药典红外分光光度操作流程

红外分光光度法（IR）作为《中国药典》中药物鉴别、检查及含量测定的核心分析手段，凭借对分子官能团的特异性识别能力，在药品质量控制中发挥着不可替代的作用。规范的操作流程是确保光谱数据准确可靠的核心前提，本文结合药典要求与实践经验，系统阐述红外分光光度法的操作要点，为药品检验工作提供实用参考。一、操作前准备工作（一）仪器状态核查采用傅里叶变换红外光谱仪（FTIR）时，需提前确认：电源与冷却系统运行正常，仪器无报警提示；光学腔干燥剂（如变色硅胶）呈蓝色（干燥状态），若变红需及时更换；光学部件（如分束器、检测器）表面无灰尘、污渍，必要时用专用镜头纸轻拭。（二）试剂与材料准备固体样品：需准备经105℃干燥至恒重的光谱纯KBr（或KCl）、玛瑙研钵（提前烘干）、压片模具（清洁无残留）；液体样品：选用无红外吸收的溶剂（如CCl₄、CS₂），或采用液膜法时需准备洁净的NaCl/KBr盐片（使用前用无水乙醇擦拭、红外灯烘干）；气体样品：准备密封良好的气体池，确保池窗片（如KBr）无划痕、污染。（三）环境控制操作环境需满足：温度20~25℃，相对湿度≤60%，避免强光直射、机械振动及腐蚀性气体（如CO₂、NH₃）干扰。二、标准操作流程（一）仪器参数设置开机预热30分钟（或按仪器说明书要求），进入操作软件设置参数：波数范围：通常设置为4000~400cm⁻¹（覆盖官能团振动的特征区间）；分辨率：一般选择4cm⁻¹（兼顾分辨率与扫描速度，特殊样品可调整为2cm⁻¹）；扫描次数：样品与背景扫描次数一致，通常为32~64次（提高信噪比）。（二）空白背景扫描选择与样品状态匹配的背景介质：固体样品：取约200mg干燥KBr（经研磨后）置于模具中，压制成透明薄片（压力约10~15MPa，保持1~2分钟），作为背景片；液体/气体样品：以洁净空气（气体池抽真空后充入干燥空气）或空白溶剂（液膜法时用溶剂润湿盐片）为背景。将背景介质放入样品架，执行“背景扫描”，获取基线光谱（需确保基线平直，峰谷噪声≤0.3%T）。（三）样品制备与光谱采集1.固体样品（压片法）取供试品约1~2mg，与200mg干燥KBr充分研磨（颗粒直径≤2μm，无明显颗粒感）；将混合物装入压片模具，在10~15MPa压力下保持1~2分钟，制成均匀透明的薄片；将样品片放入光路，执行“样品扫描”，同步扣除背景光谱，获取样品红外图谱。2.液体样品（液膜法）取洁净盐片（NaCl或KBr），用滴管取1~2滴供试品滴于盐片表面，覆盖另一盐片形成均匀液膜（厚度≤0.1mm，无气泡）；若为溶液法，取供试品溶液（浓度1%~5%）注入液体池中，密封后放入光路扫描。3.气体样品（气体池法）将气体池抽真空（残压≤10Pa），充入供试品气体（压力0.1~0.5MPa，根据浓度调整）；放入光路扫描，同步扣除空气背景。（四）数据处理与分析1.图谱校正：对采集的光谱进行基线校正（消除背景漂移）、平滑处理（降低随机噪声），确保峰形清晰；2.特征峰识别：标注主要官能团的特征峰位（如-OH伸缩振动~3400cm⁻¹，C=O伸缩振动~1700cm⁻¹）；3.比对分析：鉴别：将样品图谱与《药典》标准图谱（或对照品图谱）比对，要求特征峰的峰位偏差≤4cm⁻¹，相对峰强（如最强峰与次强峰的比值）符合要求；检查：分析杂质峰的数量、强度（如有机溶剂残留峰的积分面积需≤限度要求）；含量测定：采用“对照品法”时，需绘制标准曲线（浓度-吸光度线性关系），代入样品吸光度计算含量。（五）结果判定与记录鉴别项：若样品图谱与标准图谱的峰位、峰形、相对强度一致，判定为“符合规定”；检查项：杂质峰的强度（或面积）≤药典规定的限量，判定为“符合规定”；含量测定：计算结果需在药典规定的含量范围内（如98.0%~102.0%）。及时记录仪器参数、样品信息、图谱数据及判定结果，确保可追溯。三、关键注意事项（一）样品纯度控制供试品需经预处理（如干燥、精制），避免水分、残留溶剂或杂质干扰（如水峰~3400cm⁻¹、~1640cm⁻¹会掩盖样品峰）。（二）仪器校准与维护定期（每季度）用聚苯乙烯膜校准：其特征峰（如1601cm⁻¹、1028cm⁻¹）的峰位偏差应≤2cm⁻¹；每次实验后，清洁样品架、模具，更换干燥剂，关机前执行“仪器吹扫”（通入干燥空气，保护光学部件）。（三）操作规范性接触盐片、KBr时需戴洁净手套，避免指纹、汗液污染；压片时确保模具均匀受力，避免薄片出现裂纹、气泡；扫描过程中避免触碰仪器，防止振动导致基线波动。四、常见问题及解决方法问题现象可能原因解决措施---------------------------------------------------------------------------------基线漂移干燥剂失效、环境湿度大更换干燥剂，提高环境密封性峰形宽化/分裂样品研磨不细、液膜过厚重新研磨样品（颗粒≤2μm），减薄液膜重现性差压片压力不均、扫描参数不一致固定压片压力（如12MPa），统一扫描参数结语红外分光光度法的操作规范性直接影响药品质量评价的准确性。通过严格遵循“样品纯化-仪器校准-