凝血因子Ⅷ抑制物定量检测专家共识

概念与分类检测时机与方法检测步骤与注意事项标准化与应用CONTENTS目

录Bethesda

单位介绍Bethesda

单位(BU)

是衡量凝血因

子VⅢ抑制物含量的单位，定义为使正

常混合血浆的FVⅢ活性减少50%的含

量。FV

抑制物阳性标准连续两次检测中，患者血浆稀释度的

倒数即FVⅢ抑制物滴度≥0.6BU/ml

时，可判定为FVⅢ抑制物阳性。凝血因子VII抑制物定义凝血因子VⅢ抑制物是获得性血友病

A的诊断指标，用于监测外源性FVⅢ

输注后患者产生的抑制物。基本概念介绍抑制物类型划分抗FVII同种抑制物主要存在于血友病A患者中，多为1

型抑制物，影响凝血因子IX的结合抑制物滴度分类根据FVⅢ抑制物滴度，分为低滴度

抑制物(5

.0

BU/ml)

和高滴度抑

制物(≥5.0

BU/ml)。抗

FVII自身抑制物主要存在于获得性血友病患者中，

多为2型抑制物，干扰磷脂和血管性血友病因子的结合。滴度分类的临床意义根据FVⅢ抑制物的滴度，可以将其分

为低滴度和高滴度，有助于指导治疗

方案的选择和调整。低滴度抑制物低滴度抑制物是指FVⅢ抑制物滴度小

于5.0

BU/m1的情况。高滴度抑制物高滴度抑制物是指FVⅢ抑制物滴度大

于或等于5.0

BU/ml的情况。滴度分类方法首次拟确诊的HA

患者检测时机拟确诊或已确诊的AHA

患者，应进行

FVⅢ抑制物定量检测，门诊患者每周一

次，住院患者每周两次，直至完全缓

解后根据临床需求进行检测。已确诊HA

患者的监测时机在首次拟诊血友病A(HA)

患者时，特

别是轻型和中间型患者，为鉴别诊断

与获得性血友病A(AHA),

在接受替

代治疗前需进行FVⅢ抑制物定量检测。AHA

患者的检测时机对于已确诊的HA患者，除定期预防治

疗外，若治疗效果不佳、出血频率增

加等情况应及时检测EVⅢ抑制物，以调

整治疗方案。02.01.03.启动检测的时机正常混合血浆来源影响根据检测对象不同，正常混合血浆的来源分为抗人FVⅢ抑制物检测和抗rpFVⅢ抑制物检测，影响结果的解读

和应用。检测方法分类FVⅢ抑制物定量检测方法主要分为一

期凝固法和发色底物法，每种方法有

其独特的原理和应用范围。检测体系区分检测体系的不同主要体现在Bethesda

法和Nijmegen

法上，两

者在操作细节及特异性方面有所差异检测方法概述国际推荐与应用情况Nijmegen

法被国际血栓与止血学会推荐为FVⅢ抑制物定量检测的参考方

法，而Bethesda

法在国内仍广泛使

用

。检测原理的区别Bethesda

法基于活化部分凝血活

酶时间(APTT)的纠正能力，而Nijmegen

法则使用乏FVⅢ血浆作为

样本稀释液。特异性与假阳性率Nijmegen

法通过改良提高了FVⅢ抑

制物定量检测的特异性，降低了由其

他凝血因子抑制物引起的假阳性率。不同检测体系的比较样本采集与处理样本采集方法应使用含0.

109mol/L(3.2%)枸橼酸三钠抗凝剂的抗凝管进

行样本采集，并确保红细胞比容

≥55%时调整抗凝剂或采血量。样本处理与保存样本采集后需确认无血凝块存在

,宜在常温条件下1小时内送检

,采用规定的离心速度和时间离

心得到乏血小板血浆，建议当天

内完成检测。样本灭活步骤在

EVⅢ抑制物定量检测前，将样

本置于56℃孵育30分钟以灭活残

留的EVⅢ,减少其对检测结果的

干扰。商品化NPP

的使用与保存商品化的正常混合血浆(NPP)使用和保存应严格按照制造商提供的说明书进行操作，以确保其质量和有效性。自

制NPP

的制备要求自制NPP时，需选择20份常规凝血试验结果均正常的血浆，男女比例1:1,

且排除特定健康状况或治疗的个体。NPP

的FVII:C

检测标准自制NPP的EVⅢ:c结果应在958至105%之间，确保其活性符合标准，以保

证FVⅢ抑制物定量检测的准确性。正常混合血浆准备检测限与灰区当原倍管剩余FVⅢ:C758

时，FVⅢ抑制

物滴度为0.42

BU/ml;

灰区设为2.0BU/ml,可通过回收试验确认。参考范围设定目前公认的临床意义FVⅢ抑制物滴度为“≥0.6BU/ml

”,建议报告时以

此为参考范围。FVII抑制物滴度计算根据公式计算样本的FVⅢ抑制物滴度，需将FVⅢ抑制物滴度计算系数

代入公式。结果计算与解释检测流程标准化01

(样本处理与准备确保使用含0.109mol/

工枸橼酸三钠抗

凝剂的抗凝管采集样本，并采用规定的离

心速度和时间分离血浆，以获得适合检测

的乏血小板血浆。03

□D剩

余FVII:C检测与结果计算通过标准管与检测管分别检测EVⅢ:C或使

用标准管制定标准曲线两种方法进行剩余

FVⅢ:C检测，并根据公式计算FVⅢ抑制物

滴度，选择最接近50%稀释度的检测结果

进行报告。02正常混合血浆的准备当检测抗人FVⅢ抑制物时，可使用商品化的

NPP或自制NPP;

而检测抗rpEVⅢ抑制物时

,则需使用商品化的rpFVⅢ作为NPP,确保

其活性接近100%。注意事项汇总中和性抑制物与非中和性抑制物FVⅢ抑制物定量检测主要针对中和性抑制物，即免疫球蛋白G(IgG),而非中

和性抑制物则通过其他方法检测。样本保存与灭活处理样本需在特定条件下保存，所有待测样本均需经过56℃孵育30分钟灭活处理以

减少干扰。1型抑制物与2型抑制物HA患者的抗EVⅢ同种抑制物多为1型抑制物，而AHA

患者的抗EVⅢ自身抑制物多

为2型抑制物，两者动力学特征不同。检测方法的标准化需求当前FVⅢ抑制物定量检测存在影响因素

多、自动化程度低等问题，亟需标准

化操作