2025年高职生物技术（基因克隆基础）试题及答案

2025年高职生物技术（基因克隆基础）试题及答案

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______一、单项选择题（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填入括号内）1.基因克隆的第一步通常是（）A.目的基因的获取B.载体的选择C.连接反应D.转化2.以下哪种方法不是获取目的基因的常用方法（）A.从基因组文库中筛选B.从cDNA文库中筛选C.化学合成法D.细胞培养法3.载体的功能不包括（）A.携带目的基因B.提供复制原点C.提供筛选标记D.表达目的蛋白4.限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端通常是（）A.平末端B.粘性末端C.平末端或粘性末端D.以上都不是5.DNA连接酶的作用是（）A.连接DNA片段B.切割DNAC.复制DNAD.转录DNA6.转化是指（）A.将外源DNA导入受体细胞B.将目的基因与载体连接C.筛选阳性克隆D.表达目的蛋白7.筛选阳性克隆常用的方法不包括（）A.抗性筛选B.蓝白斑筛选C.核酸杂交D.细胞培养8.基因克隆中常用的宿主细胞是（）A.大肠杆菌B.酵母C.哺乳动物细胞D.以上都是9.以下哪种技术可以用于鉴定目的基因是否成功导入受体细胞（）A.PCRB.核酸杂交C.蛋白质电泳D.细胞培养10.基因克隆的最终目的是（）A.获取目的基因B.构建重组载体C.表达目的蛋白D.以上都是二、多项选择题（总共5题，每题4分，每题有两个或两个以上正确答案，请将正确答案填入括号内，多选、少选、错选均不得分）1.基因克隆的基本步骤包括（）A.目的基因的获取B.载体的选择与构建C.目的基因与载体的连接D.重组DNA导入受体细胞E.重组体的筛选与鉴定2.获取目的基因的方法有（）A.从基因组文库中筛选B.从cDNA文库中筛选C.PCR扩增D.化学合成法E.逆转录法3.常用的载体有（）A.质粒B.噬菌体C.病毒载体D.人工染色体E.核糖体4.限制性核酸内切酶的特点有（）A.识别特定的核苷酸序列B.在特定的位点切割DNAC.产生粘性末端或平末端D.可以切割RNAE.对DNA甲基化敏感5.筛选阳性克隆的方法有（）A.抗性筛选B.蓝白斑筛选C.核酸杂交D.酶切鉴定E.测序分析三、填空题（总共10空，每空2分，请将正确答案填入横线上）1.基因克隆是指____________________。2.目的基因的获取方法主要有________________、________________、________________等。3.载体应具备的基本条件包括________________、________________、________________等。4.限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端类型有________________和________________。5.DNA连接酶的作用是将________________连接起来。6.转化是将________________导入受体细胞的过程。7.筛选阳性克隆常用的方法有________________、________________、________________等。8.基因克隆中常用的宿主细胞有________________、________________、________________等。9.鉴定目的基因是否成功导入受体细胞的方法有________________、________________等。10.基因克隆的最终目的是________________。四、简答题（总共2题，每题15分）1.请简述基因克隆的基本流程。2.简述载体在基因克隆中的作用及应具备的条件。五、分析题（总共1题，20分）以下是一段关于基因克隆实验的描述，请分析其中存在的问题并提出改进措施。实验人员从某生物组织中提取了总RNA，通过逆转录合成了cDNA。然后设计了一对引物，以cDNA为模板进行PCR扩增，得到了目的基因。将目的基因与载体连接后，导入大肠杆菌感受态细胞。最后，通过抗性筛选得到了阳性克隆。答案：一、1.A2.D3.D4.C5.A6.A7.D8.D9.B10.C二、1.ABCDE2.ABCDE3.ABCD4.ABCE5.ABCDE三、1.体外将含有特定基因的DNA片段插入到载体分子中，然后将其导入受体细胞，使受体细胞获得新的遗传特性。2.从基因组文库中筛选、从cDNA文库中筛选、PCR扩增、化学合成法、逆转录法（任意三个）。3.具有复制原点、具有筛选标记、具有多个限制性核酸内切酶识别位点。4.粘性末端、平末端。5.两个DNA片段。6.重组DNA分子。7.抗性筛选答、蓝白斑筛选、核酸杂交、酶切鉴定、测序分析（任意三个）。8.大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞（任意三个）。9.核酸杂交、PCR等。10.表达目的蛋白。四、1.基因克隆的基本流程：首先获取目的基因，可通过从基因组文库或cDNA文库筛选、PCR扩增、化学合成、逆转录等方法；接着选择合适的载体并进行构建，载体需具备复制原点、筛选标记、多个限制性核酸内切酶识别位点等条件；然后将目的基因与载体进行连接；再把重组DNA导入受体细胞；最后对重组体进行筛选与鉴定，如通过抗性筛选、蓝白斑筛选、核酸杂交、酶切鉴定、测序分析等方法确定阳性克隆。2.载体在基因克隆中的作用：携带目的基因进入受体细胞，并在受体细胞中进行复制和表达；提供复制原点，使重组DNA能够在受体细胞中自主复制；提供筛选标记，便于筛选出含有重组DNA的受体细胞。载体应具备的条件：具有复制原点，能在受体细胞中自主复制；具有筛选标记，如抗生素抗性基因等，便于筛选阳性克隆；具有多个限制性核酸内切酶识别位点，方便目的基因的插入；分子量相对较小，便于操作；拷贝数高，能使目的基因大量扩增。五、存在问题及改进措施：1.提取总RNA后未对其质量进行检测，可能存在RNA降解等问题，应先通过琼脂糖凝胶电泳或分光光度计检测RNA的完整性和纯度。2.设计引物后未对引物进行评估，可能导致扩增效率低或非特异性扩增，应通过引物设计软件评估引物的特异性和扩增效率，并进行必要的优化。3.PCR扩增后未对产物进行检测，无法确定是否成功扩增出目的基因，