DB34-T 1360-2019 饲料中地克珠利的测定 高效液相色谱法

DB34/T13602019饲料中地克珠利的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了饲料中地克珠利含量测定的高效液相色谱法。本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、预混合饲料和精料补充料中地克珠利的测定。本方法的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。2原理试样中的地克珠利用乙腈水溶液提取，经固相萃取柱净化，采用高效液相色谱紫外检测器测定，外标法定量。3试剂与材料除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1乙腈：色谱纯。3.2甲醇：色谱纯。3.3甲酸：色谱纯。3.4乙腈水溶液（20+80，V/V）：量取200mL乙腈，加入800mL水，混匀。3.5乙腈水溶液（50+50，V/V）：量取500mL乙腈，加入500mL水，混匀。3.60.1%甲酸水溶液：量取1mL甲酸，加入999mL水，混匀。3.7地克珠利标准品：纯度≥98.0%。3.8地克珠利标准储备液：准确称取地克珠利标准品10.0mg（精确至0.1mg），置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，配制成100μg/mL的标准储备液，4℃避光保存，有效期3个月。3.9地克珠利标准工作液：准确吸取适量地克珠利标准储备液，用乙腈水溶液（20+80，V/V）逐级稀释成浓度为0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准工作液，现用现配。3.10固相萃取柱：C18固相萃取柱，500mg/6mL，或相当者。3.11微孔滤膜：0.22μm，有机相。4仪器与设备4.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。4.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。4.3离心机：转速≥4000r/min。4.4涡旋混合器。4.5超声波清洗器。4.6氮吹仪。4.7固相萃取装置。4.8组织匀浆机。4.9pH计：精度±0.02。4.10容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。4.11移液器：100μL、200μL、500μL、1000μL。4.12具塞离心管：50mL。4.13一次性注射器：5mL。5试样制备与保存5.1试样制备取具有代表性的饲料样品约500g，用组织匀浆机粉碎，使其全部通过0.45mm孔径的分析筛，混匀后装入洁净容器中，密封备用。5.2试样保存试样在室温下避光保存，如需长期保存，应置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超过30天。6分析步骤6.1提取称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL具塞离心管中，加入20mL乙腈水溶液（50+50，V/V），涡旋混合2min，超声提取15min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至另一洁净容器中。残渣重复提取一次，合并上清液，待净化。6.2净化将固相萃取柱依次用5mL甲醇和5mL水活化，取10mL提取液过柱，用5mL水淋洗，抽干。用5mL乙腈洗脱，收集洗脱液于10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，混匀。取适量过0.22μm微孔滤膜，供高效液相色谱测定。7色谱条件7.1色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相当者。7.2流动相：乙腈0.1%甲酸水溶液（40+60，V/V）。7.3流速：1.0mL/min。7.4柱温：30℃。7.5检测波长：240nm。7.6进样量：20μL。7.7运行时间：15min。8结果计算8.1标准曲线绘制将地克珠利标准工作液按色谱条件进行测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。8.2试样测定8.3结果计算试样中地克珠利的含量按式（1）计算：X=(c×V×f)/m式中：X——试样中地克珠利的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c——从标准曲线上查出的试样溶液中地克珠利的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；V——试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；f——稀释倍数；m——试样质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。9精密度9.1重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9.2再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。10检出限和定量限本方法的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。11回收率在0.15mg/kg、0.50mg/kg、2.00mg/kg三个添加水平下，地克珠利的回收率范围为85%~105%。12注意事项12.1实验