实验动物血清采集规范指南

实验动物血清采集规范指南血清作为实验研究中关键的生物样本，其采集过程的规范性直接影响实验数据的准确性、重复性，同时关系到实验动物的福利与伦理合规。本指南结合实验动物学理论与实践经验，从前期准备、操作流程、质量控制到伦理遵循，系统梳理血清采集的核心要点，为科研工作者提供可落地的实操参考。一、采集前准备（一）动物选择与预处理实验动物的品种、健康状态及生理周期需与实验目的匹配。采集前禁食4-8小时（避免脂血干扰检测，具体时长依动物种属调整，如小鼠禁食4小时、家兔禁食6小时），禁水不超过2小时（防止脱水）。需确认动物无感染、外伤，体重符合实验设计（如SPF级大鼠体重____g为宜）。（二）器材准备1.采血器具：根据动物体型选择注射器（小鼠用1ml、大鼠用2-5ml、家兔用5-10ml），或微量采血管（适用于眼眶、尾尖采血）；需提前检查注射器气密性与针头锋利度（避免反复穿刺致组织损伤）。2.抗凝/促凝工具：若需抗凝血清，选择对应抗凝剂（肝素钠、EDTA-K₂等），按“每毫升血加10-20IU肝素”或“EDTA终浓度0.1-0.2%”配制抗凝管；促凝管需提前激活（37℃预温30分钟）。3.辅助用品：75%医用酒精、碘伏、无菌棉球/纱布、止血钳、体温计（监测动物应激后体温变化）、动物保定装置（如小鼠固定筒、家兔保定箱）。（三）环境与人员准备操作环境需安静、避光，温度控制在22-25℃（哺乳类动物）、湿度50-60%。操作人员需穿戴实验服、手套，提前熟悉动物习性（如大鼠易受惊，操作需轻柔），多人协作时明确分工（保定、采血、记录）。二、常见实验动物血清采集方法（一）啮齿类动物（小鼠、大鼠）1.眼眶后静脉丛采血（少量多次，≤0.5ml/次）操作：动物轻握于掌心，拇指、食指固定头部（使眼球外突）；取肝素化毛细管（或微量采血管）从内眦沿眶壁向眼球后方向旋转刺入（深度：小鼠2-3mm、大鼠3-5mm），待血液自然流入管内后缓慢退出，棉球压迫止血。注意：避免刺入过深损伤眼球或颅内血管，同一动物间隔≥7天，总采血量不超过体重的10%（如20g小鼠单次≤0.2ml）。2.心脏采血（大量采血，需麻醉）定位：大鼠左侧第3-4肋间、胸骨左缘1-2mm处；小鼠第2-3肋间。操作：戊巴比妥钠腹腔麻醉（剂量：大鼠40mg/kg、小鼠50mg/kg），仰卧固定；75%酒精消毒胸壁，注射器垂直或稍向左倾斜刺入（深度：大鼠2-3cm、小鼠1-2cm），回抽见血后缓慢抽取（大鼠单次≤5ml、小鼠≤1ml），拔针后棉球压迫3-5分钟。3.腹主动脉采血（终末采血，解剖后）操作：麻醉后仰卧，剪开腹部皮肤、肌肉，暴露腹主动脉（腰椎前方、肠系膜上动脉分支处）；用注射器沿血管走向向心端刺入，快速采血（大鼠≤10ml、小鼠≤2ml），适用于病理剖检时同步采集。（二）家兔1.耳缘静脉采血（少量，≤5ml/次）操作：耳缘静脉剪毛（或涂二甲苯扩张血管），75%酒精消毒；注射器沿静脉走向平行刺入（角度15-30°），缓慢抽血，拔针后棉球压迫止血。注意：避免同一部位反复穿刺，可交替使用双耳，间隔≥3天。2.心脏采血（大量，需麻醉）定位：胸骨左缘第3-4肋间、距胸骨约1cm处。操作：戊巴比妥钠静脉麻醉（剂量30mg/kg），仰卧保定；注射器垂直刺入（深度2-3cm），回抽见血后采集（单次≤10ml），拔针后压迫止血5分钟以上。（三）豚鼠1.心脏采血（常用，需麻醉）定位：胸骨左缘第3肋间、剑突上方2cm处。操作：水合氯醛腹腔麻醉（剂量10%溶液0.5ml/100g），仰卧固定；消毒后注射器垂直刺入（深度1-2cm），回抽见血后采集（单次≤5ml），拔针后压迫止血。2.腹主动脉采血（终末，解剖后）同大鼠操作，麻醉后解剖暴露腹主动脉，向心端采血（单次≤8ml）。（四）犬、非人灵长类（猴）1.前肢/后肢静脉采血（少量多次）犬：前肢头静脉（腕关节上方），剪毛消毒后，注射器沿静脉走向刺入（角度20-30°），采集（单次≤20ml，总血量≤体重10%）。猴：后肢股静脉（腹股沟处），助手固定后，消毒皮肤，注射器垂直刺入（深度1-2cm），回抽见血后采集（单次≤15ml）。2.颈静脉采血（大量，需麻醉）犬：戊巴比妥钠静脉麻醉（剂量25mg/kg），侧卧保定，剪毛消毒颈部；注射器沿胸锁乳突肌内侧向心刺入（深度2-3cm），采集（单次≤30ml）。猴：同犬操作，注意避免损伤颈动脉。三、操作规范与质量控制（一）保定与消毒保定需稳定且避免过度压迫（如小鼠固定时勿捏紧胸廓，防止窒息）；消毒范围直径≥5cm，酒精待干后采血（避免酒精入血致溶血）。（二）采血技巧进针角度：静脉采血15-30°，心脏采血垂直或稍倾斜；深度以“回抽见血”为度，避免反复穿刺。血量控制：严格遵循“单次≤体重10%，总采血量≤体重20%”（如200g大鼠单次≤2ml、总≤4ml），防止动物休克。（三）样本处理抗凝血清：采血后立即颠倒抗凝管5-8次（避免局部凝血），室温静置30分钟后4℃离心（3000rpm，10分钟）分离血清。促凝血清：采血后室温静置1-2小时（或37℃加速凝固），待血块收缩后离心分离。防溶血：避免注射器内气泡、剧烈振荡样本，离心前检查是否有溶血（血清呈红色提示溶血，需重新采集）。（四）样本标识与保存标签需标注动物编号、种属、采集时间、抗凝剂类型、实验分组；血清分离后-20℃短期保存（≤1周）、-80℃长期保存，避免反复冻融。四、注意事项与应急处理（一）动物福利操作前15分钟可给予镇静剂（如氯丙嗪，大鼠5mg/kg腹腔注射）减少应激；采血时间≤3分钟，避免动物长时间挣扎。（二）应急处理出血不止：棉球压迫无效时，用止血钳夹闭血管（限手术采血），或局部涂止血粉（如云南白药）；严重出血需补液（如生理盐水腹腔注射，大鼠5ml/次）。动物休克：采血后出现呼吸急促、黏膜苍白，立即停止操作，保暖（红外灯照射）、腹腔注射生理盐水（大鼠10ml/次），必要时注射肾上腺素（0.1ml/100g）。（三）重复采血间隔啮齿类动物间隔≥7天，家兔、犬间隔≥14天，猴间隔≥21天，确保动物恢复（可通过体重监测：体重回升至采血前水平方可再次采集）。（四）废弃物处理针头放入利器盒，血液污染物用含氯消毒剂（1:1000）浸泡30分钟，动物尸体按生物安全要求冷冻后焚烧或深埋。五、伦理与法规遵循实验前需通过机构动物伦理委员会审查（提交方案含采血方法、血量、福利措施），遵循《实验动物管理条例》《GB/T____实验动物福利伦理审查指南》。践行3R原则：替代（如细胞模型替代