新型冠状病毒核酸检测标准流程

新型冠状病毒核酸检测标准流程核酸检测作为新型冠状病毒感染诊断的“金标准”，其标准化操作流程直接关系到检测结果的准确性、生物安全防护的有效性，以及疫情防控决策的科学性。以下从检测全流程角度，对新冠病毒核酸检测的标准操作规范进行详细解析，为医疗机构、第三方检测机构及基层防疫单位提供实操指引。一、检测前准备：资质、物资与环境的三重保障（一）人员资质与培训检测相关人员需具备医学检验或相关专业资质，且完成生物安全培训（含二级生物安全实验室操作规范）、核酸检测专项培训（含采样、提取、扩增全流程），考核合格后方可上岗。采样人员还需掌握急救技能，应对采样过程中可能出现的晕厥、呕吐等突发情况。（二）物资准备清单1.采样物资：病毒采样管（含保存液，需与拭子匹配）、一次性使用无菌采样拭子（鼻咽/口咽型）、密封袋、条码标签（含唯一识别码）。2.防护装备：N95及以上级别口罩、医用防护服（连体式，符合GB____标准）、一次性医用手套（双层）、防护面屏/护目镜、鞋套。3.检测试剂与设备：核酸提取试剂（磁珠法/柱提法）、扩增试剂（含内标，需验证分析性能）、PCR扩增仪（定期校准，温度精度±0.5℃）、核酸提取仪（运行稳定，通量匹配需求）。4.辅助物资：75%医用酒精（采样前后手消毒、设备表面消毒）、含氯消毒剂（环境终末消毒）、医疗废物包装袋（双层，耐穿刺）。（三）环境与分区管理1.采样点设置：划分清洁区（工作人员更衣、物资准备）、缓冲区（防护装备穿脱）、污染区（采样操作），三区物理隔离，单向流动（清洁区→缓冲区→污染区）。采样台需配备手消毒装置、医疗废物桶，地面及台面每2小时消毒1次。2.实验室布局：遵循“三区两通道”（试剂准备区、样本制备区、扩增区，人员/样本通道分离），各区压力梯度为：试剂准备区（正压）＞样本制备区（微负压）＞扩增区（负压），防止气溶胶交叉污染。二、采样流程：规范操作保障样本质量（一）鼻咽拭子采样（成人优先推荐）1.患者体位：头部后仰45°，暴露鼻咽腔（儿童可由助手固定头部，避免晃动）。2.采样操作：采样者手持拭子（避免触碰手部），沿鼻腔下鼻道（与面部垂直方向）缓缓插入，深度约为鼻尖至耳垂距离的1/2~2/3，旋转拭子3圈（约10秒），轻柔退出，立即将拭子头浸入采样管保存液中，折断拭杆（低于液面），旋紧管盖。3.注意事项：若遇阻力或患者剧烈不适，立即停止操作；采样后嘱患者避免擤鼻，防止样本泄漏。（二）口咽拭子采样（儿童、鼻咽部禁忌者适用）1.患者配合：头部微仰，张口发“啊”音，充分暴露咽后壁、扁桃体。2.采样操作：拭子越过舌根，在咽后壁、双侧扁桃体隐窝处各擦拭至少3次（总时长≥15秒），动作轻柔避免呕吐反射，后续处理同鼻咽拭子。3.特殊情况：对呕吐敏感者，可提前含服利多卡因胶浆（需评估过敏史）；采样后及时清理呕吐物，使用含氯消毒剂覆盖消毒30分钟。（三）样本标识与封装采样管外贴唯一条码，标注受检者姓名、采样时间、采样类型；将采样管放入密封袋（第一层），再放入生物安全运输箱（内置冰排，温度2~8℃），随附《样本转运单》（含受检者信息、采样时间、检测目的）。三、样本转运与实验室接收：全程冷链与合规核查（一）转运要求1.包装合规：采用UN2814生物安全运输箱（符合WHO《实验室生物安全手册》要求），内层密封袋需防渗漏，外层箱体外贴“感染性物质”标识。2.运输时限：常温下（25℃以下），样本需在6小时内送达实验室；若超过6小时，需2~8℃冷链运输，且总转运时间不超过24小时（特殊情况可-70℃冻存，但需避免反复冻融）。3.交接记录：转运人员与实验室接收人员双签字确认，记录样本数量、状态（是否泄漏、保存液是否足量）、运输时间。（二）实验室接收核查1.外观检查：确认运输箱无破损、密封袋无泄漏、样本管无裂纹，保存液无浑浊/沉淀。2.信息核对：逐一核对样本条码与转运单信息，记录异常样本（如保存液不足、拭子外露），及时反馈采样点重新采样。3.样本暂存：合格样本立即转入2~8℃冰箱暂存（≤24小时），或-20℃冻存（≤7天），-70℃长期保存（需避免反复冻融，影响核酸稳定性）。四、核酸提取与扩增：精准操作把控检测核心（一）实验室分区操作1.试剂准备区：在生物安全柜内配制扩增试剂（按说明书复溶、混匀，避免剧烈振荡产生气溶胶），分装至PCR反应管（每管体积与样本体积匹配），做好防污染标记。2.样本制备区：在生物安全柜内打开采样管，使用移液器吸取保存液（避免触碰拭子），加入核酸提取板（或提取管），按提取试剂说明书进行裂解、纯化（磁珠法需注意磁力架吸附时间，柱提法需注意离心转速）。3.扩增区：将提取的核酸（或提取产物）加入PCR反应管，设置扩增程序（以主流试剂为例：逆转录50℃15分钟，预变性95℃3分钟，循环扩增95℃15秒+55℃30秒，共45个循环，最后40℃30秒），扩增仪需提前预热，运行过程中禁止开盖。（二）关键质控点内标监控：每批样本需设置阴性对照（无模板水）、阳性对照（已知阳性质控品）、弱阳性对照（浓度接近检测限，验证灵敏度），若内标未扩增（排除试剂/操作问题），或阳性对照未出峰，需重新实验。防污染措施：各区工具（移液器、离心管、吸头）专用，每次实验后紫外线照射30分钟（生物安全柜、扩增仪），地面及台面用含氯消毒剂擦拭。五、结果判读与报告：科学解读+合规上报（一）结果判读标准1.阴性结果：靶基因（ORF1ab、N基因等）无扩增曲线，或Ct值＞40（需结合内标是否正常，排除采样/提取失败）。2.阳性结果：至少1个靶基因Ct值≤35，或复检后Ct值≤40（需满足“双靶标阳性”或“单靶标阳性+临床症状/影像学支持”，避免假阳性）。3.无效结果：内标未扩增（操作失误或样本抑制）、扩增曲线异常（如基线漂移），需重新采样检测。（二）报告流程1.原始记录：实验人员记录扩增曲线、Ct值、质控结果，双人核对后签字。2.报告签发：检验医师结合临床信息（如流行病学史、症状）审核报告，阳性结果需立即电话通知受检者及属地疾控，同步上传至“新冠病毒核酸检测信息系统”。3.结果追溯：保存原始数据（扩增曲线、样本条码）至少3个月，便于复核或溯源。六、质量控制与安全管理：全流程风险防控（一）室内质量控制日常质控：每日实验前运行设备质控（PCR仪温度校准、核酸提取仪性能验证）；每批检测设置阴/阳/弱阳性对照，监控试剂稳定性。偏差处理：若质控失败，立即暂停检测，排查试剂批次、操作流程、设备故障，待问题解决后重新实验。（二）生物安全防护个人防护：采样/检测人员全程穿戴防护装备，每2小时更换手套（污染时立即更换），脱卸装备时严格遵循“七步洗手法”，避免污染眼、口、鼻。废弃物处理：采样拭子、废弃试剂管等装入双层医疗废物袋，高压灭菌（121℃，30分钟）后按医疗废物处置；实验室污水需经消毒处理（余氯≥2mg/L，作用1小时）后排入市政管网。（三）应急预案样本溢洒：立即用吸水纸覆盖，倒取1%含氯消毒剂浸润30分钟，按医疗废物处理溢洒物，同时消毒污染区域。职业暴露：皮肤暴露用肥皂水冲洗+75%酒精消毒；黏膜暴露用生理盐水冲洗，必要时报告医疗机构进行暴露后预防（如