电泳仪操作指南

电泳仪操作指南一、电泳仪基本组成与工作原理电泳仪是实验室常用的分离分析仪器，主要由电源、电泳槽、检测单元三部分组成。其核心原理是利用不同物质所带电荷和分子量的差异，在电场作用下实现分离。当样品处于直流电场中时，带正电荷的物质向阴极移动，带负电荷的物质向阳极移动，移动速度取决于电荷密度、分子量及缓冲液黏度等因素。电源提供稳定的电压、电流或功率输出，电泳槽为样品分离提供密闭环境，检测单元则用于观察或记录分离结果。不同类型的电泳仪（如琼脂糖凝胶电泳仪、聚丙烯酰胺凝胶电泳仪等）虽结构略有差异，但均遵循这一基本工作逻辑。二、操作前准备工作（一）仪器检查与环境要求电源检查确认电源开关处于关闭状态，电压旋钮调至最小位置，避免开机时瞬间电流过大。检查电源线是否破损，插头接地端是否完好，确保仪器接地正常。对于多槽联用的电泳仪，需核实各槽额定电流总和不超过仪器最大负载（通常标注于机身铭牌）。电泳槽检查清理电泳槽内残留缓冲液或杂质，检查电极是否氧化生锈，必要时用砂纸轻轻打磨。确认槽体密封良好，无漏液现象。对于垂直电泳槽，需检查玻璃板是否洁净、无裂痕，胶条是否老化，防止漏胶；水平电泳槽则需检查托盘平整度，避免凝胶放置时倾斜。环境条件仪器应放置在干燥通风的实验台上，远离水源、火源及腐蚀性气体。环境温度建议控制在15-30℃，相对湿度不超过70%，避免潮湿导致仪器短路或部件锈蚀。（二）试剂与样品准备缓冲液配制根据实验需求选择合适的缓冲液体系（如Tris-硼酸-EDTA（TBE）、Tris-乙酸-EDTA（TAE）等），使用分析纯试剂和去离子水配制，确保浓度准确。缓冲液需现配现用，长期存放需密封冷藏，并在使用前恢复至室温，避免温度变化影响离子强度。样品预处理样品需经适当稀释或浓缩，浓度过高可能导致条带拖尾，过低则难以检测。蛋白质样品通常需与上样缓冲液（含SDS、β-巯基乙醇等）混合，沸水浴加热5-10分钟使蛋白变性；核酸样品则需加入LoadingBuffer，其中的溴酚蓝可作为电泳前沿指示剂。凝胶制备以琼脂糖凝胶为例，按浓度要求称取琼脂糖粉末，加入缓冲液后加热至完全溶解，冷却至50-60℃时加入核酸染料（如EB或SYBRGreen），轻轻混匀后倒入制胶槽，插入梳子，避免产生气泡。凝胶凝固后（约30分钟），小心拔出梳子，将凝胶连同托盘放入电泳槽，倒入足量缓冲液，确保液面高出凝胶表面1-2mm。三、仪器操作流程（一）电极连接与参数设置电极连接用导线连接电泳仪输出端与电泳槽电极，红色导线接阳极（+），黑色导线接阴极（-），确保极性正确。若连接错误，样品将反向迁移，导致实验失败。连接时需注意插头与接口匹配，避免强行插拔损坏接口。开机与模式选择按下电源开关，仪器进行系统初始化，显示屏出现欢迎界面（如“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪”），初始化完成后进入参数设置状态。通过“模式”键选择工作模式，常见模式包括：标准模式（STD）：按设定参数持续输出，需手动终止；定时模式（TIME）：达到设定时间后自动关闭输出；伏时模式（VH）：电压与时间乘积达到设定值时关闭输出；分步模式（STEP）：可设置多段不同参数的连续运行程序。参数设定根据实验需求设置电压（U）、电流（I）、功率（P）及时间（T）参数，三者需满足“功率=电压×电流”的关系，通常优先固定电压或电流。例如：琼脂糖凝胶电泳常用稳压模式，电压设置为80-150V，时间30-60分钟；聚丙烯酰胺凝胶电泳常用稳流模式，电流设置为10-30mA，时间1-2小时。参数设置后需检查限制值是否合理，如设置电压1000V时，需将电流限制在仪器允许范围内（如200mA），防止过载。（二）样品上样与运行上样操作使用微量移液器吸取样品，垂直对准凝胶加样孔上方1-2mm处缓慢释放，避免针尖刺破凝胶或带入气泡。上样量需根据加样孔容量调整（通常10-20μL），相邻样品间需更换枪头，防止交叉污染。启动电泳参数确认无误后，按下“启动”键，仪器开始输出，显示屏实时显示当前电压、电流、功率及剩余时间。电泳过程中需观察样品迁移方向是否正确（如溴酚蓝指示剂向阳极移动），并检查电泳槽是否漏液、仪器是否有异常噪音或气味。运行中监控定时观察凝胶迁移情况，避免样品跑出凝胶。对于需要精确控制的实验（如DNA测序），可通过“暂停”键临时中断运行，检查后重新启动。若发现电流异常升高（可能因缓冲液离子强度过高）或电压骤降（可能因电极接触不良），需立即停机排查。（三）实验终止与仪器关闭终止电泳当指示剂迁移至凝胶合适位置（如距边缘1-2cm）或达到设定时间后，按下“停止”键，关闭电源开关。若为定时模式，仪器将自动终止输出并发出提示音。样品回收与清理小心取出凝胶，根据检测需求进行染色（如考马斯亮蓝染色蛋白质凝胶）或直接置于凝胶成像系统中观察。倒出电泳槽内缓冲液，用去离子水冲洗槽体及电极，垂直电泳槽需拆卸玻璃板，清理残留凝胶碎片，避免堵塞排水孔。四、不同类型电泳仪的特殊操作（一）DYY-12型电脑三恒多用电泳仪程序调用与保存该型号支持10组程序存储（M0-M9），按“读取”键可调用上次程序，按“读取+数字键+确认”可调用指定组程序（如读取M5程序需按“读取→5→确认”）。新程序设置完成后，按“保存+数字键+确认”可将参数存入对应组，方便后续重复实验。分步模式操作在分步模式下，可设置多段运行参数。例如：第一步稳压80V运行30分钟（浓缩胶阶段），第二步稳压120V运行90分钟（分离胶阶段）。设置时需按“分步”键进入分段界面，依次输入各段电压、时间，按“确认”保存每段参数，全部设置完成后启动运行。（二）自动化电泳仪（连床式）样品盘装载将预处理后的样品管按顺序放入自动进样盘，确保管底无气泡，条形码朝向识别区。仪器通过光学传感器读取样品信息，若出现“样品识别错误”，需检查样品管是否洁净、条形码是否破损，或用酒精棉擦拭传感器镜头。程序化管理通过触摸屏选择预设实验方案（如“蛋白质SDS分离”“DNA片段分析”），系统自动完成缓冲液添加、凝胶制备、上样及电泳全过程。运行中可通过“暂停”键干预，如需紧急终止，长按“急停”按钮3秒。五、维护与保养（一）日常清洁与部件维护电源维护定期用干布擦拭电源机身，去除灰尘和污渍，避免使用酒精等腐蚀性溶剂。接口处若有氧化，可用棉签蘸少量无水乙醇清洁。长时间不用时，需每月开机通电30分钟，防止电容老化。电泳槽维护每次使用后用去离子水冲洗槽体，顽固污渍可用软毛刷轻刷，禁止使用硬物刮擦。电极片需定期检查，若表面出现黑色氧化物，可用细砂纸打磨至光亮。胶条、密封圈等易损件需定期更换，避免老化导致漏液。检测单元维护凝胶成像系统的紫外灯需避免频繁开关，延长使用寿命；镜头需保持洁净，使用专用镜头纸擦拭，防止指纹或污渍影响成像质量。（二）常见故障处理故障现象可能原因处理方法开机无反应电源线未接好、保险丝熔断检查电源连接，更换同规格保险丝（通常5A）电压无法调节旋钮卡住、内部接触不良关闭电源后反复旋转旋钮，若无效需拆机检修电泳槽漏液胶条老化、玻璃板密封不严更换胶条，重新安装玻璃板并均匀用力夹紧电流异常升高缓冲液浓度过高、电极短路更换低浓度缓冲液，检查电极是否接触槽壁样品不迁移电极接反、缓冲液失效交换电极导线，更换新鲜缓冲液显示屏闪烁电压不稳、内部线路松动使用稳压器，检查仪器内部连接线是否脱落六、安全注意事项防触电保护电泳仪通电后，电极及电泳槽内缓冲液均带电，严禁用手接触或在槽内取放物品。如需调整样品或凝胶，必须先关闭电源。仪器必须连接有效接地，接地电阻不大于4Ω，雷雨天气应停止使用并拔下插头。防止短路与超载禁止在未连接电泳槽时启动稳流模式，以免空载电压过高损坏电源。多槽联用时，需确保各槽电流总和不超过仪器额定值（如单槽50mA，4槽联用总电流不超过200mA）。更换电泳槽或调整导线时必须断电，避免插头接触产生火花。试剂安全缓冲液配制需佩戴手套、护目镜，避免接触皮肤或溅入眼中。EB（溴化乙锭）等染色剂具有毒性和致癌性，需在通风橱内操作，沾染试剂的废液需分类收集处理，不可随意倾倒。七、实验优化与常见问题解决（一）分离效果不佳的原因与对策条带模糊或拖尾样品浓度过高：适当稀释样品，减少上样量；缓冲液离子强度不当：重新配制缓冲液，确保pH值准确（如Tris缓冲液需用HCl调节pH）；电压过高：降低电压或延长电泳时间，减少产热导致的对流现象。条带弯曲（微笑或皱眉现象）凝胶浓度不均：加热琼脂糖时充分搅拌，避免局部浓度过高；电泳槽温度梯度：使用循环冷却系统（尤其高电压电泳时），或降低电流减少产热。无条带检出染色失败：检查染色剂浓度及染色时间，蛋白质凝胶需彻底脱色背景；上样错误：确认加样孔位置，避免样品溢出或未加入凝胶；电源故障：用万用表检测输出电压，确认仪器正常工作。（二）实验重复性保证措施标准化操作固定缓冲液批次、凝胶浓度及电泳参数，使用同一品牌移液器及吸头，减少人为误差。样品分装保存，避免反复冻融导致降解。仪器校准定期用标准电阻箱校准电源输出，确保电压、电流显示值与实际值误差在±5%以内。电泳槽需标记方向，避免多次使用后电极极性混淆。对照实验设置每次实验加入标准品（如DNAMarker、已知分子量的蛋白质Marker），用于分子量估算及分离效果验证。同时设置空白对照（仅加缓冲液）和阴性对照，排除非特异性条带干扰。八、长期存放与报废处理（一）长期存放仪器停用超过1个月时，需彻底清洁各部件，电源、电泳槽分开存放，电泳槽内放置干燥剂防止生锈。电源线缠绕整齐，避免折叠过度导致内部断线。说明书、保修卡等资料需统一归档，便于后续查阅。（二）报废处理当仪器核心部件（如电源模块