2025年河北pcr上岗证考试题及答案

2025年河北pcr上岗证考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共50分）1.PCR技术中，引物的作用是（）A.提供模板B.激活Taq酶C.使DNA双链解开D.引导DNA合成的起始答案：D。引物是一小段单链DNA或RNA，它能与模板DNA特定区域互补结合，为DNA聚合酶提供起始合成的3'-OH末端，引导DNA合成的起始。2.以下哪种物质不是PCR反应体系的必需成分（）A.dNTPB.引物C.模板DNAD.核酸酶答案：D。PCR反应体系的必需成分包括模板DNA、引物、dNTP（脱氧核苷三磷酸）、DNA聚合酶（如Taq酶）和缓冲液等。核酸酶会降解核酸，不是PCR反应所需的成分。3.PCR反应中变性温度一般为（）A.55℃B.72℃C.9495℃D.4℃答案：C。变性步骤是使双链DNA解旋为单链，通常在9495℃下进行，这个温度可以破坏DNA双链之间的氢键。4.实时荧光定量PCR技术中，SYBRGreenⅠ的作用是（）A.标记引物B.标记探针C.与双链DNA结合发光D.与单链DNA结合发光答案：C。SYBRGreenⅠ是一种荧光染料，它能与双链DNA结合，在结合双链DNA后荧光信号增强，通过检测荧光信号的强度来定量PCR产物。5.在PCR实验中，防止污染的措施不包括（）A.设立阴性对照B.不同操作区域使用不同的移液器C.实验人员不戴口罩和手套D.对实验器材进行严格的消毒处理答案：C。实验人员不戴口罩和手套会增加污染的风险，设立阴性对照可以监测是否存在污染，不同操作区域使用不同的移液器以及对实验器材进行严格的消毒处理都是防止污染的重要措施。6.下列关于PCR引物设计的原则，错误的是（）A.引物长度一般为1825bpB.引物的GC含量一般为40%60%C.引物3'端可以有多个连续的G或CD.引物应避免形成二级结构答案：C。引物3'端应避免有多个连续的G或C，因为这样可能导致非特异性扩增。引物长度一般为1825bp，GC含量一般为40%60%，且应避免形成二级结构。7.逆转录PCR（RTPCR）的第一步是（）A.以RNA为模板合成cDNAB.以cDNA为模板进行PCR扩增C.提取总RNAD.设计引物答案：A。RTPCR首先需要以RNA为模板，在逆转录酶的作用下合成cDNA，然后再以cDNA为模板进行PCR扩增。提取总RNA是实验的前期准备工作，设计引物贯穿于整个实验设计阶段。8.多重PCR是指（）A.同时扩增多个不同的靶序列B.多次进行PCR反应C.使用多种引物进行一次PCR反应D.以上都不对答案：A。多重PCR是在同一PCR反应体系中加入多对引物，同时扩增多个不同的靶序列。9.PCR产物的检测方法不包括（）A.琼脂糖凝胶电泳B.聚丙烯酰胺凝胶电泳C.质谱分析D.酶联免疫吸附测定（ELISA）答案：D。PCR产物的检测方法常见的有琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和质谱分析等。ELISA主要用于检测抗原或抗体，不是直接检测PCR产物的方法。10.在PCR反应中，Taq酶的最适反应温度是（）A.55℃B.72℃C.94℃D.4℃答案：B。Taq酶是一种热稳定的DNA聚合酶，其最适反应温度为72℃，在这个温度下它具有较高的活性，能够有效地合成DNA。11.以下关于PCR实验中模板DNA的说法，正确的是（）A.模板DNA的浓度越高越好B.模板DNA可以是基因组DNA、线粒体DNA等C.模板DNA不需要纯化D.模板DNA只能是双链DNA答案：B。模板DNA可以是基因组DNA、线粒体DNA等多种形式。模板DNA浓度过高可能会导致非特异性扩增，模板DNA通常需要进行一定的纯化以去除杂质，模板DNA也可以是单链DNA（如RTPCR中的cDNA）。12.荧光定量PCR中，Ct值是指（）A.达到荧光阈值时的循环数B.荧光信号的强度C.扩增产物的浓度D.反应的时间答案：A。Ct值（Cyclethreshold）是指在荧光定量PCR中，荧光信号达到设定的荧光阈值时所对应的循环数。它与起始模板的拷贝数呈反比关系。13.下列哪种酶可以用于PCR反应（）A.限制性内切酶B.DNA连接酶C.Taq酶D.碱性磷酸酶答案：C。Taq酶是PCR反应中常用的DNA聚合酶。限制性内切酶用于切割DNA分子，DNA连接酶用于连接DNA片段，碱性磷酸酶用于去除DNA或RNA末端的磷酸基团，它们都不用于PCR反应。14.PCR反应的基本步骤顺序是（）A.变性退火延伸B.退火变性延伸C.延伸变性退火D.变性延伸退火答案：A。PCR反应的基本步骤依次为变性（使双链DNA解旋为单链）、退火（引物与模板DNA互补结合）和延伸（DNA聚合酶在引物的引导下合成新的DNA链）。15.在PCR实验中，阳性对照的作用是（）A.检测是否存在污染B.验证实验体系的有效性C.确定模板DNA的浓度D.以上都不对答案：B。阳性对照是已知含有靶序列的样品，通过对阳性对照进行PCR扩增，可以验证实验体系是否能够正常工作，即验证实验体系的有效性。阴性对照用于检测是否存在污染。16.以下关于PCR引物的保存，正确的是（）A.常温保存B.4℃短期保存，-20℃长期保存C.-80℃短期保存，-20℃长期保存D.以上都不对答案：B。引物一般4℃短期保存，-20℃长期保存，常温保存会使引物降解，-80℃通常不是引物保存的常规温度。17.数字PCR（dPCR）与传统PCR的主要区别在于（）A.dPCR不需要引物B.dPCR可以绝对定量C.dPCR反应时间更短D.dPCR不需要模板DNA答案：B。数字PCR可以将PCR反应体系分割成大量的微小反应单元，通过统计阳性反应单元的数量实现对目标核酸的绝对定量，而传统PCR通常是相对定量。dPCR同样需要引物和模板DNA，反应时间并不一定比传统PCR短。18.PCR反应中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.作为DNA合成的原料C.激活Taq酶D.调节反应体系的pH答案：B。dNTP（脱氧核苷三磷酸）包括dATP、dTTP、dCTP和dGTP，它们是DNA合成的原料，在DNA聚合酶的作用下，dNTP中的脱氧核苷酸被依次添加到引物的3'-OH末端，合成新的DNA链。19.以下哪种情况可能导致PCR扩增失败（）A.引物设计不合理B.模板DNA浓度过低C.Taq酶活性降低D.以上都是答案：D。引物设计不合理可能导致引物不能与模板DNA有效结合，模板DNA浓度过低可能使扩增信号微弱甚至无法扩增，Taq酶活性降低会影响DNA合成的效率，这些情况都可能导致PCR扩增失败。20.在实时荧光定量PCR中，标准曲线的作用是（）A.确定Ct值B.计算扩增效率C.定量未知样品中的靶序列含量D.以上都是答案：D。通过绘制标准曲线，可以根据已知浓度的标准品的Ct值与浓度的关系，确定Ct值与浓度之间的线性关系，从而计算扩增效率，并且可以根据未知样品的Ct值，通过标准曲线定量未知样品中的靶序列含量。21.巢式PCR是指（）A.两次PCR反应使用同一对引物B.两次PCR反应使用两对不同的引物，第二次引物位于第一次引物的内侧C.两次PCR反应使用两对不同的引物，第二次引物位于第一次引物的外侧D.以上都不对答案：B。巢式PCR进行两次PCR反应，使用两对不同的引物，第二次引物位于第一次引物的内侧，这样可以提高PCR反应的特异性和灵敏度。22.PCR实验中使用的缓冲液的主要作用是（）A.提供适宜的pH环境B.提供镁离子等金属离子C.维持反应体系的稳定性D.以上都是答案：D。PCR缓冲液可以提供适宜的pH环境，一般为8.39.0，同时提供镁离子等金属离子，镁离子是DNA聚合酶的激活剂，并且可以维持反应体系的稳定性。23.下列关于PCR技术应用的描述，错误的是（）A.用于基因克隆B.用于遗传病的诊断C.用于食品中微生物的检测D.不能用于病毒的检测答案：D。PCR技术可以用于基因克隆，通过扩增目的基因片段进行后续的克隆操作；可以用于遗传病的诊断，检测相关基因的突变情况；也可以用于食品中微生物的检测，检测食品中是否存在特定的微生物。同时，PCR技术在病毒检测方面应用广泛，如新冠病毒的检测等。24.实时荧光定量PCR中，内参基因的作用是（）A.作为阳性对照B.校正不同样品之间的加样误差和RNA质量差异C.提高扩增效率D.以上都不对答案：B。内参基因是在不同组织、细胞或处理条件下表达相对稳定的基因，在实时荧光定量PCR中使用内参基因可以校正不同样品之间的加样误差和RNA质量差异，使结果更具有可比性。25.在PCR反应中，延伸时间的确定主要取决于（）A.模板DNA的长度B.引物的长度C.Taq酶的活性D.反应体系的体积答案：A。延伸时间主要取决于模板DNA的长度，一般Taq酶在72℃下每分钟可以延伸12kb的DNA片段，因此根据模板DNA的长度来确定合适的延伸时间。二、多项选择题（每题3分，共30分）1.PCR技术的特点包括（）A.特异性强B.灵敏度高C.快速高效D.可自动化操作答案：ABCD。PCR技术通过引物与模板的特异性结合保证了特异性强；可以检测到极微量的模板DNA，灵敏度高；整个反应过程可以在短时间内完成，快速高效；并且可以通过自动化的PCR仪进行操作。2.以下哪些是PCR反应的影响因素（）A.引物浓度B.dNTP浓度C.镁离子浓度D.退火温度答案：ABCD。引物浓度过高或过低可能影响扩增的特异性和效率；dNTP浓度不合适会影响DNA合成；镁离子是DNA聚合酶的激活剂，其浓度对PCR反应有重要影响；退火温度影响引物与模板的结合，不合适的退火温度可能导致非特异性扩增。3.实时荧光定量PCR的优点有（）A.实时监测反应过程B.可进行定量分析C.灵敏度高D.特异性强答案：ABCD。实时荧光定量PCR可以在反应过程中实时监测荧光信号的变化，从而实时监测反应过程；通过标准曲线等方法可以进行定量分析；具有较高的灵敏度和特异性。4.PCR实验中防止交叉污染的措施有（）A.设立不同的操作区域B.严格遵守实验操作流程C.对实验器材进行定期消毒D.使用一次性耗材答案：ABCD。设立不同的操作区域（如试剂准备区、样品处理区、PCR扩增区和产物检测区）可以避免不同阶段的样品相互污染；严格遵守实验操作流程可以减少人为因素导致的污染；对实验器材进行定期消毒和使用一次性耗材可以有效防止交叉污染。5.逆转录PCR可用于（）A.检测RNA病毒的感染B.分析基因的表达水平C.克隆cDNAD.以上都不对答案：ABC。逆转录PCR可以以RNA为模板合成cDNA，因此可以用于检测RNA病毒的感染，通过检测病毒RNA来判断是否感染；可以分析基因的表达水平，通过检测特定基因的mRNA含量来反映基因的表达情况；也可以用于克隆cDNA，将目的基因的mRNA逆转录为cDNA后进行克隆操作。6.多重PCR的应用领域包括（）A.病原体的鉴别诊断B.基因分型C.肿瘤的早期诊断D.以上都不对答案：ABC。多重PCR可以同时扩增多个不同的靶序列，因此在病原体的鉴别诊断中，可以同时检测多种病原体；在基因分型中，可以同时检测多个基因位点；在肿瘤的早期诊断中，可以同时检测多个与肿瘤相关的基因。7.PCR产物的纯化方法有（）A.凝胶回收法B.柱式纯化法C.酒精沉淀法D.以上都不是答案：ABC。凝胶回收法是通过琼脂糖凝胶电泳将PCR产物分离后，从凝胶中回收目的条带；柱式纯化法是利用特殊的柱子对PCR产物进行吸附和洗脱；酒精沉淀法是通过加入酒精等试剂使PCR产物沉淀下来进行纯化。8.以下关于数字PCR的描述，正确的是（）A.可以实现绝对定量B.对样本起始量要求低C.不受PCR扩增效率的影响D.检测灵敏度高答案：ABCD。数字PCR可以将反应体系分割成大量微小单元，通过统计阳性单元的数量实现绝对定量；对样本起始量要求低，即使样本量很少也能进行检测；由于是通过计数阳性单元，不受PCR扩增效率的影响；具有较高的检测灵敏度。9.在PCR引物设计中，需要考虑的因素有（）A.引物的长度B.引物的GC含量C.引物的特异性D.引物的3'端碱基组成答案：ABCD。引物长度一般为1825bp较为合适；GC含量一般控制在40%60%；引物需要具有良好的特异性，避免与非靶序列结合；引物3'端碱基组成会影响引物与模板的结合和DNA合成的起始。10.PCR技术在法医学中的应用包括（）A.亲子鉴定B.个体识别C.犯罪现场物证的检测D.以上都不对答案：ABC。PCR技术可以通过扩增特定的基因位点，用于亲子鉴定，确定亲子关系；可以进行个体识别，通过检测个体的基因特征来确定身份；在犯罪现场，可以对物证（如血迹、毛发等）中的DNA进行PCR扩增和分析，为案件侦破提供线索。三、简答题（每题10分，共20分）1.简述PCR技术的基本原理。PCR技术即聚合酶链式反应，是一种体外扩增特定DNA片段的技术。其基本原理是基于DNA的半保留复制机制。首先，在高温（9495℃）下，双链DNA模板发生变性，氢键断裂，双链解旋为单链。然后，反应体系温度降低至合适的退火温度（一般55℃左右），引物与单链DNA模板的特定区