2025年核酸检测实操试题及答案

2025年核酸检测实操试题及答案一、单项选择题（每题2分，共20题）1.采集口咽拭子时，拭子应在两侧咽扁桃体及咽后壁擦拭的次数为：A.1-2次B.2-3次C.3-5次D.5-7次答案：C2.核酸检测实验室生物安全二级（BSL-2）实验室的核心工作区域，人员进入时应穿着的防护装备不包括：A.医用防护口罩（N95及以上）B.一次性工作帽C.护目镜或面屏D.防水围裙答案：D（防水围裙为样本处理区额外防护需求，非核心区必穿）3.新冠病毒核酸检测样本保存温度要求中，24小时内检测的样本应保存于：A.-20℃B.4℃C.室温（18-25℃）D.-80℃答案：B4.实时荧光PCR扩增仪的温度校准周期通常为：A.1个月B.3个月C.6个月D.12个月答案：C5.进行核酸提取时，若使用磁珠法，洗涤步骤中乙醇残留过多会导致的最直接影响是：A.扩增效率降低B.样本交叉污染C.提取时间延长D.磁珠回收率下降答案：A（乙醇残留会抑制PCR酶活性）6.鼻拭子采集时，拭子进入鼻腔的深度应为：A.1-2cmB.2-3cmC.3-4cmD.至鼻尖到耳垂距离的1/2答案：D（约4-5cm，具体以接触到鼻黏膜为准）7.实验室接收样本时，发现样本管标签模糊无法识别，正确的处理流程是：A.直接丢弃样本B.联系采样人员确认信息后补标C.自行推测样本信息并记录D.继续检测并在报告中备注“标签模糊”答案：B8.核酸检测结果判读时，若阴性对照Ct值为30且有扩增曲线，可能的原因是：A.引物探针浓度过高B.实验室环境污染C.样本量加样过多D.扩增仪温度偏差答案：B（阴性对照应无扩增或Ct>40）9.新冠病毒ORF1ab基因与N基因均为阳性时，正确的报告结论是：A.新冠病毒核酸阳性B.新冠病毒核酸可疑阳性C.新冠病毒核酸阴性D.需重复检测答案：A10.生物安全柜使用完毕后，需运行紫外线消毒的时间为：A.10分钟B.20分钟C.30分钟D.60分钟答案：C11.提取核酸时，若样本量为200μL，裂解液的推荐体积通常为：A.100μLB.200μLC.500μLD.1000μL答案：C（裂解液体积通常为样本量的2-3倍以确保充分裂解）12.扩增反应体系配置时，若将荧光探针误加为引物，可能导致的结果是：A.Ct值提前B.无扩增曲线C.熔解曲线异常D.内参基因阳性答案：B（探针为标记荧光基团的寡核苷酸，误作引物无法引发扩增）13.样本运输过程中，若冰袋完全融化且运输时间超过2小时，正确的处理方式是：A.直接进行检测B.离心后取上清检测C.灭活后重新保存于4℃D.视为无效样本并重新采集答案：D（运输条件不符合要求可能导致核酸降解）14.咽拭子采集时，被采集者出现刺激性咳嗽，采样人员应采取的防护措施是：A.立即后退1米B.暂停操作待其平复C.加快采样速度完成操作D.要求被采集者佩戴口罩后继续答案：B（避免因咳嗽导致气溶胶扩散，需待被采集者稳定后再操作）15.核酸提取仪每日使用前应进行的校准项目是：A.加样针液面探测功能B.磁珠吸附时间C.离心转速D.加热模块温度答案：A（确保加样准确性）16.实时荧光PCR反应中，内参基因的作用是：A.验证样本核酸提取效率B.区分不同病毒亚型C.提高扩增灵敏度D.缩短检测时间答案：A（内参基因检测人源基因，用于判断样本是否有效）17.实验室废弃物处理时，感染性废物应装入的垃圾袋颜色为：A.黑色B.黄色C.红色D.蓝色答案：B18.若某样本N基因Ct值为35，ORF1ab基因无扩增，内参基因Ct值为28，正确的处理是：A.报告阴性B.报告阳性C.重复检测并排查污染D.视为无效样本答案：C（单靶标阳性需排除污染或样本降解）19.核酸检测实验室分区中，扩增产物分析区（四区）的主要功能是：A.样本接收与处理B.核酸提取C.PCR体系配置D.扩增反应及结果分析答案：D20.医用防护口罩的正确佩戴方式是：A.金属鼻夹朝上，覆盖口鼻，按压鼻夹贴合面部B.金属鼻夹朝下，覆盖口鼻，无需按压鼻夹C.仅覆盖口部，鼻夹可随意放置D.佩戴后无需做密合性测试答案：A二、多项选择题（每题3分，共10题）1.口咽拭子采集的正确操作包括：A.被采集者头部微仰，嘴张大B.拭子避免接触舌部C.快速擦拭咽后壁1次后立即取出D.拭子插入采样管时避免触碰管口E.折断拭子时沿管身标记处折断答案：ABDE2.核酸检测实验室生物安全防护的核心要求包括：A.严格分区管理，单向流动B.实验人员培训合格后上岗C.每日记录实验室温湿度D.所有操作在生物安全柜内进行E.废弃物高压灭菌后处理答案：ABCE（部分简单操作可在超净台外进行，但需避免气溶胶扩散）3.影响核酸提取质量的因素有：A.样本保存时间过长B.裂解液与样本比例不当C.磁珠洗涤次数不足D.离心转速过高E.提取仪加样针堵塞答案：ABCDE4.实时荧光PCR结果判读的注意事项包括：A.观察扩增曲线是否呈S型B.阴性对照Ct值应>40或无扩增C.阳性对照Ct值应在试剂盒说明书范围内D.内参基因Ct值>35提示样本可能降解E.单靶标阳性需重复检测答案：ABCDE5.样本采集时的感染控制措施包括：A.采样人员每采1人更换1次手套B.采样区域每日至少2次消毒C.被采集者间隔1米以上排队D.采样后立即用75%乙醇消毒桌面E.废弃拭子放入黄色医疗废物袋答案：ABCDE6.核酸检测试剂验收时需核查的内容有：A.试剂批号与有效期B.运输保存条件是否符合要求C.包装是否完整无破损D.配套说明书是否齐全E.首次使用前进行性能验证答案：ABCDE7.实验室发生样本溢洒时的应急处理步骤包括：A.立即停止操作，疏散人员B.用吸水纸覆盖溢洒区域，倾倒10%次氯酸钠溶液C.静置30分钟后清理D.清理工具放入黄色废物袋高压灭菌E.记录溢洒事件及处理过程答案：BCDE（无需疏散人员，需佩戴额外防护后处理）8.鼻拭子采集的正确要点有：A.拭子沿下鼻道的底部向后缓慢插入B.遇到阻力时强行推进C.到达鼻咽部后轻轻旋转1-2圈D.停留时间不少于15秒E.取出时避免触碰鼻腔黏膜答案：ACD（遇到阻力应调整角度，不可强行推进；取出时需沿原路径缓慢退出）9.扩增仪维护的主要内容包括：A.定期清洁加热模块B.校准温度准确性C.检查光学系统灵敏度D.更换损坏的反应槽E.每月进行性能验证答案：ABCD（性能验证周期通常为每6个月）10.核酸检测报告的基本要素包括：A.检测机构名称及联系方式B.被检测者姓名、身份证号C.样本类型及采集时间D.检测方法及结果E.报告日期及检测人员签名答案：BCDE（联系方式非必含要素，需避免个人信息泄露）三、判断题（每题1分，共10题）1.采集咽拭子时，拭子可以接触被采集者的舌头、牙齿或唾液。（）答案：×（需避免接触其他部位以减少污染）2.核酸提取时，为提高效率，可将不同批次的样本混合提取。（）答案：×（需严格按批次处理，避免交叉污染）3.生物安全柜内操作时，手臂应快速移动以缩短时间。（）答案：×（缓慢移动避免干扰气流）4.扩增产物分析区可以使用与样本处理区相同的移液器。（）答案：×（需分区专用，避免污染）5.样本保存管的旋盖可以用手直接接触。（）答案：×（需戴手套操作，避免污染样本或接触病原体）6.若阴性对照出现扩增曲线，所有检测结果均需视为无效。（）答案：√（提示实验室污染，需排查后重新检测）7.核酸检测结果报告中，“未检测到新冠病毒核酸”等同于“阴性”。（）答案：√8.运输样本的冰排使用前需在-20℃以下冷冻24小时。（）答案：√9.提取后的核酸可在4℃保存24小时，长期保存需-80℃。（）答案：√10.实验室人员离开核心工作区时，应先脱去外层防护装备，再进行手消毒。（）答案：√四、简答题（每题5分，共6题）1.简述口咽拭子采集的完整操作流程。答案：①核对被采集者信息，确认无误；②指导被采集者头部微仰，嘴张大，发“啊”音（必要时用压舌板）；③取出无菌拭子，避免触碰其他物品；④将拭子越过舌根，在两侧咽扁桃体稍微用力擦拭至少3次，然后在咽后壁擦拭至少3次；⑤操作过程中避免拭子接触舌头、牙齿、唾液等；⑥迅速将拭子放入采样管，拭子头完全浸入保存液中；⑦沿采样管外壁标记的折断点折断拭子杆，旋紧管盖；⑧记录样本信息，放入转运箱。2.列举核酸检测实验室分区及各区域的主要功能。答案：①样本接收与处理区（一区）：样本验收、登记、灭活（如需）、分装；②核酸提取区（二区）：核酸提取、纯化；③PCR体系配置区（三区）：扩增反应体系配制、加样；④扩增产物分析区（四区）：PCR扩增、结果判读与分析。各区严格物理分隔，单向流动（一区→二区→三区→四区），不得逆向。3.简述磁珠法核酸提取的主要步骤及关键注意事项。答案：步骤：①样本裂解：加入裂解液使病毒包膜破坏，释放核酸；②磁珠结合：核酸与磁珠特异性结合（需充分混匀）；③洗涤：通过乙醇等溶液去除蛋白质、盐离子等杂质（洗涤次数需严格按试剂盒要求）；④洗脱：加入洗脱缓冲液使核酸与磁珠分离，收集核酸溶液。关键注意事项：磁珠吸附时间需足够（通常1-5分钟）；洗涤时避免磁珠丢失；洗脱液体积与温度需符合要求（通常50-100μL，60℃促进洗脱）；每次操作后清洁磁棒，避免交叉污染。4.实时荧光PCR检测中，内参基因未检出（Ct值>40）可能的原因及处理措施。答案：可能原因：①样本采集不规范（如口咽拭子未接触到有效部位）；②样本保存不当（如保存时间过长导致核酸降解）；③核酸提取失败（裂解不充分、磁珠损失等）；④内参引物探针失效；⑤加样错误（未加入内参体系或加样量不足）。处理措施：①重新核对样本采集记录，确认采集是否规范；②检查样本保存条件及时间；③重复提取并验证提取效率（如用阳性对照监控）；④更换内参试剂并做阳性对照测试；⑤检查加样过程，确认移液器准确性。5.简述实验室发生气溶胶污染后的排查与处理流程。答案：①立即停止实验，记录污染发生时间、区域及可能原因；②关闭污染区域门窗，避免气流扩散；③用10%次氯酸钠溶液对台面、仪器表面进行擦拭消毒（作用30分钟）；④开启生物安全柜紫外线消毒30分钟，实验室整体紫外线消毒1小时；⑤更换污染区域的所有消耗品（如移液器吸头、离心管等）；⑥使用阴性对照进行空白测试（连续3次检测均无扩增），确认污染清除；⑦分析污染来源（如操作不当、仪器泄漏等），制定改进措施并培训人员。6.核酸检测报告的审核要点有哪些？答案：①信息完整性：被检测者姓名、样本类型、采集时间、检测时间等是否齐全；②结果准确性：扩增曲线是否符合要求（S型、无杂峰），Ct值是否在有效范围内（通常15-38），阴阳性对照是否符合预期；③逻辑合理性：单靶标阳性需备注“需重复检测”，内参未检出需标注“样本无效”；④报告规范性：结论表述清晰（如“新冠病毒核酸阳性”“未检测到新冠病毒核酸”），无歧义；⑤签名有效性：检测人员与审核人员双签名，确保可追溯。五、案例分析题（每题10分，共2题）案例1：某实验室在进行新冠病毒核酸检测时，发现当天所有样本的N基因Ct值均比前一日高5-8个循环，内参基因Ct值正常，阴性对照无扩增，阳性对照Ct值符合预期。问题：分析可能的原因及处理措施。答案：可能原因：①核酸提取效率下降：可能因裂解液失效、磁珠活性降低或提取仪参数设置错误（如磁珠吸附时间缩短）；②扩增试剂问题：引物探针浓度降低（如试剂保存不当导致降解）、PCR酶活性下降（反复冻融次数过多）；③加样误差：移液器校准不准，导致实际加入的核酸量减少（如本应加10μL，实际加8μL）；④扩增仪温度偏差：退火/延伸温度偏高，导致扩增效率降低。处理措施：①核查提取环节：用已知浓度的阳性参考品测试提取效率（如提取后Ct值应与理论值一致），检查裂解液、磁珠的有效期及保存条件，校准提取仪加样针；②核查扩增试剂：更换新批次试剂进行平行测试，观察Ct值是否恢复；③校准移液器：用称量法或荧光法验证10μL、20μL等常用体积的准确性；④校准扩增仪：使用温度校准模块检测各孔温度，调整至标准值（如退火温度55℃±0.5℃）；⑤记录排查过程及改进措施，确保后续检测结果准确。案例2：某社区采样点在采集鼻拭子时，一名被采集者突然打喷嚏，导致采样人员防护面屏