凝血因子Ⅷ抑制物定量检测专家共识2025

凝血因子Ⅷ抑制物定量检测专家共识CONTENTS01020304FⅧ抑制物的相关概念启动FⅧ抑制物定量检测的时机FⅧ抑制物定量检测方法FⅧ抑制物定量检测步骤及注意事项FⅧ抑制物的相关概念FⅧ抑制物是能够减少正常混合血浆中FⅧ活性的物质，其含量以Bethesda单位（BU）表示。FⅧ抑制物的定义根据来源不同，FⅧ抑制物可分为血友病A患者的抗FⅧ同种抑制物和获得性血友病A患者的抗FⅧ自身抑制物。FⅧ抑制物的分类FⅧ抑制物阳性的标准为连续两次检测中，患者血浆稀释度的倒数≥0.6BU/ml。FⅧ抑制物的检测标准基本概念FⅧ抑制物的分类滴度分类动力学特征FⅧ抑制物可分为HA患者的抗FⅧ同种抑制物及AHA患者的抗FⅧ自身抑制物。前者多为1型抑制物，而后者多为2型抑制物。根据FⅧ抑制物滴度，可将其分为低滴度抑制物（即抑制物滴度5.0BU/ml）和高滴度抑制物（即抑制物滴度≥5.0BU/ml）。1型抑制物的结合位点通常是FⅧ的A2或C2结构域，破坏了FⅧ与凝血因子Ⅸ复合物的形成，呈现1型反应动力学特征；2型抑制物的结合位点通常是FⅧ的C2结构域，干扰了磷脂和血管性血友病因子的结合位点，呈现2型反应动力学特征。分类010203FⅧ抑制物滴度分类低滴度抑制物定义高滴度抑制物定义根据FⅧ抑制物滴度的不同，可将其分为低滴度和高滴度抑制物。低滴度抑制物定义为抑制物滴度小于或等于5.0BU/ml。高滴度抑制物定义为抑制物滴度大于或等于5.0BU/ml。滴度划分启动FⅧ抑制物定量检测的时机首次确诊HA患者已确诊HA患者的监测时机ITI治疗前的检测对于首次拟确诊的HA患者，尤其是轻型和中间型患者，在接受替代治疗前需进行FⅧ抑制物定量检测以与AHA进行鉴别诊断。对于已确诊的HA患者，除预防治疗时需定期监测FⅧ抑制物外，若治疗效果欠佳、出血频率增加或靶关节出血等情况应及时进行FⅧ抑制物定量检测。对于抑制物持续阳性的重型HA患者，应立即接受免疫耐受诱导治疗（ITI），FⅧ抑制物定量检测对ITI的疗效预测、剂量选择及疗效评估等均有重要的临床意义。HA患者的检测时机TITLEHEREAHA患者的检测时机AHA患者确诊前检测对于拟确诊的AHA患者，应进行FⅧ抑制物定量检测以明确诊断。治疗前检测频率在治疗前6周，门诊患者应每周进行1次FⅧ抑制物定量检测，住院患者应每周进行2次。完全缓解后的检测完全缓解后（即FⅧ抑制物滴度0.6BU/ml，FⅧ∶C≥50%，免疫抑制剂停用或恢复至发病前剂量）可根据临床需求进行FⅧ抑制物定量检测。启动FⅧ抑制物定量检测的时机ITI疗效预测与剂量选择ITI治疗后监测对于首次拟确诊的HA患者，在接受替代治疗前需进行FⅧ抑制物定量检测以与AHA进行鉴别诊断。FⅧ抑制物定量检测对免疫耐受诱导治疗（ITI）的疗效预测、剂量选择及疗效评估均有重要的临床意义。对于抑制物持续阳性的重型HA患者，应立即接受免疫耐受诱导治疗，并在治疗过程中定期进行FⅧ抑制物定量检测。ITI治疗中的监测FⅧ抑制物定量检测方法010203一期凝固法发色底物法方法比较一期凝固法基于检测待测样本对乏FⅧ基质血浆活化部分凝血活酶时间（APTT）的纠正能力，通过检测混合后血浆的APTT可计算得到样本的FⅧ∶C结果。发色底物法的原理是基于检测FⅧ作为辅因子与活化的凝血因子Ⅸ形成的复合物活化凝血因子Ⅹ的能力，通过检测生成的活化凝血因子Ⅹ的量来计算样本的FⅧ∶C结果。一期凝固法抗干扰能力较弱，易受其他凝血因子抑制物、狼疮抗凝物质和肝素等影响；而发色底物法抗干扰能力强，适用于FⅧ抑制物与其他凝血因子抑制物或狼疮抗凝物质的鉴别诊断。按检测原理区分Bethesda法Nijmegen法两种方法的区别Bethesda法是1975年提出的标准化检测方法，通过混合患者血浆与NPP后测定剩余FⅧ活性来计算抑制物滴度。Nijmegen法于1995年在Bethesda法基础上改良，提高了检测特异性，使用咪唑缓冲液调整NPPpH及乏FⅧ血浆作为稀释液，减少假阳性。Bethesda法和Nijmegen法的主要区别在于使用的稀释液和pH调整方式，Nijmegen法通过这些改进提升了检测的特异性和准确性。按检测体系区分01”02”03”抗人FⅧ抑制物定量检测抗rpFⅧ抑制物定量检测NPP的来源和制备按正常混合血浆来源区分使用商品化的正常混合血浆（NPP）进行检测，需确保其来源可靠且质量符合标准。对于成人AHA患者，需要额外检测抗重组猪凝血因子Ⅷ（rpFⅧ）的抑制物，使用rpFⅧ作为NPP。自制NPP时需注意选择健康人群的血浆，避免特定疾病或治疗状态的个体，确保FⅧ∶C结果在95%~105%之间。FⅧ抑制物定量检测步骤及注意事项抗凝剂使用及调整样本处理与保存灭活步骤及注意事项采集样本时应使用含0.109mol/L（3.2%）枸橼酸三钠抗凝剂，对红细胞比容≥55%的患者需调整抗凝剂或采血量。采集后样本应确认无血凝块，离心分离得到乏血小板血浆，建议当天内完成检测；无法及时检测时，可置于-20℃或-70℃保存。在FⅧ抑制物定量检测前，样本需置于56℃孵育30分钟以灭活残留的FⅧ，减少其对检测结果的干扰。样本采集及制备样本灭活灭活的必要性灭活方法与条件灭活后的处理步骤样本灭活可以有效减少残留的FⅧ对FⅧ抑制物定量检测结果的干扰，提高检测的准确性。通常采用56℃孵育30分钟的方法灭活样本，灭活后需离心取上清液进行后续稀释处理。灭活后应使用一定的离心速度和时间离心，取上清液进行后续的样本稀释，确保检测结果的准确性。010203根据公式，将FⅧ抑制物滴度计算系数代入公式中计算样本