《药品生物检定技术》课件-第十三章 基因工程药物的生物检定

第十三章

基因工程药物的生物检定第一节概述第二节

胰岛素的生物检定第三节

重组人生长激素的生物检定第四节

重组人干扰素的生物检定目录第十三章基因工程药物的生物检定学习目标掌握

胰岛素、生长激素及干扰素的生物活性检定方法

熟悉

基因工程药物的检定项目及生物活性检定的原理了解

基因工程药物的特点及作用第十三章基因工程药物的生物检定概述第一节第十三章基因工程药物的生物检定第一节概述（1）概念在体外将基因剪切组合，获得目的基因，

导入受体细胞（哺乳动物、酵母、大肠埃希菌或昆虫的细胞）中进行增殖、表达，

制成的用于预防、治疗或诊断疾病的生物制品，称为基因工程药物。

1.

基因工程药物的概念与分类（2）分类

基因工程药物包括重组蛋白多肽类药物和核酸类药物①重组蛋白多肽类药物

干扰素、胰岛素、生长激素等。

②核酸类药物

反义核酸药物（如福米韦生）、非反义的寡核苷酸等。

1.

基因工程药物的概念与分类第一节概述（1）

生产效率高，解决了生物原料短缺的问题（2）靶向治疗，药物毒性小（3）质量评价更复杂安全性检查

生物活性检查

全过程质量监控

2.

基因工程药物的特点第一节概述3.

基因工程药物的检定项目（1）

理化检定

外观检查、pH检查、水分含量测定、蛋白质含量测定、等电点、分子量测定等。（2）安全检定

无菌检查、细菌内毒素检查、异常毒性试验、热原检查

等。（3）效力检定

效价测定或酶活力测定（适用于酶类、重组蛋白质类等药物）。第一节概述胰岛素的生物检定

第二节第十三章基因工程药物的生物检定1.

胰岛素及其作用（1）

胰岛素由胰脏内的胰岛B细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖等的刺激而分泌的一种蛋白质激素。

（2）

胰岛素的作用

①促进细胞对葡萄糖的利用，促进糖原合成，使血糖降低；②

抑制脂肪的分解，促进脂仿的合成；③

促进蛋白质的合成，有利于生长。

第二节胰岛素的生物检定体内血糖控制2.

胰岛素生物效价的检定方法—小鼠血糖法（1）检定原理利用胰岛素的降糖作用，通过对小鼠血糖的降糖作用来计算胰岛素供试品的效价。（2）检定方法

①将小鼠按体重随机分成4组，各组小鼠分别自皮下注入一种浓度的标准品或供试品稀释液。注射后40分钟，测各血样的血糖值。

第二节胰岛素的生物检定2.

胰岛素生物效价的检定方法—小鼠血糖法

②第一次给药后，按双交叉设计，对每组的各鼠进行第二次给药，给药后40分钟的血糖值。

双交叉实验设计表

第二节胰岛素的生物检定第一组第二组第三组第四组第一次试验标准高标准低供试高供试低第二次试验供试低供试高标准低标准高（2）检定方法2.

胰岛素生物效价的检定方法—小鼠血糖法

③结果处理照《中国药典》（2015年版）生物检定统计法中量反应平行线测定法计算效价及实验误差。可采用BS2000生物统计分析系统计算结果。

第二节胰岛素的生物检定（2）检定方法BS2000生物统计分析系统界面重组人生长激素的生物检定

第三节第十三章基因工程药物的生物检定1.重组人生长激素及其作用（1）生长激素

是由腺垂体细胞分泌的一种蛋白类激素，

人生长激素是由191个氨基酸组成的单链多肽。

（2）

生理作用

可促进骨、肌肉和蛋白质的合成，从而加速骨骼和肌肉的生长发育，临床主要用于侏儒症、

成人生长激素缺乏症等。

第三节重组人生长激素的生物检定2.

重组人生长激素生物效价的检定方法

（1）去垂体大鼠体重法

通过比较生长激素标准品与供试品对幼龄去垂体大鼠体重增加的程度，以测定供试品的效价

。

（2）去垂体大鼠胫骨法

通过比较生长激素标准品与供试品对去垂体大鼠胫骨骨骺板宽度增加的程度，以测定供试品的效价。

第三节重组人生长激素的生物检定2.

重组人生长激素生物效价的检定方法

（1）去垂体大鼠体重法

取大鼠，摘除垂体，按体重分成4组。分别自颈部皮下注射一种浓度的标准品溶液或供试品溶液，每日1次，连续6日。

处死大鼠，称体重

，以每只动物给药后体重增加的克数作为反应值，照生物检定统计法中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。

第三节重组人生长激素的生物检定2.

重组人生长激素生物效价的检定方法

（2）去垂体大鼠胫骨法

本法可与去垂体大鼠体重法同步进行。待体重法实验结束后，取下两腿胫骨，从胫骨近心端顶部中间沿矢状面切开，染色

、水洗，置水中强光照射至棕黑色，固定，测量时沿创面切薄片，测量胫骨骨骺板宽度，以此为反应值，照生物检定统计法中的量反应平行线测定法计算效价及实验误差。

第三节重组人生长激素的生物检定重组人干扰素的生物检定

第四节第十三章基因工程药物的生物检定1.重组人干扰素及其作用

干扰素是机体被病毒感染后由机体产生的一种蛋白质。具有抑制细胞分裂、调节免疫、抗病毒、抗肿瘤等多种作用。干扰素是目前最主要的抗病毒感染和抗肿瘤的生物制品。

第四节重组人干扰素的生物检定2.重组人干扰素生物效价的检定方法重组人干扰素生物效价的检定方法为细胞病变抑制法（1）

基本原理：干扰素可抑制水疱性口炎病毒对人羊膜细胞的破坏，

根据存活WISH细胞的数量来判断干扰素的抗病毒活性。

第四节重组人干扰素的生物检定2.重组人干扰素生物效价的检定方法

（2）操作方法：①

将WISH细胞悬液，加入96孔细胞培养板中，培养。②将标准品及样品在另一96孔细胞培养板中作4倍梯度稀释，然后将梯度稀释液转移至①项中细胞培养板的相应位置。

第四节重组人干扰素的生物检定96孔细胞培养板2.重组人干扰素生物效价的检定方法

③取已加样的细胞培养板，加入病毒液培养

、染色

、脱色、比色

记录测定结果，采用计算机程序或直线回归计算法进行处理，计算供试品生物学活性。

第四节重组人干扰素的生物检定小结

1.胰岛素效价检定方法为小鼠血糖法，它是利用胰岛素的降糖作用，通过对小鼠血糖的降糖作用来计算胰岛素供试品的效价。2.重组人生长激素效价的检定方法有：

去垂体大鼠体重法和去垂体大鼠胫骨

法，

它们是利用生长激素的促生长作用

，通过测量去垂体大鼠体重及胫骨骨骺板宽度