2025年生物分离工程期末复习题

填空题

1..根据吸附剂与吸附质之间存在的吸附力性质的不同，可将吸附分为物理吸附、

化学吸附和交换吸附;

2.比表面积和孔径是评价吸附剂性能的重要参数。

3。层析操作必须含有固定相和邈1相.

4。溶质的分派系数大，则在固定相」.存在的几率大，随流动相的移动速度小。

5.层析柱的理论板数越叁，则溶质的分离度越大。

6.两种溶质的分派系数相差越小，需要的越多的理论板数才干获得较大的分离度.

7.影响吸附的重要因素有吸附质的性质,温度,溶液pH值,盐的浓度和吸附物

的浓度与吸附剂的用量;

8.离子交换树脂由网络骨架（载体）,联结骨架上的功效基团（活性基）和可交

换离子构成.

9。电泳用凝胶制备时，过硫酸镂的作用是引发剂（提供催化丙烯酰胺和双丙烯

酰胺聚合所必需的自由基）;甲叉双丙烯酰胺的作用是交联剂（丙烯酰胺单体和交

联剂甲叉双丙烯酰胺催化剂的作用下聚合而成的含酰胺基侧链的脂肪族长链）;

TEMED的作用是增速剂（催化过硫酸胺形成自由基而加速丙烯酰胺和双丙烯酰

胺的聚合）;

10o影响盐析的因素有溶质种类,溶质浓度,pH和温度;

IK在结晶操作中，工业.上惯用的起晶办法有皿起晶法，刺激起晶法和晶种起

晶法;

12。简朴地说离子交换过程事实上只有外部扩散、内部扩散和化学交换反映三步;

13.在生物制品进行吸附或离子交换分离时，普通遵照Langmuir吸附方程,其形式

为

14.反相高效液相色谱的固定相是疏水性强的,而流动相是极性强的；

15o等电聚焦电泳法分离不同蛋白质的原理是根据其笠虫点的不同；

16.离子交换分离操作中，惯用的洗脱办法有静态洗脱和动态洗脱;

17.晶体质量重要指晶体大小,形状和纯度三个方面;

18.亲和吸附原理涉及配基固定化,吸附样品和样品解析三步;

19.根据分离机理的不同，色谱法可分为吸附、离交、亲和、凝胶过滤色谱

20.蛋n质分离惯用的色谱法有免疫亲和色谱法，疏水作用色谱法,金属整合色谱

法和共价作用色谱法;

210SDS电泳制胶时，加入十二烷基磺酸钠（SDS）的目的是消除多个待分

离蛋白的分了•形状和电荷差别,而将狂量作为分离的根据；加入二硫叔糖醇的

目的是强还原剂,破坏工胱氨酸间的二硫键;

22影响亲和吸附的因素有配基浓度、空间位阻、配基与载体的结合位点、微环

境和载体孔径;

23o阳离子交换树脂按照活性基团分类，可分为强酸性阳离子交换树脂、弱酸性

和中强酸性;其典型的活性基团分别有、、；

24。阴离子交换树脂按照活性基团分类，可分为强碱性、弱碱性和中强碱性;其

典型的活性基团分别有、、兼有以上两种基团;

25c影响离子交换选择性的因素有离子水子半径、离子价、离子强度、溶液nH.

温度、溶液浓度、搅拌速率、和交联度、膨胀度、颗粒大小;

26o离子交换操作普通分为静态和动态两种;

27o根据电泳原理.，现有电泳分离系统可分为移动界面电泳、区带电泳和稳态电

建；

28.双相电泳中.第一相是等电聚焦;第二相是一SDS:

29o结晶涉及三个过程过饱和溶液的形成、晶核的形成和晶体生长;

30.过饱和溶液的形成办法有热饱和溶液冷却、部分溶剂蒸发、真空蒸发冷却法、

化学反映结晶法和盐析法;

31.晶核自动形成时，体系总的吉布斯自由能的变化AG由表面过剩吉布斯自由能

AGs和体积过剩吉布斯自由能AGv构成；

32.基本的离子交换过程由处迎散、内部扩散和化学交换构成:

33o吸附涉及将待分离的料液通入吸附剂中,吸附质被吸附到吸附剂表面,料液

流出和解吸四个过程构成:

34。大孔网状吸附剂有非极性，中档极性和极性三种重要类型;

35.亲和吸附剂表面连接的“手臂链”的作用是减少空间位阻的影响;

36。分子筛色谱（凝胶色谱）的重要应用是脱盐、生物大分子的分离;

37。电泳系统的基本构成有电泳檀、里遮、灌胶模具、外循环恒温系统、凝/干

燥器、电泳转移装置、电泳洗脱仪和凝胶扫描和摄录装置;

38.电泳后，样品的重要染色办法有考马斯亮蓝和银染法;

39o电泳过程中，加入溪酚兰的目的是批示蛋白的迁移位置:

4（）.固体可分为晶体和无定形固体两种状态;

41o结晶的前提是溶液达成过饱和状态;结晶的点动力是过饱和度;

42.根据晶体生长扩散学说，晶体的生长涉及溶质通过扩散作用穿过靠近晶体表

面的一种滞流层，从溶液中转移到晶体的表面、达成晶体表面的溶质长入晶面，

使晶体增大，同时放出结晶热和结晶热传递回到溶液中三个过程;

43o影响晶体生长的重要因素有型豆、搅拌和温度;

44.IEC操作多采用线性梯度洗脱利逐次洗脱.

45.HIC（疏水性互相作用层析）重要采用减少流均相离子强度的线性梯度洗脱法

和逐次洗脱法：IFC（离子交换层析）重要采用增加流动相离子强度的线性梯度

洗脱法和逐次洗脱法。

46.由于温度升高使分子和原子的热运动加剧，结合部位的静电作用、氢键及金

属配位键的作用会削弱，疏水性互相作用会增强。

47.电泳是荷电（电解质）溶质在电场作用下,发生定向泳动的现象。

48.电泳分离是运用曲幽在电场中泳动速度的差别进行分离的。

49o亲和层析的洗脱办法有特异性洗脱法和非特异性洗脱法。

50o荷电溶质在电场中受到电场力和黏性阻力的作用。

5k不持续凝胶电泳的凝胶层由浓缩层和分离层沟成.

52。不持续凝胶电泳的上层起迭缩作用，下层起分离作用.

53.当微小晶体的半径时，则微小晶体会自动溶解:当微小晶体的半径时,则微小

晶体会自动生长。

53o结晶是从液相或气相中生成%状3、分子（或原子、离子）有规则排列的

晶体的现象。

54o结晶是内部构造的质点元作三维有序规则排列的形状一定的定体粒子,而沉

淀是无规则排列的无定形的粒子.

55。离子交换操作普通分为和两种；

56.离子交换分离操作中，惯用的洗脱办法有（pH梯度）和（离子强度（盐）梯

度）。

57.简朴地说，离子交换过程事实上只有（外部扩散），（内部扩散）和（化学交换

反映）三步；

58.离子交换操作普通分为（动态）和（静态）两种；

59.根据晶体生长扩散学说，晶体的生长涉及（溶质借扩散作用从溶液中转移到晶

体的表面）、（溶质长入晶面放出结晶热）和（结晶热传递回到溶液中）三个过程；

60o影响晶体生长速度的重要因素有（杂质）、（搅拌）、（过饱和度）和（温度）。

选择题

lo凝胶过滤层析中，流动相的线速度与HETP关系.

Ao无Bo线性减少C.线性增加D.对数

2。GFC中溶质的分派系数在分级范畴内随相对分子质量的对数值增大而。

A.线性增大B.线性减少C.急剧增大D.急剧减少

3.凝胶的分级范畴越小，则分离度。

A.越大B。越小C。不大于1D。不大于0

4.线性梯度洗脱过程中，流动相的离子强度线性增大,因此，溶质的持续减少，移

动速度逐步增大。

Ao溶解度Bo扩散系数Co分派系数Do分离度

5o逐次洗脱过程中，流动相的离子强度阶跃增大，溶质的分派系数减少。

Ao逐步B.阶段式C.线性Do急剧

6.当吸附操作达成穿透点时，应更操作.

Ao继续吸附Bo停止吸附C.停止再生D.停止洗脱

7.离子交换的分派系数与离子浓度呈_D_关系.

Ao线性增加B.线性减少C.指数增加Do指数减少

8.凝胶过滤层析中，流动相的线速度与HETP成C关系.

A。无Bo线性减少C.线性增加D。对数

9oGFC中溶质的分派系数在分级范畴内随相对分子质量的对数值增大而B。

Ao线性增大Bo线性减少C急剧增大Do急剧减少

10.凝胶的分级范畴越小，则分离度A.

A.越大B。越小C.不大于1D。不大于0

11.如果亲和作用重要源于静电引力，提高离子强度会D亲和作用。

Ao增加B.削弱Co不影响D.削弱或完全破坏

12o如果亲和作用以氢键为主，提高离子强度会D亲和作用。

A.增加B.削弱Co不影响D.减少或消除

13。当亲和作用以疏水性互相作用时，提高离子强度会在亲和作用。

A.增加Bo削弱C.无影响D.完全破坏

14.在亲和分离操作中，许多亲和吸附的目的蛋白质用高浓度的盐溶液洗脱，阐

明R在亲和作用中占重要地位.

A.疏水性互相作用Bo配位键Co非共价键Do静电力

15.Q的存在能够克制氢键的形成。

Ao氧原子Bo氮原子Co尿素和盐酸胭DoNaCl

16.电泳分离的机理是邑分离过程.

A.液一液相平衡B.速率Co分派平衡Do筛分

17.凝胶电泳时运用D使分子大小不同的电解质分离的。

Ao静电作用B.亲水作用C.疏水作用D.分子筛作用

18.电解质溶质的迁移率是Q下的泳动速度。

Ao单位时间Bo单位溶质质量Co单位电场强度D.单位静电引力

19.结晶是运用溶质之间Q差别进行分离纯化的一种扩散分离操作.

Ao浓度B.静电引力C.溶解度Do扩散系数

20.若亲和结合作用源于亲和分子与金属离子形成的配位键，则加入可使亲和结

合作用消亡。

A.NaClBo硅酸镂CoEDTA（乙二胺四乙酸）D.SDS

21。微小晶体的溶解度巳普遍大颗粒晶体的溶解度。

A.低丁B.高丁Co靠近D.等于

22.线性梯度洗脱过程中，流动相的离子强度线性增大，因此，溶质的C持续

减少，移动速度逐步增大.

Ao溶解度B.扩散系数Co分派系数D.分离度

23.逐次洗脱过程中，流动相的离子强度阶跃增大，溶质的分派系数6减少.

A.逐步B.阶段式Co线性D.急剧

24o含有亲和作用的分子(物质)对之间含有“钥匙''和"锁孔”的关系是产生亲和

结合作用的C。

Ao充足条件Bo充要条件C。必要条件Do假设条件

25o若亲和结合作用源于亲和分子与金属离子形成的配位键，则加入C可使

亲和结合作用消亡。

AoNaClBo硅酸钺C.EDTA(乙二胺四乙酸)D.SDS

26、结晶过程含有较好的()。

A.自范性B.均匀性C.选择性D.各向异性

27、晶体含有自发地生长为多面体的可能性，此性质称为晶体的()。

A.自范性B.均匀性C.选择性D.各向异性

28、离子交换树脂对不同离子亲和能力的差别，体现在()的大小。

A.离子价数R.溶液浓度C.离子水化半径D.选择性系数

29、离子交换反映的速度重要取决于()。

A.离子大小B.溶液浓度C.交联度D.扩散速度

30、普通用分离度R=()作为相邻两色谱峰完全分离的标志。

A.0.9B.Io2C.1.5D.1。8

31、下列离子交换剂中，离子交换()并不合用于生物大分子的分离.

A.树脂B.纤维素C.葡聚糖凝胶D.琼脂糖凝胶

32、()的效率是全部分离纯化技术中最高的。

A.溶剂萃取B.双水相萃取C.膜分离D.色谱分离

33、工业规模的色谱分离大多采用()分离法.

A.柱色谱B.纸上色谱C.薄层色谱D.平板色谱

34、选择HPLC办法时首先要考虑的是样品的().

A.分子构造B.分子大小C.等电点D.溶解度

35.运用硅胶做固定相进行吸附柱层析，下列哪种溶剂的洗脱能力最弱()

Ao水B.乙醇C.氯仿D.乙酸乙酯

36.下列哪种离子与DEAE—纤维素(C1型)的亲和力最大()

AF-B.C1-C.BrDoI

37o下列分离技术中，不能用于去离子水制备的办法有()

Ao离子交换柱层析B.膜蒸储C.渗入蒸发D.电渗析

38.根据物质极性大小大同分离的办法是()

Ao吸附层析B.离子交换层析C.凝胶层析Do亲和层析

39.吸附作用是指物质从—浓缩到固体表面的过程。

A、液体B、气体C、流体Do固体

40o下列哪种离子交爽树脂适宜制备软水()

AoRSOsNaB。RSO3HC.RCOOHD。RCOONa

41.在凝胶过滤(分离范畴是5000〜400000)中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下

来()。

A、细胞色素C(13370)B、肌球蛋白(400000)

C、过氧化氢酶(247500)D、血清清蛋白(68500)

42c下列有关正相色谱与反相色谱说法对的的是().

A.正相色谱是指固定前的极性低于流动相的极性

B正相色谱层析过程中非极性分子或极性小的分子比极性大的分子移动的速度

慢

Co反相色谱是指固定相的极性低于流动相的极性

D.反相色谱层析过程中，极性大的分子比极性小的分子移动的速度慢

43o下列分离技术中，不能作为蛋白质溶液中的无机盐离子去除的办法是0

A.离子交换柱层析B.透析C.超滤D.凝胶过滤

44.HPLC是哪种色谱的简称(C)。

A.离子交换色谱Be气相色谱C.高效液相色谱Do凝胶色谱

45.针对配基的生物学特异性的蛋白质分离办法是(C)o

A.凝胶过滤Bo离子交换层析

C.亲和层析Do纸层析

46.下列哪项酶的特性对运用酶作为亲和层析固定相的分析工具是必需的?(B)

A.该酶的活力高

Boo对底物有高度特异亲合性

C.酶能被克制剂克制

D.最适温度高

E.酶含有多个亚基

47.用于蛋白质分离过程中的脱盐和更换缓冲液的色谱是（C）

A.离子交换色谱B.亲和色谱Co凝胶过滤色谱Do反相色谱

48.蛋白质分子量的测定可采用（C）办法。

A.离子交换层析Be亲和层析Co凝胶层析Do聚酰胺层析

49.氨基酸的结晶纯化是根据氨基酸的（A）性质。

A.溶解度和等电点Bo分子量Co酸碱性D.生产方式

50.离子交换剂不合用于提取（D）物质。

A.抗生素Bo氨基酸C.有机酸Do蛋白质

51.人血清清蛋白的等电点为4。64,在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电,

清蛋白质分子向（A）

A:正极移动：R：负极移动：不移动：D：不拟定.

52.凝胶色谱分离的根据是（B）.

A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相中的分派系数不同D、各物质与专一分子的亲

和力不同

53.依离子价或水化半径不同，离子交换树脂对不同离子亲和能力不同.树指对

下列离子亲和力排列次序对的的有（A）.

A、Fe3+>Ca2+>Na+B、Na+>Ca2+>Fe3+

C、Na+>Rb+>Cs+D、Rb+>Cs+>Na+

54.结晶过程中，溶质过饱和度大小（A）o

A、不仅会影响晶核的形成速度，并且会影响晶体的长大速度

B、只会影响晶核的形成速度，但不会影响晶体的长大速度

C、不会影响晶核的形成速度，但会影响晶体的长大速度

D、不会影响晶核的形成速度，并且不会影响晶体的长大速度

55.离子交换法是应用离子交换剂作为吸附剂，通过（A）将溶液中带相反电

荷的物质吸附在离子交换剂上。

A、静电作用B、疏水作用C、氢键作用D、范德华力

56.阴离子交换剂（C）.

A、可交换的为阴、阳离子B、可交换的为蛋白质

C、可交换的为阴离子D、可交换的为阳离子

57.凝胶色谱分离的根据是（B

A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相中的分派系数不同D、各物质与专一分子的亲

和力不同

58.洗脱体积是（C）0

A、凝胶颗粒之间空隙的总体积B、溶质进入凝胶内部的体积

C、与该溶质保存时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动

相体积

59.工业上强酸型和强碱型离子交换树脂在使用时为了减少酸碱用量且避免设备

腐蚀，普通先将其转变为（R）.

A、钠型和磺酸型B、钠型和氯型

C、镀型和磺酸型D、铉型和氯型

60.吸附色谱分离的根据是（A）.

A、固定相对各物质的吸附力不同B、各物质分子大小不同

C、各物质在流动相和固定相的分派系数不同D、各物质与专一分子的亲和

力不同

61.下面哪一种是根据酶分子专一性结合的纯化办法（A）.

A.亲和层析B.凝胶层析C.离子交换层析D.盐析

62.结晶过程中，溶质过饱和度大小（A）

A、不仅会影响晶核的形成速度，并且会影响晶体的长大速度

B、只会影响晶核的形成速度，但不会影响晶体的长大速度

C、不会影响晶核的形成速度，但会影响晶体的长大速度

D、不会影响晶核的形成速度，并且不会影响晶体的长大速度

63.下列哪项不是蛋白质的浓度测定的办法（D

A、凯氏定氮法B.双缩胭法C.福林.酚法Do核磁共振

64.吸附剂和吸附质之间作用力是通过（A）产生的吸附称为物理吸附。

A.范德华力B库伦力Co静电引力Do互相结合

65.竣酸型离子交换树脂必须在（C）的溶液中才有交换能力

AopH>5BpH<7C.pH>7DopH<5

66.离子交换树脂合用（B）进行溶胀

A.水B乙醇Co氢氧化钠Do盐酸

67.分子筛层析指的是（C）

Ao吸附层析B分派层析Co凝胶过滤D.亲和层析

68.对于吸附的强弱描述错误的是（A）

Ao吸附现象与两相界面张力的减少成反比

B某物质自溶液中被吸附程度与其在溶液中的溶解度成正比

Co极性吸附剂容易吸附极性物质

Do非极性吸附剂容易吸附非极性物质

69.离子交换用的层桥柱直径和柱长比普通为（R）之间

Ao1：10—1:20B,1:10-1：50C.1：10-1:30D.1:20—1:50

70.通过变化pH值从而使与离子交换剂结合的各个组分被洗脱下来，可使用

（A）

Ao阳离子交换剂普通是pH值从低到高洗脱B阳离子交换剂普通是pH值从

高到低洗脱Co阴离子交换剂普通是pH值从低到高Do以上都不对

71.疏水亲和吸附层析普通在（D）的条件下进行

A.酸性B碱性C.中Do高浓度盐溶液

72.气相色谱的载气不能用（C）

A.氢气B氮气Co氧气Do氮气

73.有关电泳分离中迁移率描述对的的是（A）

Ao带电分子所带净电荷成正比B分子的大小成正比

C.缓冲液的黏度成正比Do以上都不对

74.在什么状况下得到粗大而有规则的晶体（A）

Ao晶体生长速度大大超出晶核生成速度B晶体生长速度大大低于过晶核生

成速度

Co晶体生长速度等于晶核生成速度D.以上都不对

75.人血清清蛋白的等电点为4.64,在PH为7的溶液中将血清蛋白质溶液通电,

清蛋白质分子向（A）

A：正极移动；B:负极移动;C:不移动；D：不拟定。

76.有关疏水柱层析的操作错误（D）

A疏水层析柱装柱完毕后，普通要用含有高盐浓度的缓冲液进行平衡

B疏水层析是运用蛋白质与疏水性吸附剂之间的弱疏水性互相作用的差别进行

分离纯化的层析技术

C洗脱后的层析柱再生解决，可用8mol/L尿素溶液或含8mol/L尿素的缓冲溶液

洗涤，然后用平衡缓冲液平衡

D疏水柱层析分辨率很高、流速慢、加样量小

77.结晶法对溶剂选择的原则是（C）

A、对有效成分溶解度大，对杂质溶解度小B、对有效成分溶解度小，对杂

质溶解度大

C、对有效成分热时溶解度大冷时溶解度小，对杂质冷热都溶或都不溶

D、对有效成分冷热时都溶，对杂质则不溶E、对杂质热时溶解度大，冷时

溶解度小

78.网格高聚物吸附剂吸附的弱酸性物质,普通用下列哪种溶液洗脱。（D）

A.水Bo高盐C.低pHDe高pH

79.下列哪个不属于初步纯化：（C）

A.沉淀法B.吸附法Co离子交换层析Do萃取法

80.高效液相色谱仪的种类诸多，但是无论何种高效液相色谱仪，基本上由

（D）构成。

A高压输液系统、进样系统、分离系统、过滤系统、统计系统或色谱工作站等

五大部分

B进样系统、分离系统、检测系统、统计系统或色谱工作站四大部分

C高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统四大部分

D高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、统计系统或色谱工作站等五

大部分

81.影响电泳分离的重要因素（B）

A光照B待分离生物大分子的性质C湿度D电泳时间

82.在凝胶过滤（分离范畴是5000〜400000）中，下列哪种蛋白质最先被洗脱下

来（B）

A.细胞色素C（13370）B.肌球蛋白（400000）C.过氧化氢酶（247500）

D.血清清蛋白（68500）E.肌红蛋白（16900）

83.“类似物容易吸附类似物”的原则,普通极性吸附剂适宜于从何种溶剂中吸附

极性物质（B）

A.极性溶剂B.非极性溶剂C.水D.溶剂

84.能够除去发酵液中钙、镁、铁离子的办法是（C）

A.过滤B.萃取C.离子交换D.蒸储

85.HPLC是哪种色谱的简称（C）。

A.离子交换色谱B.气相色谱C.高效液相色谱Do凝胶色谱

86.洗脱体积是（C）.

A、凝胶颗粒之间空隙的总体积B、溶质进入凝胶内部的体积

C、与该溶质保存时间相对应的流动相体积D、溶质从柱中流出时所用的流动

相体积

87.分子筛层析纯化陋是根据（C）进行纯叱。

A.根据酶分子电荷性质的纯化办法Bo调节酶溶解度的办法

Co根据酶分子大小、形状不同的纯化办法Do根据酶分子专一性结合的纯化

办法

88.下列哪一项不是阳离子交换树脂（D）

A氢型B钠型C铉型D羟型

89.按分离原理不同，电泳可分为（A）

A区带电泳、自由界面电泳、等速电泳、等电聚焦电泳

B纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳

C区带电泳、自由界面电泳、纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳

D等速电泳、等电聚焦电泳、琼脂凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳

90.在酸性条件下用下列哪种树脂吸附氨基酸有较大的交换容量（C）

A.羟型阴B.氯型阴C.氢型阳D.钠型阳

91.亲和层析的洗脱过程中，在流动相中加入配基的洗脱办法称作（C）

A、阴性洗脱B、激烈洗脱C、竞争洗脱D、非竞争洗脱

92.活性炭在下列哪种溶剂中吸附能力最强？（A）

A、水B、甲醇C、乙醇D、三氯甲烷

93.将配基与可溶性的载体偶联后形成载体-配基复合物，该复合物可选择性地

与蛋白质结合，在一定条件下沉淀出来，此办法称为（A）

A、亲和沉淀B、聚合物沉淀C、金属离子沉淀D、盐析沉淀

94.在选用凝胶层析柱时，为了提高分辨率，宜选用的层析柱是（A）

A、粗且长的B、粗且短的C、细且长的D、细且短的

简答题

lo为什么凝胶过滤层析普通采用恒定洗脱法？

2。GFC与其它层析法比较其特点是什么？

3.为什么IEC（离子交换层析）很小采用恒定洗脱法？

4.线性梯度洗脱法和逐次洗脱法优缺点时什么？

5o产生亲和作用的充足必要条件是什么？

6。比较特异性洗脱和非特异性洗脱的优缺点。

7。蛋白质等生物大分子与小分子化合物的离子交换特性的差别？

8.兰格缪尔的单分子层吸附理论的要点是什么？

9.为什么离子交换需在低离子强度下进行？

1、吸附的概念及类型

吸附是运用吸附剂对液体或气体中某一组分含有选择性吸附的能力，使其富集在

吸附剂表面的过程.

吸附的类型:①物理吸附:吸附剂和吸附物通过分子力（范德华力）产生的吸附；

②化学吸附：吸附剂和吸附物之间的电子转移，发生化学反映，形成库仑力而吸

附;③交换吸附：吸附剂与吸附物之间发生离子交换而吸附。

2、吸附过程的流程

吸附过程1待分离料液与吸附剂混合一吸附质被吸附到吸附剂表面t料液流出一

吸附质解吸回收

3、大孔吸附树脂的吸附规律

大孔网状吸附树脂的种类：非极性吸附树脂；中档极性吸附树脂；极性吸附剂

遵照规律:①非极性吸附剂可从极性溶剂中吸附非极性溶质;②极性吸附剂可从

非极性溶剂中吸附极性物质；③中档极性吸附剂兼有以上两种能力.

4、吸附等温线？

当固体吸附剂从溶液中吸附溶质达成平衡时，其吸附量与溶液构成和温度有关，

当温度一定时，吸附量与浓度之间的函数关系称为吸附笠温线。

5、亲和吸附的概念？亲和技术在生化分离中的应用综述？

亲和吸附分离是运用溶质和吸附剂之间特殊的化学作用，从而实现分离。吸附剂

由载体（载体普通是惰性的，须先活化然后与配基偶联）和配位体构成。

6、固定床、流化床、膨胀床吸附的特点及区别？

7、离子交换的定义？

离子交换是运用离子交换树脂作为吸附剂,将溶液中的待分离组分，根据其电荷

差别，依靠库仑力（静口引力）吸附在树脂上，然后运用适宜的洗脱剂将吸附质从

树脂上洗脱下来，达成分离的目的。

8、离子交换树脂的构造构成？

①含有三维空间立体构造的网络骨架；

②联接在骨架上的活性基团

③活性基团所带的相反电荷的活性离子（可交换离子）

9、离子交换树脂的预解决办法、再生及洗脱？

离子交换操作办法：树脂预解决一离子交换吸附一洗脱

树脂预解决办法:①物理解决：水洗、过筛,去杂，以获得粒度均匀的树脂颗粒;

②化学解决：用8-10倍树脂体积的盐酸或氢氧化钠溶液交替搅拌浸泡.阳离子树

脂：酸-碱一酸;阴离子树脂：碱一酸一碱.最后以去离子水或缓冲液平衡

洗脱方式:①变化溶液pH值;②变化溶液离子强度

树崖鹿生是指使离子交换树脂重新含有交换能力的过程。酸性阳离子树脂：

酸一碱一酸一缓冲溶液淋洗;碱性阴离子树脂:碱一酸-碱一缓冲溶液淋洗。方式有

顺流再生和逆流再生。

蛋白质离子交换分离的基本环节:平衡，上样吸附，洗脱，再生

第八章色谱分离

1、色谱法的概念

色谱分离也称色谱层析、色谱、色层，是指样品中各构成根据其在固定相与流动

相之间作用行为的差别进行多次分离的过程.

2据溶质分子与固定相互相作用的机理不同而分类的色谱技术重要有几个？

根据溶质分子与固定相互相作用的机理不同可分为吸附层析法、分派层析法和凝

胶过滤法三大类。其中吸附层析法乂包含离子交换色层分离法、疏水作用色层分

离法、金属螯合色层分离法和共价作用色层分离法四种。

3、各色谱技术的作用机理？

⑴柱色谱;①惯用柱色谱介质分无机物色谱介质（氧化铝、硅胶、活性炭、膨润

土、磷酸钙（凝胶型和晶型）、氧化钛和氢氧化锌凝胶等）和聚合物色谱介质

（如琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等）②洗脱办法:恒定洗脱法;逐次洗

脱法；梯度洗脱法（最惯用）

⑵纸层析法:是一种惯用的快速分离、鉴定办法，可用于定性分析以及拟定分离

方案，但普通不用于定量分析。介质:滤纸;固定相：水。操作办法:将试样溶于适

宜溶剂中，点样于滤纸的一端；选用适宜的展开剂，借助毛细管现象从点样的一

端向另一端流动,展开结束后，取下滤纸,晾干，染色显迹

⑶薄层色谱法:将固定相涂布在惰性固体上,形成薄层进行色谱分离的办法

操作要点:铺板，点样，点样量展开，显色

⑷吸附鱼遭:指混合物随流动相通过固定相（吸附剂）时，由于固定相对不同物

质的吸附力不同而使混合物分离的办法.

⑸新的吸附色谱技术，如疏水作用色谱、金属螯合作用色谱和共价作用色谱等,

所用吸附剂普通为有机基质并通过化学修饰后制成，它们都有比较明确的作用机

理.，即疏水作用、整合作用和共价作用。

⑹亲和色谱（AFC）：是将与目的产物含有特异亲和力的生物分子固定化后作为固

定相从混合物中分离目的产物的过程。亲和作用是特殊的吸附作用。过程:载体

活化、配基连接、吸附、洗脱

⑺分派也遭乂称为液液色谱，其原理是运用混合物中各物质在两液相中的分派系

数不同而分离。要素：固定相、载体、流动相⑻凝胶色谱（见下第5题）

（9）气相色谱可分为气固色谱和气液色谱.是指用气体作为流动相的色谱法.系统

构成：气路系统；进样系统;分离系统；温控系统；检测统计系统

Q0）高效液相色谱（HPLC）与典型液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒

含有高柱效，但会引发高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法.

4、柱色谱系统的构成？

普通由蠕动泵、色谱柱、检测器、统计仪以及部分收集器等几个部分构成。

5、凝胶色谱的定义？

凝胶色谱:以一定孔径的凝胶为固定相，是一种根据各物质分子大小不同而进行

分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱。

凝胶色谱分为两大类：凝胶过滤色谱和凝胶渗入色谱。

6、阻滞因子（Rf）?

阻滞因子是在色谱系统中溶质的移动速度和原则物（与固定相没有亲和力的流动

相Kd=O）的迁移率之比Rf=

电迩是指荷电的胶体粒子在电场中的移动.电泳现象中的表面电势和双电层的因

素起着决定性的作用。

1、带电粒子在电场中的迁移方式重要根据哪些因素？

带电粒子在电场中的迁移方式重要根据分子尺寸大小和形状、分子所带电荷或分

子的生物学与化学特性。

2、根据电泳原理，三种形式的电泳分离系统是什么？惯用的是什么？

根据电泳原理，有三种形式的电泳分离系统：移动界面电泳、区带电泳、稳态电

述；其中区带电泳是现在惯用的电泳系统。

区带电泳中的惯用技术：①载体电泳：粉末电泳、纸电泳、凝胶电泳、聚焦电泳;

②无载体电泳：自由电泳、毛细管电泳

凝胶电泳的支持介质：聚丙烯酰胺凝胶;琼脂糖凝胶

影响丙烯酰胺聚合的重要因素:引发剂和增速剂的浓度；系统pH值；温度;分子

氧

聚丙烯酰胺凝胶电泳中的分子筛效应：凝胶中的大分子分离取决于它的电荷、尺

四维凝胶的这种用于分离不同尺寸分子的特性是由于它的尺寸筛分能力，

这种现象被称为分子筛效应.

图中A,B,C均为阳离子,

分子量大小依次为MA=MB：

ABC

1、结晶:溶液中的溶质在一定条件下，因分子有规则的排列而结合成晶体，晶体

的化学成分均一，含有多个对称的晶体，其特性为离子和分子在空间晶格的结点

上呈规则的排列;结晶的实质是指溶质自动从过饱和溶液中析出，形成新相的过

程

2、结晶的环节:①过饱和溶液的形成;②晶核的形成;③晶体生长

其中，溶液达成过饱和状态是结晶的前提；过饱和度是结晶的推动力。

二。讨论题

1.请结合图示简述凝胶排阻色谱（分子筛）的分离原理；

答:凝胶排阻色谱的分离介质（填料）含有均匀的网格构造，其分离原理是含有不同

分子量的溶质分子，在流经柱床是，由于大分子难以进入凝胶内部，而从凝胶颗

粒之间流出,保存时间短；而小分子溶质能够进入凝胶内部,由于凝胶多孔构造的

阻滞作用，流经体积变大，保存时间延长.这样，分子量不同的溶质分子得以分

离。

2.绘制结晶过程中饱和曲线和过饱和曲线图，并简述其意义；

答：结晶过程中的饱和温度曲线和不饱和温度曲线的简图如右图所示：

S-S曲线为饱和温度曲线，在其下方为稳定区，在该区域溶液为不饱和溶液不会

自发结晶；

TT曲线为过饱和温度曲线，在其上方为不稳定区，能够自发形成结晶；

S—S曲线和T—T曲线之间为亚稳定区，在该区域，溶液为过饱和溶液，但若无

品种存在，也不能自发形成晶体

3.何谓亲和吸附，有何特点？

答：亲和吸附是吸附单元操作的一种，它是运用亲和吸附剂与目的物之间的特殊

的化学作用实现的高效分离手段。亲和吸附剂的沟成涉及：惰性载体、手臂链、

特异性亲和配基.

亲和吸附的特点是高效、简便、合用范畴广、分离速度快、条件温和，但载体制

备难度大，通用性差，成本较高。

4.简述结晶过程中晶体形成的条件；

答：结晶过程涉及过饱和溶液的形成、晶核的形成及晶体的生长三个过程，其中

溶液达成过饱和状态是结晶的前提，过饱和度是结晶的推动力.

5,试比较常规聚丙稀酰胺凝胶电泳与SDSPAGE的分离原理；

答:常规聚丙烯酰胺凝胶电泳和SDS均为凝胶电泳的一种。

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是根据其电荷（性质、荷电量）、分子形状和分

子大小（分子量）差别实现分离的；

SDS由于加入了SDS和强还原剂（DTT等），破坏了蛋白质分子的高级（二

级、三级、四级）构造,并与蛋白质形成荷大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋

白质分子电荷及分子形状差别,而仅将分子量差别作为分离根据，惯用于测定未

知蛋白质的亚基分子量。

6.何谓色谱的理论塔板数，如何计算？

答：理论塔板数反映不同时刻溶质在色谱柱中的分布以及分离度与柱高之间的关

系。

N-理论塔板数根―保存时间Wi/2半峰宽Wb-峰底宽

7.简述疏水层析的原理，并阐明基本操作环节；

答：在载体表面连接上疏水的直链碳链或其它疏水基团，能够与蛋白质的某些疏

水基团互相作用，从而实现多组分的分离。

在高盐浓度下，蛋刍质表面的疏水区域暴露，固定相表面修饰了某些疏水基

团，这样蛋白质的疏水部分即可与固定相发生较强的疏水互相作用，从而被结合

在固定相表面，而一旦减少流动相的盐浓度即可实现蛋白质的洗脱.

8.结合SDSPAGE电泳的分离原理阐明未知蛋白质分子量的测定办法；

答：以不同分子量的原则蛋白进行SDS-PAGE电泳得到不同原则蛋白的电泳迁

移率，制作原则曲线，然后对未知蛋白在相似条件下进行SDS电泳，测定

迁移率，从原则曲线得到对应的分子量.

9.请阐明在进行SDSPAGE电泳之前，样品的解决办法，并解释其因素；

答:样品解决办法：加入SDS和还原剂DTT。

因素：SDS由于加入了SDS和强还原剂，破坏了蛋白质分子的高级构造，

并与蛋白质形成带大量负电荷的聚合物，消除了不同蛋白质分子电荷及分子形状

的差别，而仅将分子量差别作为分离的根据，惯用于测定未知蛋白质的亚基分子

量。

10.简述载体两性电介质梯度等电聚焦（IEF）的分离原理;

答：在支持介质中加入载体两性电解质，通以直流电后在两极之间形成稳定、持

续和线性的pH梯度，当带电的蛋白质分子进入该体系时;便会产生移动，并聚

集于相称其等电点的位置。

11.离子交换分离单元的基本过程有哪儿部分？

答：①样品准备②离子交换剂和层析剂的制备③上样④目的蛋白的洗脱⑤洗脱液

的鉴定和回收⑥离子交换剂的再生和储存

12.试比较物理吸附与化学吸附过程；

答:物理吸附吸附剂与吸附质之间的作用力是分子间作用力，物理吸附无选挎性,

吸附量可因物系不同而相差诸多，可在低温下进行，不需要较高活化能，能够是

单分子层也能够是多分子层。

化学吸附在吸附质与吸附剂之间有电子转移，形成化学键，因此化学吸附需要较高

的活化能，需要在较高温度下进行，化学吸附放出的热量很大，