2025年大学（生物技术）基因工程实验试题

2025年大学（生物技术）基因工程实验试题

（考试时间：90分钟满分100分）班级______姓名______第I卷（选择题，共30分）（总共10题，每题3分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内）1.基因工程中常用的工具酶不包括以下哪种？（）A.限制性核酸内切酶B.DNA连接酶C.逆转录酶D.淀粉酶2.以下关于质粒的说法，错误的是（）A.是一种环状双链DNA分子B.能独立于染色体外进行复制C.不能在宿主细胞中稳定存在D.可作为基因工程的载体3.限制性核酸内切酶切割DNA后产生的末端通常是（）A.平末端B.黏性末端C.两者都有D.以上都不对4.基因工程中构建重组DNA分子常用的载体是（）A.噬菌体B.质粒C.病毒D.以上都是5.以下哪种方法可用于检测重组DNA分子是否导入受体细胞？（）A.核酸杂交B.蛋白质电泳C.细胞培养D.显微镜观察6.基因工程中目的基因的获取方法不包括（）A.从基因组文库中筛选B.从cDNA文库中筛选C.化学合成D.细胞融合7.用于将mRNA逆转录成cDNA的酶是（）A.DNA聚合酶B.逆转录酶C.RNA聚合酶D.限制性核酸内切酶8.基因工程中转化的概念是指（）A.将重组DNA分子导入受体细胞B.将目的基因导入受体细胞C.将载体导入受体细胞D.将蛋白质导入受体细胞9.以下关于PCR技术的说法，正确的是（）A.是一种体外扩增DNA的技术B.需要引物C.需要DNA聚合酶D.以上都是10.基因工程中筛选阳性克隆的方法不包括（）A.抗生素抗性筛选B.蓝白斑筛选C.核酸杂交筛选D.细胞凋亡筛选第II卷（非选择题，共70分）二、填空题（每题3分共15分）1.基因工程的核心步骤是____________________。2.限制性核酸内切酶识别的DNA序列具有____________________特点。3.常用的DNA连接酶有____________________和____________________。4.基因工程中常用的受体细胞有____________________、____________________等。5.PCR技术的三个基本反应步骤是____________________、____________________、____________________。三、简答题（每题10分共30分）1.简述基因工程的基本操作流程。2.w说明限制性核酸内切酶在基因工程中的作用及特点。3.阐述基因工程中载体应具备的条件。四、实验设计题（15分）现有一未知基因，设计实验方案获取该基因并构建其表达载体。要求：写出实验思路、主要实验步骤及用到的主要工具酶和试剂。实验思路：首先通过一定方法获取未知基因，然后选择合适载体，利用工具酶将基因与载体连接构建表达载体。主要实验步骤：1.从相关生物材料中提取总RNA，通过逆转录得到cDNA。2.根据已知信息设计引物扩增目的基因。3.选择合适载体，用限制性核酸内切酶切割载体和目的基因。4.用DNA连接酶将目的基因与载体连接。用到的主要工具酶和试剂：逆转录酶、DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、总RNA提取试剂、逆转录试剂盒、PCR试剂、载体等。五、分析题（10分）在基因工程实验中，对构建的重组质粒进行酶切鉴定，结果发现酶切产物电泳条带与预期不符。请分析可能出现这种情况的原因。可能原因：一是酶切反应体系中酶的活性受到抑制，比如反应体系中存在抑制剂，或者酶保存不当失活。二是质粒提取过程中出现问题，导致质粒不纯或结构异常。三是引物设计错误，导致扩增得到的目的基因片段不准确，进而影响重组质粒的结构。四是连接反应不成功，目的基因未正确连接到载体上，使得重组质粒的结构不符合预期。答案：一、1.D2.C3.C4.D5.A6.D7.B8.A9.D10.D二、1.构建重组DNA分子2.特异性3.E.coliDNA连接酶、T4DNA连接酶4.大肠杆菌、酵母菌5.变性、退火、延伸三、1.基因工程基本操作流程：获取目的基因→构建基因表达载体→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。2.作用：识别特定DNA序列并切割，产生末端用于后续连接等操作。特点：具有特异性识别序列，切割位点具有特定性。3.条件：有多个限制酶切割位点；有标记基因便于筛选；能在受体细胞中稳定存在并复制；分子量小，便于操作。四、实验思路：首先通过一定方法获取未知基因，然后选择合适载体，利用工具酶将基因与载体连接构建表达载体。主要实验步骤：1.从相关生物材料中提取总RNA，通过逆转录得到cDNA。2.根据已知信息设计引物扩增目的基因。3.选择合适载体，用限制性核酸内切酶切割载体和目的基因。4.用DNA连接酶将目的基因与载体连接。用到的主要工具酶和试剂：逆转录酶、DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶、总RNA提取试剂、逆转录试剂盒、PCR试剂、载体等。五、可能原因：一是酶切反应体系中酶的活性受到抑制，比如反应体系中存在