2025年核酸理论考试题及答案

2025年核酸理论考试题及答案一、单项选择题（每题2分，共40分）1.以下关于核酸检测中逆转录酶的描述，正确的是：A.仅能以RNA为模板合成DNAB.具有3'→5'外切酶活性C.常用的M-MLV逆转录酶热稳定性高于AMVD.逆转录反应中不需要引物参与答案：A解析：逆转录酶以RNA为模板合成cDNA（A正确）；多数逆转录酶无3'→5'外切酶活性（B错误）；AMV逆转录酶热稳定性高于M-MLV（C错误）；逆转录需要特异性引物或随机引物（D错误）。2.实时荧光定量PCR（qPCR）中，SYBRGreenI染料的作用机制是：A.与双链DNA小沟结合发出荧光B.与单链DNA特异性杂交后发光C.通过水解探针释放荧光基团D.仅在PCR延伸阶段与DNA结合答案：A解析：SYBRGreenI通过嵌入双链DNA小沟发出荧光（A正确）；单链DNA无此特性（B错误）；水解探针属于TaqMan技术（C错误）；染料在退火和延伸阶段均与双链DNA结合（D错误）。3.核酸提取过程中，异硫氰酸胍的主要作用是：A.裂解细胞膜并抑制核酸酶B.沉淀蛋白质C.中和核酸负电荷D.结合磁珠表面答案：A解析：异硫氰酸胍是强变性剂，可裂解细胞并抑制RNase/DNase活性（A正确）；沉淀蛋白质多通过高盐或离心（B错误）；中和电荷常用盐离子（C错误）；磁珠结合依赖硅羟基（D错误）。4.核酸检测实验室分区中，以下操作应在扩增区进行的是：A.样本接收与登记B.提取核酸的加样C.PCR反应体系配制D.扩增产物的检测答案：D解析：样本接收在样本处理区（A错误）；核酸加样在提取区（B错误）；体系配制在试剂准备区（C错误）；扩增及检测在扩增区（D正确）。5.关于核酸检测质量控制，以下说法错误的是：A.阴性对照应无扩增曲线B.阳性对照Ct值应在实验室设定的有效范围内C.内参基因Ct值异常提示样本抑制物存在D.弱阳性样本可直接报告“阳性”答案：D解析：弱阳性样本需重复检测确认（D错误）；其余选项均符合质量控制要求（A、B、C正确）。6.新型冠状病毒（SARS-CoV-2）核酸检测中，常用的靶标基因不包括：A.ORF1abB.N基因C.E基因D.gag基因答案：D解析：gag基因是HIV的靶标（D错误）；ORF1ab、N、E为SARS-CoV-2常用靶标（A、B、C正确）。7.核酸检测样本保存条件错误的是：A.血清样本4℃保存不超过72小时B.咽拭子样本-20℃可保存1个月C.全血样本室温放置不超过4小时D.提取后的核酸-80℃可保存6个月答案：C解析：全血样本需4℃保存，室温放置易导致细胞裂解释放核酸酶（C错误）；其余保存条件符合规范（A、B、D正确）。8.以下哪种情况会导致qPCR出现“假阴性”结果？A.样本中存在PCR抑制物B.引物浓度过高C.扩增循环数设置过多D.荧光采集通道错误答案：A解析：抑制物（如血红蛋白、肝素）会抑制酶活性，导致扩增失败（A正确）；引物浓度过高可能非特异性扩增（B错误）；循环数过多可能出现拖尾（C错误）；通道错误影响结果判读但非假阴性（D错误）。9.核酸提取仪的磁珠法与柱提法相比，优势在于：A.提取核酸纯度更高B.操作自动化程度更高C.适用于微量样本D.无需离心步骤答案：B解析：磁珠法更易实现自动化（B正确）；柱提法纯度更高（A错误）；两者均适用于微量样本（C错误）；磁珠法需磁力分离，仍需离心替代步骤（D错误）。10.关于核酸检测结果判读，正确的是：A.Ct值≥40可直接报告“阴性”B.单靶标阳性需结合临床综合判断C.内参基因无扩增提示仪器故障D.弱阳性样本Ct值应＞35答案：B解析：单靶标阳性可能为污染或交叉反应，需复核（B正确）；Ct≥40需结合阴性对照判断（A错误）；内参无扩增提示样本质量问题（C错误）；弱阳性Ct值通常在30-37之间（D错误）。11.以下不属于核酸扩增技术的是：A.LAMP（环介导等温扩增）B.NASBA（核酸序列依赖性扩增）C.SouthernBlot（Southern杂交）D.RPA（重组酶聚合酶扩增）答案：C解析：SouthernBlot是杂交技术，非扩增（C错误）；其余均为扩增技术（A、B、D正确）。12.核酸检测实验室生物安全柜的使用规范中，错误的是：A.操作前需紫外线消毒30分钟B.柜内物品应尽量靠后放置C.操作时手臂应缓慢移动D.结束后需用75%乙醇擦拭表面答案：B解析：生物安全柜内物品应尽量靠前，避免遮挡气流（B错误）；其余操作符合规范（A、C、D正确）。13.关于核酸检测试剂的性能验证，关键指标不包括：A.分析灵敏度（LOD）B.交叉反应（特异性）C.批间差异（重复性）D.样本外观（颜色、澄清度）答案：D解析：试剂性能验证关注灵敏度、特异性、重复性等（A、B、C正确）；样本外观非试剂性能指标（D错误）。14.新型冠状病毒核酸检测中，“混采检测”的最大混样数是：A.5混1B.10混1C.20混1D.30混1答案：C解析：根据《新型冠状病毒肺炎防控方案（第十版）》，混采最大为20混1（C正确）。15.核酸提取过程中，75%乙醇的作用是：A.裂解细胞B.洗脱核酸C.洗涤去除盐离子D.灭活病毒答案：C解析：75%乙醇用于洗涤磁珠/柱上的盐离子和杂质（C正确）；裂解用裂解液（A错误）；洗脱用无核酸酶水（B错误）；灭活病毒在样本处理阶段（D错误）。16.qPCR扩增曲线的“平台期”形成的主要原因是：A.引物耗尽B.dNTP耗尽C.酶活性下降D.以上均是答案：D解析：平台期由引物、dNTP消耗及酶活性下降共同导致（D正确）。17.以下哪种样本类型不适合用于SARS-CoV-2核酸检测？A.鼻咽拭子B.痰液C.粪便D.血清答案：D解析：血清主要用于抗体检测，病毒核酸含量极低（D错误）；其余样本均含病毒核酸（A、B、C正确）。18.核酸检测实验室的空气流向应遵循：A.试剂准备区→样本处理区→扩增区B.样本处理区→试剂准备区→扩增区C.扩增区→样本处理区→试剂准备区D.无严格要求答案：A解析：为避免污染，空气应从清洁区（试剂准备区）流向半污染区（样本处理区）再流向污染区（扩增区）（A正确）。19.关于核酸检测的“灰区”样本，正确的处理方式是：A.直接报告“阴性”B.重复检测并增加样本量C.更换检测平台后报告D.无需处理答案：B解析：灰区样本需重复检测，必要时增加样本量或更换方法（B正确）。20.以下关于数字PCR（dPCR）的描述，错误的是：A.无需标准曲线即可绝对定量B.灵敏度高于qPCRC.适用于低丰度核酸检测D.扩增效率影响定量结果答案：D解析：dPCR通过终点法计数，扩增效率不影响结果（D错误）；其余为dPCR特点（A、B、C正确）。二、多项选择题（每题3分，共30分，多选、少选、错选均不得分）1.核酸检测中常用的内参基因包括：A.β-actinB.GAPDHC.ORF1abD.18SrRNA答案：ABD解析：内参基因需为样本固有基因（β-actin、GAPDH、18SrRNA），ORF1ab为病毒靶标（C错误）。2.核酸提取过程中可能导致产量降低的原因有：A.裂解时间不足B.洗涤次数过多C.洗脱体积过大D.磁珠吸附时间过短答案：ABD解析：裂解不充分（A）、洗涤过度（B）、磁珠结合不充分（D）均导致产量降低；洗脱体积过大稀释核酸但不降低总量（C错误）。3.实时荧光定量PCR的质量控制应包括：A.阴性对照B.阳性对照C.内参对照D.空白对照（无模板）答案：ABCD解析：四类对照分别用于验证无污染、扩增有效性、样本质量和试剂空白（均正确）。4.核酸检测实验室的生物安全措施包括：A.操作人员穿戴N95口罩、防护服B.样本处理在生物安全柜中进行C.医疗废物高压蒸汽灭菌后处理D.实验室每日紫外线消毒答案：ABCD解析：均符合生物安全规范（均正确）。5.以下可能导致qPCR出现“假阳性”结果的因素有：A.扩增产物污染B.引物二聚体C.样本交叉污染D.荧光阈值设置过低答案：ABCD解析：污染（A、C）、非特异性扩增（B）、阈值设置不当（D）均可导致假阳性（均正确）。6.新型冠状病毒核酸检测的采样要求包括：A.鼻咽拭子需深入鼻腔至咽后壁B.口咽拭子应擦拭双侧扁桃体及咽后壁C.采样后立即将拭子浸入病毒保存液D.样本运输需保持2-8℃答案：ABCD解析：均符合《新型冠状病毒核酸检测技术指南》（均正确）。7.核酸扩增仪（PCR仪）的校准项目包括：A.温度均匀性B.升降温速率C.荧光通道灵敏度D.孔间温度差异答案：ABD解析：荧光通道校准属于qPCR仪专项（C错误）；温度相关参数为通用校准项目（A、B、D正确）。8.核酸检测结果报告应包含的信息有：A.检测方法（如qPCR）B.样本类型（如鼻咽拭子）C.检测靶标（如N基因）D.检测时间答案：ABCD解析：需包含方法、样本、靶标、时间等信息（均正确）。9.关于核酸提取试剂的选择，需考虑的因素有：A.样本类型（血液、组织等）B.目标核酸（DNA/RNA）C.后续实验需求（测序/扩增）D.成本与操作时间答案：ABCD解析：样本类型、核酸类型、下游应用、成本均为选择依据（均正确）。10.核酸检测中“Ct值”的影响因素包括：A.初始模板量B.扩增效率C.荧光阈值设置D.反应体系体积答案：ABC解析：Ct值与初始模板量负相关（A），受扩增效率（B）和阈值（C）影响；体系体积不直接影响Ct（D错误）。三、判断题（每题1分，共10分）1.核酸检测实验室各区可共用一套移液器。（×）解析：需分区专用，避免交叉污染。2.RNA提取时需使用无RNase的耗材，DNA提取则无需。（×）解析：DNA提取也需避免核酸酶污染，只是RNase更稳定，需特别处理。3.qPCR中，Ct值越小表示初始模板量越多。（√）解析：Ct值与初始模板量呈负相关。4.样本采集后可在室温下放置超过24小时再检测。（×）解析：多数样本需4℃保存，室温放置易降解。5.核酸检测结果为“阴性”可完全排除感染可能。（×）解析：可能因采样时机、病毒载量低等导致假阴性。6.磁珠法提取核酸时，磁珠浓度越高提取效率越好。（×）解析：磁珠过量可能吸附杂质，影响纯度。7.扩增区的空气无需过滤，只需保持正压。（×）解析：需通过高效过滤器（HEPA）过滤，且保持负压防止污染扩散。8.同一批检测中，阳性对照Ct值明显高于预期，提示试剂失效。（√）解析：阳性对照Ct值异常升高可能因试剂活性下降。9.核酸检测报告需由授权人员审核签发。（√）解析：符合实验室质量管理要求。10.新型冠状病毒变异株可能导致现有检测试剂漏检。（√）解析：变异可能影响引物/探针与靶标结合，需定期验证试剂适用性。四、简答题（每题6分，共30分）1.简述核酸提取的主要步骤及各步骤的目的。答案：核酸提取主要包括：（1）裂解：使用裂解液（如含蛋白酶K、表面活性剂）破坏细胞膜/核膜，释放核酸并灭活核酸酶；（2）结合：通过磁珠/硅胶柱等介质特异性吸附核酸，去除蛋白质、多糖等杂质；（3）洗涤：用75%乙醇等去除残留盐离子和杂质；（4）洗脱：用无核酸酶水或TE缓冲液将核酸从介质上洗脱，获得纯化的核酸溶液。2.实时荧光定量PCR中，如何通过扩增曲线判断实验有效性？答案：有效扩增曲线应呈现典型的“S”型，包括基线期（前15-20个循环，荧光无明显变化）、指数增长期（荧光随循环数呈指数上升）、平台期（试剂消耗，荧光增长停滞）。阴性对照应无扩增曲线（或Ct＞设定阈值）；阳性对照Ct值应在实验室验证的有效范围内（如18-30）；内参基因应出现稳定扩增（Ct值在正常范围）。若出现非典型曲线（如直线、跳跃式增长），提示可能存在污染或反应体系异常。3.核酸检测实验室如何预防扩增产物污染？答案：预防措施包括：（1）严格分区：试剂准备区、样本处理区、扩增区物理隔离，单向流动；（2）专用耗材：各区使用独立移液器、吸头（带滤芯）、离心管；（3）环境消毒：扩增区每日紫外线照射（30分钟以上），使用DNA/RNA酶清除剂擦拭台面；（4）阴性对照：每批检测设置无模板对照，监测污染；（5）操作规范：避免剧烈震荡反应管，扩增后不打开反应管；（6）空气压力控制：扩增区保持负压，防止气溶胶扩散。4.简述新型冠状病毒核酸检测中“混采检测”的操作流程及注意事项。答案：流程：（1）采样：将20份（或10份）样本分别采集后，放入同一管病毒保存液中；（2）编号：标记混采管为“混采-1”“混采-2”等，记录对应样本信息；（3）检测：对混采管进行核酸提取和扩增；（4）结果判读：若混采管阴性，报告所有对应样本阴性；若阳性，需对该混采管内的单份样本重新检测，确定阳性个体。注意事项：（1）混采比例不超过20:1（根据规范）；（2）严格记录混采样本对应关系，避免漏检；（3）阳性混采管需使用原样本重新检测，不可直接拆分保存液；（4）混采检测需验证试剂在高稀释度下的灵敏度，确保不遗漏低载量样本。5.核酸检测质量控制中，“室内质控”与“室间质评”的区别与联系。答案：区别：（1）室内质控（IQC）是实验室日常开展的质量监控，使用已知浓度的质控品（如弱阳性、阴性），每日/每批检测时加入，监测检测过程的稳定性；（2）室间质评（EQA）是外部机构（如疾控中心）发放盲样，实验室检测后回报结果，评估实验室间的一致性和准确性。联系：两者共同保障检测质量。室内质控是日常监控手段，及时发现问题；室间质评是外部验证，确认实验室能力。室内质控数据需用于改进流程，以通过室间质评；室间质评结果可反映室内质控的有效性。五、案例分析题（每题15分，共30分）案例1：某实验室在进行新型冠状病毒核酸检测时，发现多份样本的内参基因Ct值均＞35（正常范围为25-30），而病毒靶标均为阴性。分析可能原因及处理措施。答案：可能原因：（1）样本质量差：采样不规范（如拭子未接触到感染部位）、保存不当（如保存液不足、运输温度过高）导致细胞数量少，内参基因（人源基因）含量低；（2）核酸提取效率低：裂解时间不足、磁珠结合不充分或洗涤过度，导致内参基因丢失；（3）扩增体系问题：引物/探针失效、酶活性下降，影响内参基因扩增；（4）仪器故