液器：100μL、200μL、500μL、1000μL。6试样制备与保存6.1试样制备6.1.1液体试样：摇匀后直接取样或稀释后取样。6.1.2半固体试样：均质后取样。6.1.3固体试样：粉碎后过20目筛，混匀后取样。6.2试样保存7分析步骤7.1提取称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL甲醇水（1:1，v/v）溶液，涡旋混匀2min，超声提取20min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至另一离心管中。残渣重复提取一次，合并上清液。7.2净化7.2.1将提取液通过已活化的HLB固相萃取柱（200mg，6mL），流速控制在1mL/min~2mL/min。7.2.2用5mL甲醇水（1:9，v/v）溶液淋洗，弃去淋洗液。7.2.3用5mL甲醇洗脱，收集洗脱液。7.2.4将洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水（1:1，v/v）溶液溶解残渣，过0.22μm有机滤膜，供高效液相色谱测定。7.3仪器条件7.3.1第一法高效液相色谱条件7.3.1.1色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）或等效柱。7.3.1.2流动相：A为0.02mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸），B为乙腈。7.3.1.3梯度洗脱程序：0min，5%B；5min，15%B；10min，25%B；15min，35%B；20min，50%B；25min，5%B；30min，5%B。7.3.1.4流速：1.0mL/min。7.3.1.5柱温：30℃。7.3.1.6进样量：10μL。7.3.1.7检测波长：254nm、420nm、620nm。7.3.2第二法高效液相色谱串联质谱条件7.3.2.1色谱柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.7μm）或等效柱。7.3.2.2流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈。7.3.2.3梯度洗脱程序：0min，5%B；2min，15%B；5min，25%B；8min，35%B；10min，50%B；12min，5%B；15min，5%B。7.3.2.4流速：0.3mL/min。7.3.2.5柱温：40℃。7.3.2.6进样量：5μL。7.3.2.7离子源：电喷雾离子源（ESI）。7.3.2.8扫描方式：正离子扫描。7.3.2.9检测方式：多反应监测（MRM）。7.3.2.10雾化气、碰撞气等参数根据仪器型号进行优化。7.4标准曲线的制备7.5测定取7.2处理后的试样溶液和标准工作溶液，在相同条件下进行测定，保留时间定性，峰面积外标法定量。8结果计算试样中水溶性合成着色剂的含量按式（1）计算：X=(c×V)/m式中：X——试样中水溶性合成着色剂的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——从标准曲线上查出的试样溶液中水溶性合成着色剂的浓度，单位为毫克每升（mg/L）；V——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。10回收率本方法的添加回收率范围为85%~110%。11质量控制11.1每批试样分析时应同时进行空白试