乳腺癌HER2检测指南（2025版）

乳腺癌HER2检测指南（2025版）乳腺癌作为全球女性发病率最高的恶性肿瘤，其分子分型指导下的精准治疗已成为临床共识。人表皮生长因子受体2（HER2）状态是乳腺癌重要的分子标志物之一，直接影响治疗方案选择与预后评估。随着检测技术的进步与临床研究的深入，2025年版乳腺癌HER2检测指南在整合最新循证医学证据的基础上，对检测流程、技术规范、质量控制及结果判读进行了系统性更新，旨在为临床提供更精准、更规范的检测标准。一、检测前样本管理规范样本质量是保证HER2检测准确性的首要环节，需从采集、固定、处理全流程严格把控。1.样本类型与采集检测样本应优先选择浸润性癌组织，原位癌成分不单独用于HER2状态判定。手术切除标本需选取肿瘤核心区域（非坏死、非退变区），取材大小建议不小于5mm×5mm×2mm；空心针穿刺活检标本需至少包含2条完整肿瘤组织条，每条长度≥10mm；细胞学标本（如细针穿刺）需确保涂片或细胞块中肿瘤细胞比例≥50%，且细胞形态完整。2.固定与处理所有组织样本应在离体30分钟内完成固定，采用10%中性缓冲福尔马林（pH6.8-7.2），固定液体积与组织体积比≥10:1。固定时间需严格控制：小标本（如穿刺组织）固定6-24小时，大标本（如手术切除标本）固定6-72小时，避免固定不足（<6小时）或过度固定（>72小时）导致抗原丢失或结构破坏。固定后标本需在48小时内完成脱水、透明、浸蜡及包埋，包埋时应保持组织切面与蜡块表面平行，避免倾斜导致切片厚度不均。3.样本预处理评估检测前需通过HE染色切片进行预评估：①肿瘤细胞占比需≥10%（若肿瘤细胞占比5%-10%，需备注说明并谨慎判读）；②排除坏死、出血及严重纤维化区域；③确认组织为浸润性癌（导管原位癌需与浸润性成分区分）。若样本不符合上述要求，应及时联系临床重新取材。二、检测技术选择与操作规范HER2检测需采用经国家药品监督管理局（NMPA）批准的检测试剂，推荐采用免疫组织化学法（IHC）联合原位杂交法（ISH）的分层检测模式，其中IHC为初筛，ISH为IHC2+结果的确认方法。（一）免疫组织化学法（IHC）1.试剂与设备使用抗HER2鼠单克隆抗体（如4B5克隆）或兔单克隆抗体（如SP3），检测系统需为EnVision法或类似增强系统。实验需设置阳性对照（已知HER23+乳腺癌组织）和阴性对照（省略一抗或使用无关抗体）。2.操作流程切片厚度4-5μm，经脱蜡、水化后进行抗原修复（推荐高压热修复，pH8.0-9.0EDTA缓冲液），孵育一抗（37℃30分钟或4℃过夜），二抗孵育（37℃30分钟），DAB显色（控制显色时间5-10分钟，避免过染），苏木精复染后封片。3.判读标准仅评估浸润性癌细胞的细胞膜染色强度，按以下标准分级：-0：无染色或≤10%肿瘤细胞弱且不完整的膜染色；-1+：>10%肿瘤细胞弱且不完整的膜染色（仅基底侧或侧缘染色）；-2+：>10%肿瘤细胞中等完整膜染色（细胞膜连续但着色浅），或≤10%肿瘤细胞强完整膜染色；-3+：>10%肿瘤细胞强且完整的膜染色（细胞膜全周连续深染）。其中，IHC3+直接判定为HER2阳性，IHC0/1+判定为阴性，IHC2+需进一步行ISH检测。（二）原位杂交法（ISH）ISH包括荧光原位杂交（FISH）、显色原位杂交（CISH）、银染原位杂交（SISH）及双重原位杂交（DISH），可根据实验室条件选择，但需保证结果的可比性。1.FISH检测使用HER2（17q12）和CEP17（17p11.1-q11.2）双探针试剂盒。切片厚度4-5μm，经脱蜡、水化、胃蛋白酶消化（37℃10-20分钟，以组织呈毛玻璃样为度）、变性（80℃5-10分钟）、杂交（37℃过夜）、洗片（2×SSC/0.3%NP-40，73℃2分钟）后，用DAPI复染。判读时需计数至少20个非重叠、核完整的浸润性癌细胞，计算HER2/CEP17比值（R值）及平均HER2拷贝数（H值）：-R≥2.0且H≥4.0：阳性；-R<2.0且H<4.0：阴性；-R<2.0但H≥4.0且<6.0：灰区（需结合临床情况或重新计数50个细胞）；-R≥2.0但H<4.0：需确认是否为17号染色体多体（CEP17信号≥3个细胞占比>50%时，判定为阴性）。2.CISH/SISH检测基于生物素-亲和素系统或银染显色，结果判读需在光学显微镜下观察：HER2信号为棕褐色（CISH）或黑色（SISH）圆点，CEP17信号（可选）为红色（CISH）或其他对比色。计数20个肿瘤细胞，HER2信号≥6个/细胞或HER2/CEP17≥2.0为阳性；HER2信号<4个/细胞或HER2/CEP17<2.0为阴性；4-5个/细胞或HER2/CEP17<2.0但HER2信号≥4个/细胞为灰区，需结合临床。3.DISH检测同时检测HER2和Ki-67等指标，可在同一张切片上完成多标志物分析，适用于小标本或需联合检测的场景，判读标准与FISH一致。三、质量控制与实验室管理1.人员资质检测人员需经病理学或分子检测专业培训，IHC判读需由中级及以上职称病理医师完成，ISH判读需由经过认证的技术人员或病理医师操作，结果需经双人复核。2.室内质控每批次检测需包含阳性、阴性对照，对照结果不符合预期时需停止检测并排查原因。IHC需定期进行抗体效价验证（每6个月1次），ISH需校准荧光显微镜（每3个月1次）及显色系统（每批次）。3.室间质评实验室需每年参加国家卫生健康委临床检验中心（NCCL）或国际权威机构（如CAP）的室间质评，未通过者需整改并重新检测历史样本。4.设备管理切片机需定期校准（每6个月1次），保证切片厚度均匀（4-5μm）；荧光显微镜需配置合适滤光片（HER2用FITC，CEP17用TexasRed），激发光强度需符合要求（避免信号衰减）；恒温设备（杂交仪、烤箱）温度误差需≤±1℃。四、结果报告与临床应用1.报告内容检测报告需包含：①患者基本信息（姓名、ID、样本类型）；②样本质量评估（肿瘤细胞占比、是否符合检测要求）；③检测方法（IHC/ISH具体类型）；④IHC评分（0/1+/2+/3+）；⑤ISH结果（R值、H值、细胞计数数量）；⑥最终判读结论（阳性/阴性/灰区）；⑦检测者与审核者签名及日期。灰区结果需备注“建议结合临床或重复检测”。2.临床意义HER2阳性（IHC3+或ISH阳性）提示患者适合抗HER2靶向治疗（如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、DS-8201等），且需关注肿瘤异质性（若阳性细胞占比<50%，需标注并与临床沟通）；HER2阴性（IHC0/1+或ISH阴性）患者不推荐抗HER2治疗，需结合其他分子标志物（如ER、PR、Ki-67）制定内分泌治疗或化疗方案。3.特殊情况处理新辅助治疗前需重新检测原发灶HER2状态（治疗可能导致表达变化）；转移性病灶需检测转移灶HER2状态（约15%原发灶阴性患者转移灶阳性）；导管原位癌（DCIS）的HE