2018年深圳市坪山区病毒性腹泻监测结果分析

学位论文原创性声明PAGE54学号16205080226目录摘要……………………1前言………………2正文………………21.材料和方法 21.1样品来源 21.2仪器和试剂 21.3实验方法 21.4统计分析 32.结果 32.1疑似腹泻病例病毒核酸的总体检出情况 32.2检出的四种腹泻病毒的性别检出情况 42.3不同月份病毒性腹泻的检出情况 52.4不同年龄组病毒性腹泻的检出情况 53.讨论 6参考文献………………72018年深圳市坪山区病毒性腹泻监测结果分析【摘要】目的：了解2018年深圳市坪山区病毒性腹泻的流行特征以及分布情况，为下一年该地区的病毒性腹泻防控工作提供科学依据。方法：通过实时荧光定量PCR从深圳坪山区人民医院疑似病毒性腹泻样品中检测出诺如病毒（NV），轮状病毒（RV），星状病毒（AstV）和肠道腺病毒（EAdV）核酸，并对检测结果进行统计学分析。结果：在219份疑似病毒性腹泻样品中，51份样品检测到腹泻病毒核酸，腹泻病毒的核酸检出率为23.29%，NV、RV、EADV和ASTV核酸检出率分别为14.16%、7.31%、1.83%和2.28%。NV感染共有两个流行高峰，分别在2月和12月；RV的流行高峰主要集中在冬春季；EADV和ASTV检出主要集中在2～4月份。EADV在各年龄组中检出有差异，在71~80岁年龄组人群中的检出率最高，为33.33%。结论：NV和RV是深圳市坪山区病毒性腹泻的主要病原，可在冬春季加强对NV和RV的病毒性腹泻防控工作。【关键词】病毒性腹泻；诺如病毒；轮状病毒；星状病毒；肠道腺病毒AnalysisonSurveillanceResultsofViralDiarrheainPingshanDistrictofShenzhenCityin2018【Abstract】Object：InordertounderstandtheepidemiccharacteristicsanddistributionofviraldiarrheainPingshandistrictofShenzhencityandtoprovideascientificbasisforthepreventionandcontrolofviraldiarrhea.Methods:Real-timefluorescencequantitativePCRwasusedtodetectnucleicacidsofNorovirus(NV),Rotavirus(RV),Astrovirus(AstV)andEntericadenovirus(EAdV)simultaneouslyinsuspectedviraldiarrheasamplesfromShenzhenPingshanPeople'sHospital,andtheresultswerestatisticallyanalyzed.Results：Among219suspectedviraldiarrheasamples,51sampleshavedetectedviralnucleicacid,withadetectionrateof23.29%.ThedetectionratesofNorovirus,Rotavirus,EnteroadenovirusandAstroviruswere14.16%,7.31%,1.83%and2.28%respectively.Norovirusinfectionhastwoepidemicpeaks,whichareinFebruaryandDecember.TheepidemicpeakofRotavirusismainlyinwinterandspring.AndthedetectionofEnteroadenovirusandAstrovirusaremainlyinFebruarytoApril.Enteroadenoviruswasdetecteddifferentlyindifferentagegroups,andthehighestdetectionratewasinthepopulationof71-80yearsold,whichwas33.33%.Conclusion:NorovirusandRotavirusarethemainpathogensofviraldiarrheainPingshandistrictofShenzhencity.Therefore,thepreventionandcontrolofNorovirusandrotavirusdiarrheacanbestrengthenedinwinterandspring.【Keywords】Viraldiarrhea；Norovirus;Rotavirus;Enteroadenovirus;Astrovirus感染性腹泻是发病人数最多、流行面最广、严重影响到群众生活生产的一组急性传染病。根据世界卫生组织的统计，腹泻每年在发展中国家造成200万人死亡[2]，而病毒被认为是引起腹泻的最重要的病原体类型[1]，其中诺如病毒（NV）、轮状病毒（RV）、星状病毒（AstV）和肠道腺病毒（EAdV）是引起病毒性腹泻的主要病原体。目前对病毒性腹泻病原的研究多数是针对5岁以下年龄组婴幼儿的，但由于全国各地区人口学特征的差异，以及人们对病毒性腹泻的重视程度加深，这类研究已经不再局限于5岁以下年龄组婴幼儿，有关5岁以上年龄组人群的病毒性腹泻报道也越来越多。深圳市坪山区疾病预防与控制中心从2015年7月开始对哨点医院上送的疑似病毒性腹泻样品进行NV、RV、EADV和ASTV这四种病毒核酸的检测，本研究主要针对5岁以上年龄组人群，现将2018年深圳市坪山区病毒性腹泻的监测结果报告如下。1材料和方法1.1样品来源2018年1月至2018年12月，以深圳坪山市人民医院作为定点监测医院，从疑似病毒性腹泻病例中收集了219份肛拭子或粪便样品。1.2仪器和试剂1.2.1仪器：ABI7500荧光定量PCR仪、生物安全柜、移液枪、离心机、核酸提取仪。1.2.2试剂：诺如病毒GI/GII型核酸检测试剂盒，轮状病毒A、B和C组核酸检测试剂盒，肠道腺病毒和星状病毒核酸检测试剂盒，以上试剂盒均出自硕世生物公司，磁珠法病毒核酸提取试剂盒。1.3实验方法1.3.1样品类型满足以下情况之一，并且细菌培养的结果为阴性者，怀疑为病毒性腹泻：①每天排便次数＜3次，以呕吐为主要症状的病例；②每天排便次数＜3次，大便性质改变和有呕吐症状的病例；③每天排便次数≥3次，大便性状改变，大便常规镜检白细胞数<15个，但未见红细胞的病例。1.3.2样品的处理1.3.2.1提取病毒核酸取出试剂条，轻甩3-6次，将挂在孔壁和铝膜上的液体甩至试剂条的底部，把试剂条放在试剂条架上，小心撕去铝膜，然后往各个试剂条的第一个孔中先加入20微升ProteinaseK，再加入200微升样品，将上述试剂条放入核酸提取仪中，自动化提取35min，程序结束后，将各个试剂条最后一孔的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中，获得待测样本的RNA，进行下游实验。1.3.2.2配置反应液取上述四种腹泻病毒核酸检测试剂盒，使其回到室温，摇动试剂盒中的试剂，并低速离心10秒以制备反应试剂。计算需准备反应试剂的人份数（n=样品数+两管对照）以及每种试剂的用量，然后将试剂盒中的试剂依次加入到离心管中，低速离心30s，使沾在离心管壁上的试剂被甩下来，最后按20微升的量分装到n个PCR反应管中。1.3.2.3加样将5微升处理过的RNA样品、空白对照和阳性对照分别添加到不同的装有反应液的PCR反应管中，最终每管的体积为25微升，盖紧盖子，低速离心30秒。1.3.2.4实时荧光定量PCR扩增检测将PCR反应管放入荧光PCR扩增仪中，设定循环参数，进行扩增检测，PCR反应结束后要及时取出PCR反应管，然后按相关规定进行合理处理，最终参照试剂盒说明书对实验结果进行判读。当一份样品中只检出一种腹泻病毒核酸时，则定义为单一腹泻病毒阳性样品；当一份样品中同时检出两种腹泻病毒核酸时，则定义为双重腹泻病毒阳性样品；当一份样品中同时检出三种腹泻病毒核酸时，则定义为三重腹泻病毒阳性样品。1.4统计分析采用SPSS25软件对检测结果进行统计分析，定量资料均采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1疑似腹泻病例病毒核酸的总体检出情况通过实时荧光定量PCR对219份疑似病毒性腹泻样品进行了RV、NV、EADV和ASTV检测。总共有51份样品检测到腹泻病毒核酸，其中被检出为单一腹泻病毒核酸的有46份，被检出为双重腹泻病毒核酸的有5份。有28份样品检测到单一NV核酸，检出率为12.79％（28/219）；11份样品检测到单一RV核酸，检出率为5.02％（11/219）；2份样品检测到单一EADV核酸，检出率为0.91％（2/219），5份样品检测到单一ASTV核酸，检出率为2.28％（5/219），在3份样品中同时检测到NV核酸和RV核酸，检出率为1.37％（3/219）;在2份样品中同时检测到RV核酸和EADV核酸，检出率为0.91％（2/219）。详细结果见表1。表1深圳坪山区2018年疑似腹泻病例病毒核酸检出情况病毒类型检测总样品数（份）检出病毒样品数（份）检出率（%）NV2192812.79RV219115.02ASTV21952.28EADV21920.91NV+RV21931.37RV+EADV21920.91合计2195123.292.2检出的四种腹泻病毒的性别检出情况在所检测的219份疑似病毒性腹泻样品中，男性样品有128份，女性样品有91份。在51份检出病毒核酸的样品中，男性样品有33份（25.78%），NV、RV、ASTV和EADV在男性中的检出率分别为13.28%、9.38%、3.13%、2.34%；女性样品有18份（19.78%），NV、RV、ASTV和EADV在女性中的检出率分别为15.38%、4.40%、1.10%、1.10%。经统计学检验，NV、RV、ASTV和EADV这四种腹泻病毒在男性和女性中的检出率差异均无统计学意义。详细结果见表2。表2深圳坪山区2018年疑似腹泻病例检出的四种腹泻病毒的性别检出情况男性女性病毒检测样品总数（份）检出数（率/%）检测样品总数（份）检出数（率/%）c2PNV12817（13.28）9114（15.38）0.194>0.05RV12812（9.38）914（4.40）1.947>0.05ASTV1284（3.13）911（1.10）0.979>0.05EADV1283（2.34）911（1.10）0.460>0.05合计12833（25.78）9118（19.78）--2.3不同月份病毒性腹泻的检出情况通过对不同月份疑似腹泻病例样品进行检测，发现除7、8、10、11月份外，其余月份NV均被检出，其中1~2、6、9、12月这几个月NV的检出率均在20％以上，而2月份的检出率为31.25％（5/16），是NV检出率最高的一个月份；RV主要是在1~4月和12月这几个月份被检出，其余月份则没有被检出，RV感染有明显的季节性特征，为冬春季高发，其中3月份检出率最高，为28.57％（4/14）；EADV和ASTV全年检出数都较少，ASTV只在3、4、11月份被检出，其中4月份检出率最高，为16.67％（2/12）；EADV只在2、3这两个月被检出，其中3月份检出率最高，为21.43％（3/14）。经统计学检验，NV、RV、ASTV和EADV各月份检出率差异均有统计学意义（χ2值分别为21.234，32.657，25.257，35.439，P值均小于0.05）。详细结果见图1。2.4不同年龄组病毒性腹泻的检出情况219个疑似腹泻病例中年龄组为21~30岁的样品数最多，占总样品数的37.90％（83/219）。比较不同年龄组的疑似腹泻样品中的腹泻病毒检出率，发现51~60岁年龄组人群的检出率最高（45.45%）。对不同年龄组人群的NV、RV、EADV和ASTV这四种腹泻病毒的检出率的统计分析表明，NV在51~60岁和61~70岁年龄组人群中的检出率均高于30%，分别为36.36%、37.5%，而11~40岁年龄组人群的检出率较低，介于10.84~16.67%之间；RV只在21~60岁年龄组人群中被检出，检出率介于5.56~16.67%之间，其中41~50岁年龄组人群的检出率最高（16.67％）；ASTV只在21~50岁年龄组人群中被检出，检出率介于2.41~3.33%之间；EADV只在21~30、41~50和71~80岁这三个年龄组人群中被检出，检出率最高的是71~80岁年龄组人群（33.33%）。除EADV在不同年龄组人群中检出率差异有统计学意义外（P<0.05），其他三种腹泻病毒在不同年龄组人群中检出率差异均无统计学意义（P>0.05）。详细结果见表3。表32018年深圳坪山区各年龄组疑似腹泻病例样品中四种腹泻病毒的检出情况样品数（份）NVRVASTVEADV合计年龄（岁）检出数（份）检出率（%）检出数（份）检出率（%）检出数（份）检出率（%）检出数（份）检出率（%）检出数（份）检出率（%）~2012216.6700.0000.0000.00216.67~3083910.8467.2322.4122.411922.89~40721115.2845.5622.7800.001723.61~503026.67516.6713.3313.33930.00~6011436.3619.0900.0000.00545.45~708337.5000.0000.0000.00337.50~80300.0000.0000.00133.33133.33χ2值-10.818-6.073-1.028-19.062P值->0.05->0.05->0.05-<0.053讨论通过对219份监测样品进行RV、NV、EADV和ASTV的实时荧光定量PCR检测，样品腹泻病毒核酸检出率为23.29%，四种腹泻病毒检出率从高到低排序依次为NV、RV、ASTV和EADV，与国内的一些研究结果一致[5]。其中NV的检出率最高，占14.16%，与2016～2017年深圳市坪山区的检出率（15.84%）基本一致[10]，提示NV是坪山区最主要的病毒性腹泻病原体，因此，可加强对NV的核酸检测和基因分型，以了解其主要类型和变异情况。EADV的检出率为1.83%，年龄最大的感染者为72岁，与深圳市福田区监测数据一致[9]，RV和ASTV的检出率分别为7.31%、2.28%，与2016～2017年深圳市坪山区的检出率（7.14%、2.17%）基本一致[10]。本研究未检出三重或三重以上的混合感染，双重感染率为2.28%，与Jin等的报道结果基本一致[3]。从人群分布上看，本研究的结果显示四种病毒的检出率在性别上的差异无统计学意义。NV、RV和ASTV在各年龄组检出率差异无统计学意义，而EADV在各年龄组检出率差异有统计学意义，在71~80岁年龄组人群中的检出率最高（33.33%），可能的原因是老年人免疫力低下，抵抗病毒的能力较弱。从时间分布上看，本研究的结果表明，RV感染有明显的季节性特征，为冬春季高发，而NV感染则没有，与相关研究的报道一致[4]。由NV所引起的病毒性腹泻流行于全世界，传播方式主要是粪-口和人-人接触，人群对NV普遍易感。1~2月、6、9、12月这几个月NV的检出率较高，而RV的检出主要集中在1~4月和12月，与广东省的监测数据基本一致，这可能与冬季和春季的寒冷干燥气候有关[6]，EADV和ASTV的阳性率较低，检出主要集中在2～4月份。本研究采取的检测方法是实时荧光定量PCR，但却没有进一步对病毒的基因型和遗传进化学进行研究，检验条件有待进一步完善。综上所述，2018年深圳市坪山区病毒性腹泻监测结果分析与2016~2017年该地区的监测结果分析基本一致，说明该地区腹泻病毒感染人数没有增加，防控工作取得了一定的成效，但还有待加强。通过对深圳市坪山区2018年病毒性腹泻监测结果进行分析，提议深圳市坪山区可在冬春季加强对NV和RV的病毒性腹泻防控工作。参考文献张海龙，李范，张克春，等.2010年广东省深圳市病毒性腹泻监测结果分析[J].疾病监测，2012(1):4-7.ParasharUD，HummelmanEG，BrewerJS，etal.Globalillnessanddeathscausedbyrotavirusdiseaseinchildren[J].