DB4201∕T 530-2017 名优樱花组织培养快速繁殖技术规程

ICS65.020.20

B05

DB4201

武汉市地方标准

DB4201/T530—2017

名优樱花组织培养快速繁殖技术规程

2017-06-20发布2017-07-20实施

武汉市质量技术监督局发布

DB4201/T530-2017

前言

本规程按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本规程由江汉大学、武汉法雅园林集团有限公司提出。

本规程由武汉市农业科学技术研究院归口。

本规程起草单位：江汉大学、武汉法雅园林集团有限公司。

本规程主要起草人：蒋细旺、况红玲、戴希刚、张灵灵、徐海芹、张兵、姚中华、徐建刚、陆露、

翟敬华。

I

DB4201/T530-2017

名优樱花组织培养快速繁殖技术规程

1范围

本规程规定了武汉地区名优樱花的种类或品种及组织培养快速繁殖技术的启动培养、增殖培养、生

根培养、炼苗和移栽、组培苗的田间管理的要求。

本规程适用于武汉地区名优樱花组织培养快速繁殖，立地条件相近地区亦可参照执行。

2种类或品种

适宜本地栽植，观赏性、抗性强樱花种类或品种，如：山樱花（Cerasusserreulat）、染井吉野

（C.ⅹyedoensis）、日本晚樱‘杨贵妃’(C.serrulatavar.lannesiana‘Mollis’）、‘醉红’

（C.serrulatavar.lannesiana‘Zuihong’）等。

3组织培养快速繁殖技术

3.1启动培养

3.1.1茎段外植体的获得

将嫩枝剪成6cm～10cm的茎段，室内用清水将材料洗净，自来水冲洗0.5h～2h，在超净台上用

70％的酒精浸泡40s，用无菌水冲洗4次；再用0.1％的升汞浸泡10min，无菌水冲洗5次。用滤纸吸

干，将材料切成1cm～2cm带一个腋芽的茎段。

3.1.2芽的启动与形成

3.1.2.1培养基组成

以MS为基本培养基，将茎段接种于启动培养基MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L＋蔗糖30g/L＋

琼脂6g/L，pH5.8～6.0（用0.1mol/L的HCl或NaOH调节）。MS培养基配方见附录A。

3.1.2.2培养基制备

培养基先配制，装大瓶，连直径90mm的圆形玻璃培养皿一起用蒸汽高压灭菌锅121℃灭菌20min，

再无菌分装，每个培养皿约含30ml的培养基。腋芽萌发用灭菌培养皿培养。

3.1.2.3培养条件

培养室温度（25±2）℃，日光灯光源，光照强度1500lx～2000lx，光照周期16d。

3.1.2.4接种

茎段外植体采用水平接种。

3.1.2.5芽的萌动与生长

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培养4周～5周后形成芽，直至幼苗高6cm～8cm。

3.2增殖培养

3.2.1培养基组成

当植株长至6cm～8cm时，将植株切成带1个节～2个节的茎段进行增殖。接种到增殖培养基

WPM+KT1.0mg/L+IBA0.1mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂6g/L＋0.5g/L的活性炭颗粒，pH5.8～6.0。

WPM培养基配方（pH5.2）见附录B

3.2.2培养基制备

增殖培养用400ml的带有透气膜的培养瓶培养，每个培养瓶约含80ml的培养基。培养基用蒸汽高

压灭菌锅121℃灭菌20min。

3.2.3增殖培养条件

培养条件见3.1.2.3。增殖培养4周～5周开始形成丛生芽。

3.2.4继代培养

将丛生芽切成单芽继代培养，每2周～4周更换培养基。

3.3生根培养

3.3.1含生长素的培养基培养

3.3.1.1培养基组成

将增殖获得的幼苗，长至6cm～8cm时，切成带1个～2个节的茎段进行生根培养。以1/2WPM（大

量元素减半）为基本培养基。接种到含生长素的生根培养基1/2WPM+IBA1.0mg/L+NAA0.5mg/L＋

蔗糖25g/L＋琼脂6g/L＋0.5g/L的活性炭颗粒，pH5.8～6.0。WPM培养基配方（pH5.2）见附录B。

3.3.1.2培养基制备

生根诱导采用250ml的锥形瓶培养，每瓶约含75ml的培养基。培养基用蒸汽高压灭菌锅121℃灭

菌20min。

3.3.1.3培养条件

培养条件见3.1.2.3。培养4d～6d。

3.3.2不含生长素的培养基培养

3.3.2.1培养基组成

将培养4d～6d的增殖材料转接到无激素的生根培养基1/2WPM＋蔗糖25g/L＋琼脂6g/L＋

0.5g/L的活性炭颗粒，pH5.8～6.0。WPM培养基配方（pH5.2）见附录B。

3.3.2.2培养基制备

见3.3.1.2。

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3.3.2.3培养条件

培养条件见3.1.2.3。培养4周～5周。

3.4炼苗和移栽

3.4.1苗床的准备

选择排水良好地块做苗床，苗床宽80cm～100cm，高15cm～20cm，长度6m～10m。用蛭石、珍

珠岩、泥炭土（体积比1：1：1）混合均匀作为基质，基质厚度15cm～20cm。基质先喷多菌灵50％可

湿性粉剂500倍液消毒，再用水淋透，放置1d～2d，再用水淋透，搭盖拱高40cm～60㎝的塑料拱棚，

然后用塑料薄膜覆盖保湿7d，保证基质潮湿和较高空气湿度。

3.4.2练苗

生根培养后，当苗长至高5cm～7cm，具有片5片～6片叶，3条～4条根时，可将试管苗进行适

当炼苗，即将培养瓶在培养室，去掉封口膜，置于（25±2）℃练苗室通风炼苗4d～5d，隔天用1/4MS

大量元素营养液喷洒叶面，10d后将其移出练苗室外培养。

3.4.3移栽

从培养瓶中取出试管苗，用清水小心洗净粘附在根系上的琼脂，不可伤害根系和茎叶。移栽入基质，

株行距4cm×10cm。盖膜保湿，相对湿度为80％～90％。根据光照强度遮阴，保持3000lx～5000lx

光照。

3.5组培苗的田间管理

3.5.1温度、湿度和光照的控制

移栽后保持光照强度3000lx～5000lx，晴天中午和下午揭开塑料薄膜2次～3次通风。温度控

制在25℃～30℃，6d～10d内必须保持空气相对湿度95％以上；10d～20d逐渐增加通风，揭膜，

每天喷雾3次～5次保持空气湿度80％～90％，逐渐减少浇水量，但保持基质湿润。7d～10d幼苗即

可成活，4周～5周后移栽成活率为80％以上。

3.5.2苗期养分和病虫害管理

刚移栽的幼苗，20d内间隔4d～6d叶面喷0.2％的磷酸二氢钾2次～3次至现水滴，25d后基质

浇0.4％的磷酸二氢钾一次。当苗长至高8cm～12cm，具有5片～8片叶，5条～7条根，且植株健壮、

叶大而颜色深绿，可出圃。名优樱花组培苗的主要病虫害防治见附录C。

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附录A

（规范性附录）

MS培养基配方

表A.1给出了MS培养基配方的内容。

表A.1MS培养基配方

使用浓度

类别成分分子量

mg/L

硝酸钾KNO3101.111900

硝酸铵NH4NO380.041650

大量元素磷酸二氢钾KH2PO4136.09170

硫酸镁MgSO4·7H2O246.47370

氯化钙CaCl2·2H2O147.02440

碘化钾KI166.010.83

硼酸H3BO361.836.2

硫酸锰MnSO4·4H2O223.0122.3

微量元素硫酸锌ZnSO4·7H2O287.548.6

钼酸钠Na2MoO4·2H2O241.950.25

硫酸铜CuSO4·5H2O249.680.025

氯化钴CoCl2·6H2O237.930.025

乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA372.2537.3

铁盐

硫酸亚铁FeSO4·7H2O278.0327.8

肌醇（环乙六醇）100

甘氨酸（氨基乙酸）2.0

有机成分盐酸硫胺素（维生素B6）0.1

盐酸吡哆醇（维生素B1）0.5

烟酸（维生素B3或PP）0.5

蔗糖342.3130g/L

琼脂粉7g/L

pH5.8～6.0

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附录B

（规范性附录）

WPM培养基配方（pH5.2）

表B.1给出了WPM培养基配方（pH5.2）的内容。

表B.1WPM培养基配方（pH5.2）

使用浓度

类别成分分子量

mg/L

硫酸钾K2SO4101.11990

硫酸镁MgSO4·7H2O246.47370

大量元素

磷酸二氢钾KH2PO4136.09170

硝酸铵NH4NO380.04400

硫酸锰MnSO4·4H2O223.0122.3

硫酸锌ZnSO4·7H2O287.548.6

微量元素硼酸H3BO361.836.2

硫酸铜CuSO4·5H2O249.680.25

钼酸钠Na2MoO4·2H2O241.950.25

钙盐氯化钙CaC2·4H2O236.15556

乙二胺四乙酸二钠Na2.EDTA372.2537.3

铁盐

硫酸亚铁FeSO4·7H2O278.0327.8

肌醇（环乙六醇）100

甘氨酸（氨基乙酸）2.0

有机成分盐酸吡哆醇（维生素B1）1.0

盐酸硫胺素（维生素B6）0.5

泛酸（维生素B5）0.5

蔗糖342.3120g/L

琼脂粉7g/L

pH5.2～5.5

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附录C

（规范性附录）

樱花组培苗的主要病虫害防治

表C.1给出了樱花组培苗的主要病虫害防治的内容。

表C.1樱花组培苗的主要病虫害防治

病虫害名称危害部位及症状防治方法

危害叶片，下部叶片开始发病，逐渐向上新稍萌发前，可喷洒3波～5波美度石硫合

部蔓延，初期为圆形或近圆形褐色病斑，剂，发病初期喷洒160倍波尔多液，50％苯

褐斑病Mycosphaerella

逐渐为不规则形的褐色大斑块，后期为黑来特可湿性粉剂1500倍～2000倍液。

sentina

色。严重时病斑可连成片，使叶片枯黄脱

落。

危害叶片。叶两面产生白色粉霉层，后出666.7m2用多菌灵50％可湿性粉剂100g～200

白粉病Erysiphe现黑色斑，湿度高易感病。g，兑水喷雾，于发病初期喷洒，共喷2次，

cichoracearum间隔5d～7d。

危害嫩枝、叶背，致使植株矮化、卷叶甚喷2.5％的溴氰菊酯5000倍～8000倍液或

至死亡。叶片还受蚜虫排泄物影响，易遭20％杀灭菊酯2000倍～4000倍液或1000

蚜虫Myzuspersicae、

致煤污病产生。蚜虫也是樱花病毒病害的倍～1500倍的50％灭蚜松乳油进行防治。

主要传播者之一。

危害叶和嫩芽。刺吸汁液，使受害叶失绿用黑光灯诱杀成虫。或每666.7m2用50％辛

枯焦甚至落叶；受害嫩芽发黄枯焦，不能