TYNBX021-2020花椒及其制品中花椒麻素的测定高效液相色谱法

ICS67.220.10

B04

团体标准

T/YNBX021—2020

花椒及其制品中花椒麻素的测定

高效液相色谱法

DeterminationofalkylamidesinZanthoxylumanditsproduct—highperformance

liquidchromatography

2020-07-15发布2020-07-20实施

云南省标准化协会发布

T/YNBX021—2020

花椒及其制品中花椒麻素的测定高效液相色谱法

1范围

本标准规定了花椒及其制品中花椒麻素的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于鲜花椒、干花椒、花椒粉、花椒油和花椒调味油等花椒及其制品中花椒麻素的测定。

本方法的检出限为0.03mg/kg，定量限为0.10mg/kg。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3原理

花椒样品中花椒麻素经无水乙醇恒温超声波提取，过滤，定容后，采用反相C18色谱柱分离，检测

波长280nm，用高效液相色谱仪进行测定，按面积归一化法与羟基-α-山椒素对照系列溶液比较定性、

定量。

4试剂和材料

除非另有说明，在分析中仅使用分析纯的试剂，水为GB/T6682规定的一级水。

4.1试剂

4.1.1甲醇（CH3OH，CAS：67-56-1）：色谱纯。

4.1.2乙腈（CH3CN，CAS：107-16-4）：色谱纯。

4.1.3无水乙醇（C2H6O，CAS：64-17-5）。

4.2羟基-α-山椒素标准品（C16H25NO2，CAS:83883-10-7）：纯度≥95%。

4.3标准品溶液

4.3.1羟基-α-山椒素标准品储备溶液：准确称取羟基-ɑ-山椒素10mg（精确到0.1mg），于10mL

棕色容量瓶中，用甲醇溶液（4.1.1）溶解并稀释至刻度，配制成浓度为1000mg/L的羟基-α-山椒素对

照储备溶液，-18℃以下避光保存，有效期一年。

4.3.2羟基-α-山椒素对照品储备溶液的标定：将对照品储备溶液用甲醇溶液（4.1.1）稀释一定的倍数，

得到稀释液，将稀释液置于1cm比色皿中，以甲醇溶液（4.1.1）为参比，在280nm处测定吸光值，

使吸光值在0.3-0.7范围内，否则应调整稀释液浓度，再重新测定吸光度。

对照品储备溶液中羟基-α-山椒素浓度以C计，数值以mg/mL表示，按公式（1）计算。

1

T/YNBX021—2020

AVP

C.......................................................（1）

360

式中：

C对照品储备溶液中羟基-α-山椒素浓度，mg/mL；

A对照品储备溶液的稀释液的吸光值；

V对照品储备溶液的稀释至稀释液体积，mL；

P按照面积归一化法得到的对照品储备溶液中羟基-α-山椒素的峰面积比例；

3601‰浓度的羟基-α-山椒素溶液在甲醇中波长280nm处的吸收系数，L/g·cm。

4.3.3羟基-α-山椒素标准品工作溶液：将标定好的羟基-α-山椒素储备溶液用甲醇溶液（4.1.1）稀释一

定的倍数，制成浓度约为500mg/L的溶液，即得。-4℃冷藏保存，有效期3个月。

4.3.4滤膜：0.22μm，有机相。

5仪器和设备

5.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器。

5.2天平：感量0.1mg和0.001g。

5.3粉碎机。

5.4组织捣碎机。

5.5样品筛：20目。

5.6超声波清洗器：功率不低于300W。

5.7离心机：转速不小于5000r/min，离心管容量50mL。

6分析步骤

6.1试样制备

6.1.1鲜花椒样品经组织捣碎机捣碎混匀。

6.1.2干花椒样品粉碎，过20目筛。

6.1.3花椒粉、花椒油和花椒调味油等充分混匀后直接取样。

6.2试样处理

6.2.1鲜花椒

称取试样1.0g（精确至0.001g）于50.0mL离心管中，加入20mL无水乙醇（4.1.3），30℃恒温

超声处理20min，以5000r/min离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，残渣以无水乙醇（4.1.3）

重复提取1次，合并上清液，用无水乙醇（4.1.3）定容至50mL。过0.22μm有机相滤膜（4.4）后待测。

6.2.2干花椒和花椒粉

称取试样0.5g（精确至0.001g）于50.0mL离心管中，加入20mL无水乙醇（4.1.3），30℃恒温

超声处理20min，以5000r/min离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，残渣以无水乙醇（4.1.3）

重复提取1次，合并上清液，用无水乙醇（4.1.3）定容至50mL。过0.22μm有机相滤膜（4.4）后待测。

6.2.3花椒油和花椒调味油

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T/YNBX021—2020

称取试样2.0g（精确至0.001g）于50.0mL离心管中，加入20mL无水乙醇（4.1.3），30℃恒温

超声处理20min，以5000r/min离心5min，收集上清液于50mL容量瓶中，残渣以无水乙醇（4.1.3）

重复提取1次，合并上清液，用无水乙醇（4.1.3）定容至50mL。过0.22μm有机相滤膜（4.4）后待测。

6.3仪器参考条件

6.3.1高效液相色谱参考条件

a)色谱柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm）或相当者；

b)流动相：乙腈-水（65:35，体积比）；

c)流速：0.40mL/min；

d)检测波长：280nm；

e)柱温：30℃；

f)进样量：10μL。

6.3.2色谱测定

准确吸取制备液（6.2）10μL，注入高效液相色谱仪，用羟基-α-山椒素对照品工作溶液（4.3.3）制

作浓度分别为0.2mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L标准曲线，进行高

效液相色谱测定。

7结果计算与表达

样品的高效液相色谱图中应呈现4个特征峰，以4种特征峰的峰面积总和作为供试品中花椒麻素

峰面积。试样中花椒麻素以含量计，数值以‰表示，按式（2）计算。

AV

1...........................................................（2）

mA0

式中：

试样中花椒麻素的含量，‰；

试样溶液中花椒麻素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/mL）；

A1供试品溶液中花椒麻素的峰面积；

V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）；

m试样质量，单位为克（g）；

A

0对照品工作溶液中羟基-α-山椒素的峰面积；

计算结果保留小数点后两位有效数字。

8重复性

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

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T/YNBX021—2020

AA

附录A

（资料性附录）

对照品溶液、花椒样品色谱图

A.1羟基-ɑ-山椒素对照品溶液色谱图见图A.1

图A.1羟基-ɑ-山椒素对照品溶液色谱图

A.2花椒样品溶液色谱图见图A.2

图A.2花椒样品溶液色谱图

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T/YNBX021—2020

附录B

（资料性附录）

花椒样品溶液HPLC参考保留时间表

B.1花椒样品溶液HPLC参考保留时间见表B.1

表B.1花椒样品HPLC参考保留时间表

组分名称保留时间（min）相对保留时间（min）

羟基-ε-山椒素10.9210.95

羟基-α-山椒素11.5311.00

羟基-β-山椒素