感染的检查方法和防治原则培训课件

细菌感染的检查方法与防治原则实验室诊断细菌学诊断:致病菌、抗原、产物或核酸血清学诊断：特异性抗体细菌学诊断标本的采集和送检原则避免杂菌污染不同期不同标本用抗生素以前运送注意保存标本必须新鲜致病菌的检验程序药物敏感试验标本直接涂片检查分离培养生化试验血清学试验动物试验明确诊断初步诊断分子生物学技术其他检测技术（二）致病菌的检验程序1．直接涂片染色镜检

直接涂片染色镜检法可在显微镜下直接观察致病菌的形态、大小、排列方式和染色特点。

（如痰中查见抗酸性细长杆菌，初步诊断为结核分枝杆菌。）优点：简便、快速、价廉，为临床检验所常用缺点：敏感性不及分离培养法2．分离培养

有的细菌在形态学上难以区分,可进行细菌的分离培养，这是确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准）。血液、脑脊液等标本，可直接接种至营养丰富的液体或固体培养基；接种至选择或鉴别培养基。对纯培养物进行形态特征、生化试验和血清学试验鉴定。优点：阳性率要比直接涂片镜检高缺点：需时较久5．动物试验（动物实验一般不作为常规细菌学诊断。）可进行致病菌的分离与鉴定、细菌毒力的检测等。常用实验动物有小鼠、豚鼠和家兔等。方法：接种途径有注射（皮内、皮下、腹腔、肌肉、静脉、脑内）和灌胃等。6．基因诊断技术优点：核酸杂交和PCR技术不需分离培养，只需检测标本中致病菌的特异性核酸片段，即可鉴定出致病菌，具有特异性强、敏感度高、快速等特点。（1）核酸杂交技术：（2）PCR技术：（3）DNA芯片（DNAarray）技术原理血清学诊断

双份血清标本，恢复期血清中抗体效价比急性期血清中抗体效价升高≥4倍者方有意义

用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。

(抗原→未知抗体)标本细菌感染性疾病的血清学诊断血清学试验应用举例直接凝集试验伤寒副伤寒（肥达试验）、立克次体病（外斐试验）凝集试验流感嗜血杆菌和脑膜炎奈瑟菌感染引起的脑膜炎、新生隐球菌感染、梅毒（VDRL、RPR试验）冷凝集试验支原体性原发性非典型肺炎沉淀试验白喉毒素（Elek平板毒力试验）对流免疫电泳流行性脑脊髓膜炎补体结合试验Q热中和试验风湿热（抗O试验）免疫印迹试验莱姆病免疫荧光试验梅毒（FTA-ABS试验）ELISA多种病原体及其毒素、特异性抗体的检测致病菌的检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与鉴定病原菌抗原检测

其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术血清学诊断动物试验获得性免疫产生的方式主动免疫自然免疫患病、隐性感染

人工免疫

疫苗、类毒素

被动免疫自然免疫胎盘、初乳

人工免疫

抗毒素、丙球人工免疫：采用人工方法将疫苗、类毒素等或含有某种特异性抗体、细胞免疫制剂等接种于人体，以增强宿主体的抗病能力

生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、细胞制剂及诊断制剂的生物性制剂两种人工免疫的比较区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1-3次1次免疫出现时间慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）免疫维持时间长（数月~数年）短（2-3W）用途多用于预防多用于治疗或应急预防细菌感染的治疗抗生素（Antibiotic）是某些微生物在代谢过程中产生的一类抗菌物质，极微量即能选择性地抑制或杀死某些病原微生物。抗生素大多由放线菌和丝状真菌产生。半合成抗生素，在抗生素母核中加入不同侧链或通过母核结构改造而获得。化学合成抗菌药物，完全化学合成抗生素种类1.β-内酰胺类：青霉素、头孢菌素2.大环内酯类：红霉素、阿奇霉素3.氨基糖甙类：链霉素、庆大霉素4.四环素类：四环素、土霉素5.氯霉素：6.人工合成的抗菌药物：磺胺类：SMZ;喹诺酮：氟派酸、环丙沙星抗菌药物杀菌机制

第二十四章病毒感染的检查方法与防治原则标本的采集与送检标本采集时间

在发病初期（急性期）采集标本

标本类型

最好在感染部位采取

标本运输

放入冷藏包内尽快送检

标本的处理与储存采集标本时要注意无菌操作病毒分离（一）细胞培养(cellculture)细胞培养类型：原代细胞、二倍体细胞、传代细胞系等病毒在细胞内增殖的指征：

细胞致病作用(cytopathogeniceffect,CPE)、红细胞吸附、干扰现象病毒在细胞内增殖的指标CPE细胞病变效应（CPE）：病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变,细胞肿胀、变圆、缩小、堆积成葡萄串状；溶解、脱落；形成多核巨细胞、包涵体①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染细胞呼吸道合胞病毒感染细胞②形成多核巨细胞或称融合细胞细胞病变效应(cytopathiceffect,CPE)病毒感染性的定量测定：

空斑形成单位(plaque-formingunit,PFU)

50%致死量（LD50）50%组织细胞感染（TCID50）（二）动物接种（三）鸡胚接种

病毒抗原的直接检出免疫荧光法（immunofluorescentassay）酶联免疫吸附实验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays,ELISA）SolidPhaseYAgImmobilizedYAbinPatient’ssampleLabeledAnti-IgSolidPhaseYAgImmobilizedYAginPatient’ssampleLabeledAbELISA病毒抗体的直接检出

病毒+鸡RBC=凝集（血凝试验）病毒+特异性抗体+鸡RBC=不凝集（血凝抑制试验）检测病毒核酸核酸杂交技术(nucleioacidhybridizationtechnique)PCR技术基因芯片病毒感染的快速诊断光镜-----包涵体电镜免疫荧光ELISA分子生物学技术杂交WesternblotSouthernblotPCRNorthernblot

快速诊断主要是指从含有病毒的标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结果。

ELISAforHIVantibodyMicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivity蛋白印迹转移WesternBlot同时检出P24和gp120Ab

人工主动免疫：接种抗原类物质，作用产生较晚，维持时间长

人工被动免疫：接种抗体、细胞因子等物质，作用产生较早，维持时间短

第二节病毒感染的免疫预防

人工主动免疫减毒活疫苗(attenuatedvaccine,orlivingvaccine)Sabin脊髓灰质炎、HAV、麻疹的减毒活疫苗等死疫苗：

Salk脊髓灰质炎乙型脑炎、狂犬病、流感等灭活疫苗。

减毒活疫苗与死疫苗优缺点比较特点减毒活疫苗死疫苗制备方法通过非正常培养减毒株通过化学物理方法使感染失活免疫接种一般为一次性多次免疫疫苗的稳定性相对不稳定相对稳定免疫的类型体液免疫和细胞免疫体液免疫毒力回升有可能不可能安全性对免疫缺陷者有危险安全性好生产和成本生产较复杂、成本高生产简单、成本低其他疫苗亚单位疫苗(subunitvaccine)合成肽病毒疫苗(synthesizedpeptideviralvaccine)基因工程疫苗(geneengineringvaccine)核酸疫苗(nucleicacidvaccine)

DNAVaccinesplasmidMusclecellGeneforantigenMusclecellexpressesprotein-antibodymadeCTLresponse

人工被动免疫

人工被动免疫：输入含有特异性抗体免疫血清或制备好的免疫细胞或细胞因子，使机体立即获得免疫力的过程，称人工被动免疫。

可用于某些急性传染病的应急预防和治疗，但维持时间短。抗病毒治疗(antiviraltherapy)

化学药物治疗(chemotherapy)

抑制病毒穿入、脱壳及病毒释放

抑制病毒核酸复制及mRNA合成

核苷类药物非核苷类似物免疫治疗干扰素和干扰素诱生剂免疫细胞的修饰与回输治疗性疫苗antibodyNewmethodsAnti-idiotypevaccineepitopeAntibodywithepitopebindingsiteVirusantibodyAnti-idiotypevaccineMakeantibodyagainstantibodyidiotypeAnti-

idiotype

antibodyAnti-idiotypeantibodymimicstheepitopeAnti-anti-idiotype

antibodyAnti-idiotypeantibodyUseanti-idiotypeantibodyasinjectablevaccineAntibodytoanti-idiotype

antibodyBindsandneutralizesvirusAnti-idiotype

antibody

Anti-anti-idiotype

antibodyAnti-anti-idiotype

antibodyUseasvaccine中草药防治病毒感染黄芪、板蓝根、大青叶、贯众、螃蜞菊、甘草和大蒜提取物等

基因治疗反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide）干扰RNA（shortinterferingRNA，siRNA）

掌握：正常菌群、机会性致病菌、菌群失调、菌群失调症的概念；机会性致病菌的致病条件；细菌的毒力；细菌内、外毒素的主要区别；胞外菌感染、胞内菌感染及外毒素致病的免疫特点；标本的采集原则和检验程序；常用的血清学诊断方法。熟悉：宿主的固有免疫的组成；吞噬细胞吞噬作用的后果；适应性免疫的获得方式；人工免疫的概念和常用的免疫制剂。

了解：抗菌药物杀菌机制，细菌耐药性。