临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证培训考试试题及答案

临床基因扩增检验技术人员PCR上岗证培训考试试题及答案一、单选题（每题1分，共30分。每题只有一个最佳答案，请将正确选项字母填入括号内）1.实时荧光定量PCR中，用于消除引物二聚体干扰的最常用荧光探针类型是（）A.SYBRGreenIB.TaqManC.FRETD.MolecularBeacon答案：B2.根据《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》，PCR实验室空气流向应遵循（）A.试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区，压力递减B.试剂准备区→标本制备区→扩增区→产物分析区，压力递增C.扩增区→标本制备区→试剂准备区→产物分析区，压力递减D.产物分析区→扩增区→标本制备区→试剂准备区，压力递增答案：A3.下列哪项不是UNG酶防污染体系必需组分（）A.dUTPB.UNG酶C.50℃预孵育步骤D.石蜡油答案：D4.在TaqMan探针5′端标记FAM、3′端标记BHQ1时，荧光信号产生的机制是（）A.FRET效率降低B.探针降解后FAM远离BHQ1C.探针退火导致荧光淬灭D.引物延伸导致FAM荧光增强答案：B5.关于内标（IC）叙述正确的是（）A.内标必须与被测靶基因使用相同引物B.内标可用于监控提取效率及扩增抑制C.内标Ct值越高说明抑制越轻D.内标只能采用人工合成RNA答案：B6.下列哪项操作可降低气溶胶污染风险（）A.扩增产物在产物分析区开盖稀释B.标本制备区使用正压通风C.试剂准备区与标本制备区共用移液器D.扩增结束后立即离心产物管答案：D7.实时荧光PCR标准曲线斜率为3.32，则扩增效率为（）A.90%B.95%C.100%D.105%答案：C8.关于质控品浓度设置，以下最合理的是（）A.高、中、低三个浓度，低值接近检测限2倍B.仅需设置一个阴性对照即可C.高值应高于线性范围上限10倍D.低值应低于检测限50%答案：A9.下列哪种标本类型需采用4℃以下冷链运输（）A.石蜡包埋组织B.EDTA抗凝全血C.干燥血斑D.唾液样本答案：B10.关于PCR试剂性能验证，错误的是（）A.精密度验证需连续检测20天B.检测限验证采用95%检出概率C.线性范围验证需覆盖宣称范围D.特异性验证需包含同源序列答案：A11.下列哪项不是临床PCR实验室生物安全二级要求（）A.生物安全柜B.高压灭菌器C.洗眼器D.正压防护服答案：D12.关于Taq酶热启动技术，正确的是（）A.采用抗体封闭酶活性B.需额外添加Mg2+C.延伸温度需提高至75℃D.引物二聚体必然消失答案：A13.下列哪项可导致假阴性结果（）A.引物与同源序列结合B.标本中血红蛋白浓度过高C.探针浓度过高D.阴性对照污染答案：B14.关于数字PCR描述正确的是（）A.依赖标准曲线定量B.可绝对定量靶分子拷贝数C.需使用TaqMan探针D.不能检测单拷贝差异答案：B15.下列哪项属于实验室内部质量控制的“实时质控”（）A.室间质评B.平行双样检测C.标准曲线斜率监控D.第三方能力验证答案：C16.关于PCR实验室分区标识，错误的是（）A.试剂准备区为蓝色标识B.标本制备区为黄色标识C.扩增区为红色标识D.产物分析区为绿色标识答案：D17.下列哪项可导致熔解曲线出现杂峰（）A.探针浓度过低B.引物二聚体形成C.模板浓度过高D.退火温度过高答案：B18.关于临床PCR报告，正确的是（）A.Ct值无需报告B.结果解释可引用文献C.检测限需在报告中注明D.内标Ct值无需审核答案：C19.下列哪项属于实验室“人、机、料、法、环”中的“机”（）A.生物安全柜B.标准操作程序C.质控品D.技术人员答案：A20.关于TaqMan探针设计，错误的是（）A.Tm值应比引物高510℃B.GC含量3080%C.避免连续GD.5′端C碱基数量无限制答案：D21.下列哪项属于实验室信息管理系统（LIS）功能（）A.自动判定结果B.生成标准曲线C.记录温湿度D.设计引物探针答案：C22.关于PCR实验室清洁消毒，正确的是（）A.75%乙醇可灭活DNAB.含氯消毒剂需现配现用C.紫外照射30分钟即可完全降解RNAD.扩增产物可用酒精擦拭清除答案：B23.下列哪项属于实验室“不符合项”处理流程（）A.立即销毁记录B.填写纠正措施表C.通知供应商D.重新校准设备答案：B24.关于PCR实验室人员培训，错误的是（）A.新员工需经能力确认B.每两年需重新考核C.考核通过后方可独立上岗D.培训记录保存至少3年答案：B25.下列哪项可导致标准曲线R²值降低（）A.模板稀释梯度不足B.探针浓度过高C.退火温度优化D.内标加入答案：A26.关于PCR实验室文件控制，正确的是（）A.文件可随意手写修改B.作废文件立即销毁C.文件需定期审核D.外来文件无需控制答案：C27.下列哪项属于实验室“风险管理”内容（）A.设备校准B.风险评估C.室内质控D.室间质评答案：B28.关于PCR实验室温湿度要求，正确的是（）A.温度1826℃，湿度3070%B.温度1530℃，湿度2080%C.温度2025℃，湿度4060%D.温度1628℃，湿度2575%答案：A29.下列哪项属于实验室“持续改进”工具（）A.鱼骨图B.标准曲线C.阴性对照D.阳性对照答案：A30.关于PCR实验室废弃物处理，错误的是（）A.锐器盒需防刺穿B.医疗废物专用袋为黄色C.扩增产物可随生活垃圾丢弃D.废弃物需登记交接答案：C二、多选题（每题2分，共20分。每题有两个或两个以上正确答案，多选、少选、错选均不得分）31.下列哪些属于PCR实验室“三区两通道”要求（）A.试剂准备区B.标本制备区C.扩增区D.产物分析区E.污物通道答案：ABCE32.关于TaqMan探针设计原则，正确的是（）A.长度1330bpB.Tm值6570℃C.避免5′端GD.GC含量2030%E.避免连续相同碱基＞4个答案：ABCE33.下列哪些属于实验室“室内质控”内容（）A.阴性对照B.阳性对照C.标准曲线D.室间质评E.内标监控答案：ABCE34.关于PCR实验室生物安全，正确的是（）A.标本制备区使用B2型生物安全柜B.离心机需配气密性吊篮C.实验人员需接种乙肝疫苗D.废弃物需高压灭菌E.实验结束后立即洗手答案：BCDE35.下列哪些可导致实时荧光PCR扩增效率降低（）A.引物二聚体B.模板降解C.抑制物存在D.探针浓度过高E.退火温度过低答案：ABC36.关于PCR实验室设备校准，正确的是（）A.移液器每年校准一次B.温度计需溯源C.离心机转速需校准D.生物安全柜气流需检测E.荧光定量PCR仪需校准荧光通道答案：ABCDE37.下列哪些属于实验室“记录”要求（）A.实时填写B.签名完整C.不得涂改D.保存期限≥3年E.可电子保存答案：ABDE38.关于PCR实验室人员管理，正确的是（）A.需建立技术档案B.需年度考核C.需授权上岗D.需健康监测E.可交叉进入各区域答案：ABCD39.下列哪些属于实验室“外部质控”内容（）A.室间质评B.能力验证C.第三方质控品D.标准曲线E.平行双样答案：ABC40.关于PCR实验室“风险评估”内容，正确的是（）A.标本溢洒B.设备故障C.人员短缺D.电力中断E.结果误判答案：ABCDE三、判断题（每题1分，共10分。正确打“√”，错误打“×”）41.SYBRGreenI可区分单碱基突变。（）答案：×42.临床PCR实验室可接受口头申请修改报告。（）答案：×43.扩增产物在产物分析区开盖后需立即进行紫外照射。（）答案：√44.数字PCR无需标准曲线即可绝对定量。（）答案：√45.实验室文件可手写修改，但需签名注明日期。（）答案：√46.实验室“质量控制”仅指室内质控。（）答案：×47.实验室“管理评审”每年至少一次。（）答案：√48.实验室“不符合项”必须通知客户。（）答案：×49.实验室“持续改进”可通过PDCA循环实现。（）答案：√50.实验室“风险管理”只需在建立时进行一次。（）答案：×四、填空题（每空1分，共20分）51.实时荧光PCR标准曲线横坐标为________，纵坐标为________。答案：log10（起始拷贝数），Ct值52.TaqMan探针5′端标记________，3′端标记________。答案：荧光报告基团，淬灭基团53.PCR实验室“三区”指________、________、________。答案：试剂准备区，标本制备区，扩增区54.实验室“人、机、料、法、环”中“料”指________。答案：试剂、耗材、标本55.实验室“文件控制”要求文件需定期________，作废文件需________。答案：审核，标识隔离56.实验室“记录”保存期限不得少于________年。答案：357.实验室“设备校准”需使用________标准。答案：可溯源58.实验室“室内质控”中，阴性对照Ct值应________。答案：Undet或≥4059.实验室“检测限”通常采用________概率确定。答案：95%60.实验室“风险评估”结果需形成________。答案：风险清单及控制措施五、简答题（每题10分，共30分）61.简述实时荧光定量PCR标准曲线制备步骤及合格标准。答案：（1）选择已知浓度质粒或体外转录RNA，用TE缓冲液10倍梯度稀释56个梯度，最低浓度应接近检测限；（2）每个梯度重复3孔，取均值；（3）以log10（拷贝数）为横坐标、Ct值为纵坐标绘制散点图，线性回归得标准曲线；（4）合格标准：R²≥0.99，斜率3.10~3.60（效率90110%），截距35±3；（5）每批实验同步运行标准曲线，若失控需查找原因并重做。62.简述PCR实验室“防止污染”的综合措施。答案：（1）严格分区：试剂准备区、标本制备区、扩增区、产物分析区单向流动，压力递减，独立人流物流通道；（2）物理隔离：各区独立通风、独立洁具、独立移液器、独立工作服；（3）试剂控制：使用dUTPUNG体系，50℃预孵育消化潜在产物；（4）操作规范：开盖动作轻柔，使用带滤芯吸头，离心后静置2分钟再开盖；（5）清洁消毒：每日工作前后用0.5%含氯消毒剂擦拭台面，紫外照射30分钟；（6）废弃物管理：扩增产物管高压灭菌后丢弃，锐器入专用盒；（7）人员管理：限制交叉进入，进入扩增区需更换手套、鞋套；（8）定期监测：每周用空白拭子擦拭台面、移液器手柄，提取后PCR检测，Ct＜35视为污染，立即启动追溯与纠正。63.简述临床PCR实验室“性能验证”方案及可接受标准。答案：（1）精密度：连续5天，每天3批，每批重复3孔，检测高、中、低三个浓度，计