CN110563558B 一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚cbd单体的方法 （云南辰锦威生物科技有限公司）

(19)国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号CN110563558B(65)同一申请的已公布的文献号(73)专利权人云南辰锦威生物科技有限公司地址650000云南省昆明市高新区海源中路1088号和成国际七楼尤民生.提高农业综合生产能力的理论与实践.海风出版社，2005,143.审查员蒋鹏程(72)发明人李映波罗凡雅冯红钟化梅孙笠雯(74)专利代理机构昆明正原专利商标代理有限公司53100专利代理师徐玲菊蒋文睿一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚CBD单体的方法本发明提供一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚CBD单体的方法，属于分离提纯技术领域，具体包括：将工业大麻花叶原料经干燥、粉196℃下冻1-3h,解冻至20-30℃,送硅胶层析柱体。本发明从工业大麻中分离出的大麻二酚CBD率高，溶剂消耗低。可重复利用，实现了清洁环21.一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚CBD单体的方法，包括以下步骤：A、将干燥并粉碎后的工业大麻花和/或叶送入浸出器中，经溶剂进行喷淋、浸泡后，过滤分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:10-20、溶剂采用质量浓度为60-80%的乙醇，浸提温度为30-50℃,浸提时间为1-4h;所述干燥并粉碎后的工业大麻花和/或叶为：采用盛花期的花和/或叶，此时的大麻二酚CBD含量较高，花和/或叶预先晒干或烤干，直至水份含量为10-15wt%,灰土含量在35wt%,之后将烘干的花和/或叶磨碎至5-10目；B、将步骤A的浸提液加热至90-120℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即为富含大麻二酚CBD的浸膏；C、将步骤B的浸膏于-100--196℃下冻1-3h,之后解冻至20-30℃,得一次冻液；所述-100--196℃下冻1-3h所用的冷源是低温液氮；D、按硅胶：一次冻液=1:1-10的质量比，将一次冻液以0.1～2ml/min的流速，送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:1-3的质量比，以0.1～10mL/min所述层析温度为19～45℃;E、将步骤D的第一次洗脱液于-100--196℃下冻1-3h,之后解冻至20-30℃,得二次冻所述-100--196℃下冻1-3h所用的冷源是低温液氮；F、按硅胶：二次冻液=1:1-5的质量比，将二次冻液以0.5～1.5ml/min的流速送入装有硅胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:1-3的质量比，以0.5～5mL/所述层析温度为19～45℃;3技术领域[0001]本发明涉及分离提纯技术领域，特别涉及一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚背景技术[0002]大麻二酚CBD(cannabidiol,CBD)可用于治疗多种病症、缓解疼痛及修复受损神经。从工业大麻的花和叶中提取的大麻二酚CBD因含有其它物质，包括精神活性物质四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol,THC),因其毒性成分可使人致幻成瘾，故在大多数国家是受因此浪费了大量目标产物。[0003]目前，从工业大麻提取物中纯化大麻二酚CBD,需要在纯度和收率之间做出权衡，两者此消彼长，若要获得高纯度的大麻二酚CBD,通常收率都很低。如何在获得高纯度的产发明内容[0004]本发明目的在于提供一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚CBD单体的方法，利用超低温二次冻融、连续进样、梯次纯化分离，从工业大麻花和叶中分离出的大麻二酚CBD[0005]本发明通过下列技术方案实现；一种超低温二次冻融分离纯化大麻二酚CBD单体[0006]A、将干燥并粉碎后的工业大麻花和/或叶送入浸出器中，经溶剂进行喷淋、浸泡后，过滤分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:10-20、溶剂采用质量浓度为60-80%的乙醇，浸提温度为30-50℃,浸提时间为1-4h;[0007]B、将步骤A的浸提液加热至90-120℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即为富含大麻二酚CBD的浸膏；[0008]C、将步骤B的浸膏于-100--196℃下冻1-3h,之后解冻至20-30℃,得一次冻液；[0009]D、按硅胶：一次冻液=1:1-10的质量比，将一次冻液以0.1～2ml/min的流速，送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:1-3的质量比，以0.1～10mL/[0010]E、将步骤D的第一次洗脱液于-100--196℃下冻1-3h,之后解冻至20-30℃,得二次冻液；[0011]F、按硅胶：二次冻液=1:1-5的质量比，将二次冻液以0.5～1.5ml/min的流速送入装有硅胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:1-3的质量比，以0.5~4[0013]所述步骤A中的干燥并粉碎后的工业大麻花和/或叶为：采用盛花期的花和/或叶，此时的大麻二酚CBD含量较高，花和/或叶预先晒干或烤干，直至水份含量为10-15wt%,灰分含量为3-5wt%,促进大麻二酚CBD的后熟，之后将烘干的花和/或叶磨碎至5-10目，以扩大溶剂与原料的接触表面积，缩短浸泡时间，提高大麻二酚CBD的提取率，然后存储到存料箱中，增加设备装料量，使原料能够均匀地连续不断地向下道工序供料，保证整条生产线的连续正常生产。[0014]所述步骤C的-100--196℃下冻1-3h所用的冷源是低温液氮，通过超低温快速冷冻和解冻来改变浸膏中各组分间相互作用的关系，经这一处理后的浸膏更容易将浸膏中的杂质除去。[0015]所述步骤D的一级硅胶层析柱中的硅胶装填的疏松度为偏松，以尽可能减少大麻[0016]所述步骤E的-100--196℃下冻1-3h所用的冷源是低温液氮，通过二次超低温快速冷冻和解冻来进一步改变浸膏中各组分间相互作用的关系，更容易将与浸膏中和大麻二[0017]所述步骤F的二级硅胶层析柱中的硅胶装填疏松度为偏紧，以尽可能的把与大麻二酚CBD产品出峰有重叠的部分分离出来。[0019]所述步骤D、F的层析温度为19～45℃,以便分离纯化。[0020]本发明产生的技术效果：[0021]本发明采用超低温二次冻融连续进样梯次纯化分离系统对工业大麻提取物进行分离，从工业大麻提取物中分离出的大麻二酚CBD纯度高且分离工艺便捷，流程连续且自动的大麻二酚CBD的纯度为98.5%,回收率为85.5%。具体实施方式[0022]下面结合实施例对本发明做进一步说明。滤分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:10、溶剂采用质量浓度为60%的乙醇，浸提温度为30℃,浸提时间为1h;[0025]B、将步骤A的浸提液加热至90℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即为富含大麻二酚CBD的浸膏；[0026]C、将步骤B的浸膏于-100℃下冻1h,之后解冻至20℃,得一次冻液；[0027]D、按硅胶：一次冻液=1:1的质量比，将一次冻液以0.1ml/min的流速送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:1的质量比，以0.1mL/min的流速送[0028]E、将步骤D的洗脱液于-100℃下冻1h,之后解冻至20℃,得二次冻液；[0029]F、按硅胶:二次冻液=1:1的质量比，将二次冻液以0.5ml/min的流速送入装有硅5胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:1的质量比，以0.5mL/min的流速滤分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:10、溶剂采用质量浓度为80%的乙醇，浸提温度为50℃,浸提时间为4h;[0033]B、将步骤A的浸提液加热至120℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即为富含大麻二酚CBD的浸膏；[0034]C、将步骤B的浸膏于-196℃下冻3h,之后解冻至30℃,得一次冻液；[0035]D、按硅胶：一次冻液=1:10的质量比，将一次冻液以2ml/min的流速送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:3的质量比，以10mL/min的流速送入该[0036]E、将步骤D的洗脱液于-196℃下冻3h,之后解冻至30℃,得二次冻液；[0037]F、按硅胶：二次冻液=1:1-5的质量比，将二次冻液以1.5ml/min的流速送入装有硅胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:3的质量比，以5mL/min的流速分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:20、溶剂采用质量浓度为60%的乙醇，浸提温度为30℃,浸提时间为1h;[0041]B、将步骤A的浸提液加热至90℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即[0042]C、将步骤B的浸膏于-100℃下冻1h,之后解冻至20℃,得一次冻液；[0043]D、按硅胶：一次冻液=1:1的质量比，将一次冻液以0.1ml/min的流速送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:1的质量比，以0.1mL/min的流速送[0044]E、将步骤D的洗脱液于-100℃下冻1h,之后解冻至20℃,得二次冻液；[0045]F、按硅胶：二次冻液=1:1的质量比，将二次冻液以0.5ml/min的流速送入装有硅胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:1的质量比，以0.5mL/min的流速分离出浸提液和料渣，浸提的料液质量比为1:20、溶剂采用质量浓度为80%的乙醇，浸提温度为50℃,浸提时间为4h;[0049]B、将步骤A的浸提液加热至120℃,使浸提液中的溶剂蒸发回收循环使用，余下的即为富含大麻二酚CBD的浸膏；6[0050]C、将步骤B的浸膏于-196℃下冻3h,之后解冻至30℃,得一次冻液；[0051]D、按硅胶：一次冻液=1:10的质量比，将一次冻液以2ml/min的流速送入装有硅胶的一级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=4:3的质量比，以10mL/min的流速送入该[0052]E、将步骤D的洗脱液于-196℃下冻3h,之后解冻至30℃,得二次冻液；[0053]F、按硅胶：二次冻液=1:1-5的质量比，将二次冻液以1.5ml/min的流速送入装有硅胶的二级层析柱中，同时流动相按石油醚：二氯甲烷=0.5:3的质量比，以5mL/min的流速[0057]筛选盛花期的工业大麻花叶，此时CBD的含量较高，花叶预先晒干或烤干，水份含量在10-15%之间，灰土含量在3%以下；把原料投入到烘烤设备内，温度控制在160℃,时间控制在35分钟；烘干的目的是把花叶里的水份烘烤至3%-5%之间；[0058]第二步：[0059]将干燥的物料进行粉碎至5-10目，并储存于储料箱内以保证源源不断的供料；[0061]将碎料放到连续式浸出器内经乙醇不断地喷淋、浸泡、滴干、混合循环萃取加工，浸泡温度为50摄氏度，每批花叶的浸泡时间4小时；[0062]第四步：[0063]将浸出器内经反复循环浸泡后浓度较高的混合溶液连续不断地抽到蒸发器内进行加温，温度控制在120℃;经过加热后的溶液中的溶剂即变为气体蒸发，再经过冷凝器冷却为液体后回收再循环使用；溶剂蒸发浓缩后剩余得到的固体、半固体膏状物即为富含大麻二酚CBD的浸膏；[0065](1)把色谱层析硅胶称量后装入色谱层析分离器内，可分为干法装柱或湿法装柱；装填时要整体装填均匀，紧实度要偏紧；[0066](2)把准备好的浸膏均匀地放在色谱层析硅胶表面，色谱层析硅胶与浸膏比为1:[0067](3)把按4:3调配好的石油醚、二氯甲烷混合洗脱液，添加到浸膏上面，流动相的流速为10mL/min,所述浸膏的流速为2ml/min,萃取液流速为2ml/min、萃余液流速为10mL/min、切换时间为100min,整个分提过程中不充许干柱现象发生；收集从层析分离器上流出[0068]对照例2:[0070]筛选盛花期的工业大麻花叶，此时CBD的含量较高，花叶预先晒干或烤干，水份含量在10、15%之间，灰土含量在3%以下。把原料投入到烘烤设备内，温度控制在130℃,时间控制在15分钟。烘干的目的是把花叶里的水份烘烤至3%-5%之间；说明书7[0072]