CN110898235B 雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物及其合成方法、套组、成像方法及应用 （聚天生医股份有限公司）

(12)发明专利(22)申请日2019.02.27(43)申请公布日2020.03.24有限公司11205专利代理师罗英臧建明A61PA61P(56)对比文件切.《肿瘤防治研究》.2012,(第09期),审查员李东果雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物及其合成方法、套组、成像方法及应用本发明提供一种包含螯合剂及受体配体的雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物。本发明还提供一种合成所述组合物的方法，21.一种雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物，包含螯合剂与受体配体的共所述螯合剂是含氮四氮杂环，其中所述含氮四氮杂环是环拉胺或大环多胺；共轭至所述螯合剂的所述受体配体是包含具有-CH₂-CH₂-CH₂-0-CH₂-CHOH-CH₂-的基团的非甾体他莫昔芬，其中于所述-CH₂-CH₂-CH₂-0-CH₂-CHOH-CH₂-的基团中，左侧末段的-CH₂是与所述非甾体他莫昔芬中的三苯乙烯上的乙烯基直接连接，且右侧末段的CH₂-是与所述含氮四氮杂环的氮基直接连接；以及2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是99mTc-环拉胺-他莫昔芬类似物或99Tc-大环多胺-他莫昔芬类似物。3.一种套组，包括如权利要求1或2所述的组合物。4.一种合成如权利要求1或2所述的组合物的方法，其中所述受体配体利用环氧化物共轭到所述含氮四氮杂环，且所述环氧化物附连到所述受体配体的脂肪族链。5.根据权利要求1或2所述的组合物在制备治疗癌症、类风湿性关节炎、骨质疏松症、动脉粥样硬化或子宫内膜组织药物的应用。3法、套组、成像方法及应用[0001]本发明涉及一种组合物，尤其涉及一种雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈法对活组织检查(biopsy)的分析，所述分子及组织病理学方法提供一般异质过程[0003]开发放射性标记的生化化合物来理解分子通路已扩展了核分子成像(nuclearmolecularimaging)研究在药品tomography,PET)及单光子放射电脑断层扫描(singlephotonemissioncomputedFDG)是PET的黄金标准，其与CT及MRI互补且允许检测未预料到的远处转移(distantreceptor,CBR)之间的相互交谈(crosstalk)用组合物以及一[0005]本发明提供一种包含螯合剂(chelator)及受体配体(receptorligand)的雌激素4雌三醇(estiol)及克罗米芬(clomiphene)。[0010]在本发明的实施例中，所述抗雌激素配体包括非甾体他莫昔芬(non-steroidaltamoxifen)、托丽米芬(torimiphene)、雷洛昔芬(raloxifen)及氨鲁米特[0011]在本发明的实施例中，所述受体配体具有间隔羟基(spacerhydroxygroup)。[0012]在本发明的实施例中，所述组合物还包含金属离子。[0013]在本发明的实施例中，所述金属离子是放射性核素、非放射性金属或其组合。[0015]在本发明的实施例中，所述非放射性金属是锝离子(Tc)、锡离子(Sn)、铜离子(Cu)、铟离子(In)、铊离子(T1)、镓离子(Ga)、砷离子(As)、铼离子(Re)、钬离子(Ho)、钇离子(Mn)、镥离子(Lu)、钴离子(Co)、铂离子(Pt)、钙离子(Ca)、铑离子(Rh)、铕离子(Eu)及铽离子(Tb)或其组合。[0016]在本发明的实施例中，所述组合物是99mTc-环拉胺-他莫昔芬类似物或99mTc-大环多胺-他莫昔芬类似物。[0017]本发明还提供一种包含上述组合物的套组(kit)。[0018]本发明还提供一种合成上述组合物的方法。[0019]在本发明的实施例中，所述受体配体利用环氧化物(epox[0020]在本发明的实施例中，环氧化物附连到受体配体的脂肪族链(aliphaticchain)。[0021]本发明还提供一种用于癌症、类风湿性关节炎、骨质疏松症、动脉粥样硬化或子宫内膜组织的成像方法，所述方法包括施用上述组合物。[0023]在本发明的实施例中，成像剂量被定义为套组。[0024]本发明还提供一种用于癌症、类风湿性关节炎、骨质疏松症、动脉粥样硬化或子宫内膜组织的治疗方法，所述方法包括施用上述组合物。[0025]基于上述，本发明提供雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物。羟基包含在制成品中。在本发明的组合物中，使用受保护的螯合剂来使环氧基化受体配体反应以形成螯合剂-受体配体共轭体。技术平台可利用共轭拮抗剂(antagonist)及激动剂(agonist),并观察其在各种形式的疾病中的效果。此外，所述组合物还可使用技术人员所已知的化学程式而被制备成药物配方及套组。另外，还提供合成所述组合物的方法，且所述合成方法可不再需要向受体配体中添加保护基，且会提高制程效率并纯化最终产品。除此之外，可使用本发明的组合物对雌激素受体及大麻受体相关联的疾病进行成像或治疗。[0026]为让本发明的上述特征和优点能更明显易懂，下文特举实施例，并配合附图作详细说明如下。5附图说明[0027]图1A示出在本发明的实例1中合成的化合物1的氢谱核磁共振(H-Nuclear[0028]图1B示出在本发明的实例1中合成的化合物2的H-NMR光谱；[0029]图1C示出在本发明的实例1中合成的化合物3的H-NMR光谱；[0031]图1E示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1[0032]图1F示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的¹H-,H相关光谱学[0033]图1G示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的H-,1³C异核单量子相关(heteronuclearsingular[0034]图1H示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的¹H-,1³C异核多键相关[0035]图1I示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的液相色谱-质谱(liquid[0036]图1J示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的高效液相色谱(high[0037]图1K及图1L示出在本发明的实例2中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1在两个不同的系统中的放射化学纯度(radiochemicalpurity);[0038]图1M示出在本发明的实例2中合成的组合物9mTc-SC-05-K-1的标记效率；[0039]图2A示出在本发明的实例3中合成的化合物5的H-NMR光谱；[0040]图2B示出在本发明的实例3中合成的化合物6的H-NMR光谱；[0041]图2C示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-NMR光谱；[0043]图2E示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-,HCOSYNMR光谱；[0044]图2F示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-,³CHSQCNMR光谱；[0045]图2G示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的H-,³CHMBCNMR光谱；[0046]图2H示出在本发明的实例3中合成[0047]图2I示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的HPLC光谱；[0048]图2J及图2K示出在本发明的实例4中合成的组合物⁹9Tc-SC-05-L-1在两个不同的系统中的放射化学纯度；[0049]图2L及图2M示出在本发明的实例4中合成的组合物9"Tc-SC-05-L-1在两个不同的系统中的标记效率；[0050]图2N及图20示出在本发明的实例2中合成的组合物99四Tc-SC-05-L-1在两个不同的系统中的体外(invitro)稳定性；[0051]图3A及图3B示出在本发明的实例2及实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1及组合物99mTc-SC-05-L-1的MCF-7细胞摄取(uptake)及阻断(bl[0052]图4A及图4B示出在本发明的实例2及实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1及组合物99Tc-SC-05-L-1的OVCAR3细胞及TOV-112D细胞摄取研究；6[0053]图5示出在本发明的实例2中合成的组合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3细胞及TOV-112D细胞摄取及阻断研究；[0054]图6示出本发明的化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1抵抗淋巴瘤细胞(lymphomacell)的效果；[0055]图7A及图7B示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的体外抗癌研究；[0056]图8A及图8B示出在本发明的实例1及实例3中合成的化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1的体外抗癌研究。具体实施方式[0057]现在将详细参照本发明的当前优选实施例，在附图中示出所述优选实施例的实例。尽可能地，在附图及说明中使用相同的参考编号指代相同或相似的部件。[0058]评估雌激素受体-阳性(ER+)通路启动系统是激素依赖性疾病管理(hormone-dependentdiseasemanagement)的基础。ER+患者对内分泌疗法的反应更好，且其存活时间是阴性ER患者的存活时间的两倍长。然而，肿瘤对抗雌激素的抗性是无法预测的。抗药性可能是由于肿瘤对其的摄取不良或缓慢。选择性雌激素受体调节剂(selectiveestrogenreceptormodulator,SERM)可能会在雌激素受体(ER)与大麻受体(CBR)通路系统之间产生相互交谈。识别SERM系药品是否使用CBR作为主动输送策略可增强药品到雌激素受体结合口袋(drugtoERbindingpocket),且可克服抗药性。因此，本发明提供一种包含螯合剂及受体配体的雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物。[0059]在一些实施例中，螯合剂可例如为含氮四氮杂环。具体来说，含氮四氮杂环可例如[0060]在一些实施例中，配体受体可例如为雌激素配体或抗雌激素配体。在一些实施例素配体可包括例如非甾体他莫昔芬、托丽米芬、雷洛昔芬及氨鲁米特。然而，本发明并非仅限于此。在一些实施例中，受体配体具有间隔羟基，所述间隔羟基将在以下进行详细阐述。[0061]在一些实施例中，所述组合物还包含金属离子。具体来说，金锡离子(Sn)、铜离子(Cu)、铟离子(In)、铊离子(T1)、镓离子(Ga)、砷离子(As)、铼离子(Re)、钬离子(Ho)、钇离子(Y)、钐离子(Sm)、硒离子(Se)、锶离子(Sr)、钆离子(Gd)、铋离子(Bi)、铁离子(Fe)、锰离子(Mn)、镥离子(Lu)、钴离子(Co)、铂离子(Pt)、钙离子(Ca)、铑离子(Rh)、铕离子(Eu)及铽离子(Tb)或其组合。然而，本发明并非仅限于此。在本发明的一个具体实施例中，所述组合物可为9Tc-环拉胺-他莫昔芬类似物。在本发明的另一具体实施例中，所述组合物可为99mTc-大环多胺-他莫昔芬类似物。[0062]应提到，可使用本发明的组合物来通过细胞表面CBR识别ER+通路。放射性标记的ER+配体不仅能够针对癌症阶段及再现阶段(stageandre-stage)对ER+组织摄取进行量化，且还能够针对最优疗法反应选择患者并且当出现抗性时中断治疗。换句话说，由于组合物的结构，组合物可通过主动输送策略来增强药品到雌激素受体结合口袋，从而克服抗药7[0063]本发明还提供一种合成所述组合物的方法。合成方法的步骤在以下详细阐述，但本发明并非仅限于此。[0064]在一些实施例中，受体配体例如首先利用环氧化物共轭到四环。换句话说，环氧化物附连到受体配体的脂肪族链。在一些实施例中，受体配体可例如为雌激素激动剂、雌激素拮抗剂或芳香酶抑制剂，包括克罗米芬、他莫昔芬、雷洛昔芬、托丽米芬及氨鲁米特的非甾体衍生物。在本发明的一个具体实施例中，抗雌激素是他莫昔芬，但本发明并非仅限于此。具体来说，氯化环氧化物(间隔物)在有机溶剂中与脂族羟基化他莫昔芬反应，从而生成环氧化物-他莫昔芬。在这种情况下，受体配体是他莫昔芬，即选择性雌激素受体调节剂(SERM),其可能会在雌激素受体与大麻受体通路系统之间产生相互交谈，但本发明并非仅限于此。然后，环氧化物-他莫昔芬与包括偶合剂的受保护的四氮杂环状螯合剂反应。因此，羟基位于制成品中的螯合剂-他莫昔芬共轭体处。在一些实施例中，四氮杂环状螯合剂可例如为环拉胺或大环多胺。然而，本发明并非仅限于此。应注意，羟基位于受体配体的脂肪族链处。为了清晰地理解，反应流程图1示出如下所示共轭到环拉胺或大环多胺的受体配体(R)的示意图：R:受体配体[0066]反应流程图1:受体配体(R)共轭到环拉胺或大环多胺[0067]在一些实施例中，可在例如二甲基甲酰胺(dimethylformamide)、二甲亚砜(dimethylsulfoxide)、二恶烷(dioxane)、甲醇、乙醇、己烷、二氯甲烷、乙腈(acetonitrile)、四氢呋喃(tetrahydrofuran)或其混合物等有机溶剂中施行掺和方法。在其他实施例中，可在水性溶剂中施行掺和方法。在一些实施例中，螯合剂的氮基中的一者、两者或三者可例如由叔丁基(tert-butylgroup)或苯甲基(benzylgroup)保护或者不受[0068]在一些实施例中，本发明的方法还可包括至少一个纯化步骤。可经由所属领域中的技术人员所已知的任何方法对本发明的任何化合物进行纯化。所属领域中的技术人员熟习这些方法，且当时可采用这些方法。举例来说，在旨在得到特定化合物的多步骤合成中，8在某些实施例中，纯化方法具体来说不包括尺寸筛除色谱法(sizeexclusion利于这些中间物的纯化。使用有机溶剂的各种纯化方式允许分离及隔离期望的化合物(例制成品中。使用受保护的螯合剂来使环氧基化他莫昔芬反应以形成螯合剂-他莫昔芬共轭个性化的技术平台可基于与每一患者的疾病相关联的大麻受体及雌激素受体的个体基因克罗米芬柠檬酸盐克罗米芬(1)[0071]反应流程图2:合成化合物SC96[0073]反应流程图3:合成化合物SC-05-L-1的方法[0074]另外，在一些实施例中，提供包含上述组合物的药物配方或套组。在其他方面，所述组合物还可使用技术人员所已知的化学程式而被制备成药物配方或套组。在一些实施例中，药物配方或套组还可包含例如抗氧化剂(antioxidant)、稳定剂(stabilizingagent)、防腐剂(preservative)或盐。在一些实施例中，药物配方或套组可包含例如抗坏血酸(ascorbicacid)、甘露醇(mannitol)、氯化锡(II)及螯合剂-他莫昔芬共轭体。在一些方面，药物配方或套组可例如为水溶液或已被冷冻和/或冻干的溶液。[0075]此外，本发明准确地提供在给定受试者中的疾病位点处成像的方法，以执行每次治疗/治疗后评价，且只要所述受试者正在以抗雌激素进行治疗或在治疗中便能够监测所述受试者。在某些方面，所述方法包括：检测由各别受试者的疾病位点处的放射性核素标记的螯合剂-共轭体产生的信号，其中疾病位元点如果存在，则会产生比组织周围更强烈的信号。在一些方面，金属离子可为放射性核素及所属领域中的技术人员所已知的任何放射性限于此。在其他方面，金属离子可为非放射性金属。在一些实施例中，将成像的位点可为肿瘤或ER富集的组织，例如卵巢及子宫组织。在一些实施例中，所述方法可被定义为用于癌症、类风湿性关节炎、骨质疏松症、动脉粥样硬化或子宫内膜组织的成像方法，其包括施用上述组合物。在一个具体实施例中，所述方法可被定义为对受试者内的位点进行成像的方法，其包括检测来自定位在所述位元点处的金属离子标记的螯合剂-受体配体共轭体的信号，但本发明并非仅限于此。在一些实施例中，可使用例如选自由PET、PET/CT、SPECT、SPECT/CT、PET/MRI、SPECT/MRI及具有核成像装置的光学成像混合型组成的群组的技术来套组，且成像剂量被定义为套组。除此之外，所述方法还可被定义为治疗患有癌症或子宫内膜异位(endometriosis)的受试者的方法。在特定方面，癌症例如是乳癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌或子宫内膜癌(endometrialcancer),但本发明并非仅限于此。在一些实施例中，所述方法可例如被定义为用于癌症、类风湿性关节炎、骨质疏松症、动脉粥样硬化或子宫内膜组织的治疗方法，其包括施用上述组合物。换句话说，提供一种在受试者体内对位点进行成像、诊断疾病或治疗疾病的方法，其包括对受试者施用金属离子标记的螯合剂-受体配体共轭体，其中对位点进行成像，对疾病进行诊断或对疾病进行治疗。[0076]另一方面，应注意本发明的组合物可应用于分子成像及疗法。举例来说，可使用本发明的组合物作为分子核成像剂。具体来说，分子核成像剂能够全面表征治疗性干预(therapeuticintervention),且可用于患者选择、药代动力学(pharmacokinetic)、剂量发现(dosage-finding)及概念验证(proof-of-concept)研究。在患者治疗反应的成果评估中，与仪器开发并行的受体图像指导的细胞治疗方法方面的努力将会更全面。更具体来说，使用螯合作用的分子成像剂在放射化学产率、纯度、生产成本及在常规临床实践中药剂的可用性的批次间重现性(batch-to-batchreproducibility)方面提供了优点。[0077]另外，本发明技术平台将金属离子、螯合剂及受体配体集成在一起。可使用受体配其通过细胞表面受体与细胞内细胞溶质受体(intracellularcytosolicreceptor)之间的相互交谈而发挥双重作用，因而会增强复位剂的细胞摄取。举例来说，CB1/CB2受体及ER通路在各种癌症中是重迭的。已知他莫昔芬提供ER与CBR之间的相互交谈。因此，理想的是，开发他莫昔芬系成像剂以经由CB1/CB2受体测量ER系统活性。这种他莫昔芬系成像将有助于监测CB1/CB2受体及ER通路引导的治疗反应并针对最优治疗反应预测患者的选择。在这种情况下，羟基包括在螯合剂-他莫昔芬共轭体中的脂族间隔物处以在利用创新工具进行诊断成像期间实现磷酸化，从而理解导致组织退化、炎症及增生性异常的通路启动的细胞受体的动态变化并改善患者诊断、治疗及预后[0078]为了证明本发明的组合物适用于成像且用于癌症疗法，本发明的组合物是使用在以下实例中所述的方法来合成及测试。[0081]在此实例中，合成了4种具体化合物(化合物1到化合物4)以及本发明的化合物SC-[0082]A.合成化合物1[0083]在室温下将2NNaOH溶液(10mL)添加到克罗米芬柠檬酸盐(1g,1.69mmol)与乙酸乙酯(ethylacetate,EA,10mL)的溶液中。将混合物剧烈搅拌了30分钟并以EA萃取了三次(10mL,8mL,6mL)。在减压下对有机层进行了浓缩以得到无色油(colorlessoil)形式的游离碱式克罗米芬(化合物1,685.7mg,1.68mmol,99%)。[0084]B.合成化合物2[0085]在-40℃下将叔丁基锂(50mL,96mmol,在戊烷中为1.9M)逐滴添加到化合物1(1.95g,4.8mmol)在四氢呋喃(tetrahydrofuran,THF,50mL)中的溶液中。逐滴添加了1,3-环氧丙烷(trimethyleneoxide)(6.26mL,96mmol)且将混合物在-40℃下搅拌了30分钟。使反应升温到室温并在室温下连续搅拌了18小时。向反应中小心地添加了水，且以EA将反应萃取了三次(50mL,30mL,20mL)。通过无水硫酸镁(anhydrousmagnesiumsulfate)对EA层110.1)对粗制产物进行了纯化以得到白色固体形式的(Z)-5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-醇((Z)-5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-ol)丁基溴化铵(TBABr,113.3mg,0.35mmol)。氯醇(epichlorohydrin)(758.7mg,8.2mmol)及几滴甲苯0.1)对粗制产物进行了纯化，以得到黄色油形式的(Z)-N,N-二乙基-2-(4-(5-(环氧乙烷-2-基甲氧基)-1,2-二苯基戊-1-烯-1-基)苯氧基)乙-1-胺((Z)-N,N-diethy1-2-(4-(5-(oxiran-2-ylmethoxy)-1,2-diphenylpent-1-en-1-yl)phenoxy)ethan-1-amine)(化合物[0089]将1,4,7,10-四氮杂环十二烷(1,4,7,10-tetraazacyclododecane)(大环多胺，642.9mg,3.73mmol)及化合物3在甲苯(4mL)中的混合物加热到的(Z)-1-(1,4,7,10-四氮杂环十二-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇((Z)-1-(1,4,7,10-tetraazacyclododecan-1-yl)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1[0091]将1NHCl溶液添加到化合物4(330mg,0.50mmol)的混合物中，且逐滴添加了水4mm¹H-¹³C纳米探针的500MHz瓦里安伊诺瓦NMR光谱仪(500MHzVarianInovaNMR里克斯(BrukerSolarix)(德国)获得了质谱仪。从配备有磷酸胆碱(phosphPC)亲水相互作用液相色谱(hydrophilicinteractionliquidchromatography,HILIC)柱(5μm,2.0mmI.D.×150mm)的沃特世(Waters)2695分离模块(麻塞诸塞州的米尔福德本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的1³C-NMR光谱。图1F示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的H-,HCOSYNMR光谱。图1G示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的H-,1³CHSQCNMR光谱。图1H示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1谱。图1J示出在本发明的实例1中合成的化合物SC-05-K-1的HPLC光谱。通过H-NMR、1³c-NMR、H-,HCOSYNMR、H-,1³cHSQCNMR及H-,13CHMBCNMR确认了化合物SC-05-K-1的结且结果呈现在图1I及图1J中。如图1J所示，使用HILIC柱对化合物SC-05-K-1(pH5到pH7)的HPLC分析显示出大约6.5分钟的延迟时间(retentiontime)。[0098]从柯惠公司(Covidien)(德克萨斯州的休斯顿(Houston,TX))的9Mo/99mTc产生器冻干残余物中添加⁹9mTc-高锝酸盐(40mCi到50mCi),实现了组合物99mTc-SC-05-K-1的放射[0100]通过以丙酮及盐水洗脱的薄层色谱法(thin-layerchromatography,TLC,沃特曼(Waterman)No.1,奥德里奇-西格玛公司(Aldrich-Sigma),密苏里州的圣路易斯(St.Louis,MO))确定了放射化学纯度。在0.5mL/min的流速下以乙腈(acetonitrile)/水(1:1V/V)洗脱的PCHILIC柱(2.0mmI.D.×150mm,安捷伦公司(Agilent),(加利福尼亚州的圣克拉拉(SantaClara,CA))上执行了配备有NaI检测器及紫外线(ultraviolet,UV)检测器(235nm)的高效液相色谱法(HPLC)。[0101]图1K及图1L示出在本发明的实例2中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1在两个不同的系统中的放射化学纯度。具体来说，图1K示出组合物99mTc-SC-05-K-1在丙酮系统中的放射化学纯度，且图1L示出组合物⁹9mTc-SC-05-K-1在盐水系统中的放射化学纯度。如图1K及图1L所示，组合物99mTc-SC-05-K-1(停留在原点处)的放射化学纯度大于95%且至6小时的比移值(Rfvalue)为0.1,其中游离Na⁹9Tc0₄迁移到溶剂前沿。[0102]图1M示出在本发明的实例2中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1的标记效率。具体来大约6.5分钟的延迟时间。[0104]合成化合物SC-05-L-1[0105]在此实例中，合成了5种具体化合物(化合物1到化合物3、化合物5及化合物6)以及本发明的化合物SC-05-L-1。合成化合物1到化合物3相似于以上所述的合成化合物1到化合物3,且此处不再重复。[0106]F.合成化合物5[0107]在圆底烧瓶中，将化合物3(500mg,1.0295mmol)、1,4,8,11-四氮杂环十四烷(1,4,产物(Z)-1-(1,4,8,11-四氮杂环十四-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇((Z)-1-(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan-1-yl)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-二碳酸二叔丁酯(di-tert-butyl己烷/乙酸乙酯/三乙胺=4/1/0.1的柱色谱法进行了纯化，以得到黄色粘稠油形式的三-叔丁基(Z)-11-(3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)-2-羟丙基)-1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1,4,8-三羧酸酯(化合物6)(tri-tert-butyl(Z)-11-(3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphe2-hydroxypropyl)-1,4,8,11-tetraazacyclotetradecane-1,4,8-tricarbo步骤产率为70%)。[0111]向化合物5(800mg,0.8111mmol)的圆底烧瓶中，添加了三乙基硅烷过使用从水到甲醇的洗脱液的反相柱色谱法进行了纯化，以得到浅黄色固体产物(Z)-1-(1,4,8,11-四氮杂环十四烷-1-基)-3-((5-(4-(2-(二乙氨基)乙氧基)苯基)-4,5-二苯基戊-4-烯-1-基)氧基)丙-2-醇盐酸盐((Z)-1-(1,4,8,11-tetraazacyclotetradecan-1-yl)-3-((5-(4-(2-(diethylamino)ethoxy)phenyl)-4,5-diphenylpent-4-en-1-propan-2-olhydrochloridesalt)(化合物SC-05-L-1,6谱。图2I示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的HPLC光谱。通过H-NMR、³c-NMR、H-,HCOSYNMR、H-,1³cHSQCNMR及H-,13CHMBCNMR确认了化合物SC-05-L-1的结果呈现在图2H及图2I中。如图2I所示，化合物SC-05-L-1的HPLC分析显示出大约6.3分钟的延迟时间。[0118]从柯惠公司(德克萨斯州的休斯顿)的⁹⁹Mo/⁹9mTc产生器获得了高锝酸钠[0119]表征组合物99Tc-SC-05-L-1[0120]通过以丙酮及盐水洗脱的TLC(沃特曼No.1,奥德里奇-西格玛公司，密苏里州的圣路易斯)确定了放射化学纯度。在0.5mL/min的流速下以乙腈/水(1:1V/V)洗脱的PCHILIC柱(2.0mmI.D.×150mm,安捷伦公司，加利福尼亚州的圣克拉拉)上执行了配备有NaI检测器及紫外线检测器(280nm)的高效液相色谱法(HPLC)。组合物9mTc-SC-05-L-1在24小时处静置以进行延长的储存期稳定性(shelf-lifestability)测定。[0121]图2J及图2K示出在本发明的实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-L-1在两个不同的系统中的放射化学纯度。具体来说，图2J示出组合物99mTc-SC-05-L-1在丙酮系统中的放射化学纯度，且图2K示出组合物99mTc-SC-05-L-1在盐水系统中的放射化学纯度。如图2J及图2K所示，组合物99mTc-SC-05-L-1的放射化学纯度大于95%且Rf值为0.1。[0122]图2L及图2M示出在本发明的实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-L-1在两个不同的系统中的标记效率。具体来说，向100μg氯化锡(II)(在100μLH₂0中)然后是200μL(channel))及图2M(射电星通道(radiostarchannel))所示，组合物99mTc-SC-05-L-1的HPLC分析显示出大约7分钟的延迟时间。[0123]图2N及图20示出在本发明的实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-L-1在两个不同的体外稳定性。如图2N(280nm通道)及图20(射电星通道)所示，组合物99Tc-SC-05-L-1在24小时后在pH6.5中是稳定的。[0125]体外细胞摄取研究[0127]将化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1(分别为5mg)溶解在pH5到pH6的0.3mL水中。添加了SnCL₂(在0.1mL中为0.1mg)(从10mL水中的10mg锡(II)制备),接着添加了Na⁹9"Tc0₄(在0.1mL中为5mCi)。以水将总体积稀释到1mL。每一孔(well)的细胞摄取为5mg/5mCi/1mL(0.1mg/0.1mCi/20μL/孔)。每一孔含有10μg分子。使用多细胞株(multi-cellline)来进行细胞摄取测定。使用96孔板进行MCF-7ER(+)细胞摄取研究。在150μL无血清罗斯威尔派克纪念研究所(RoswellParkMemorialInstitute,RPMI)培养基中，每一孔含有200,000个MCF-7细胞。将组合物99mTc-SC-05-K-1及组合物9mTc-SC-05-L-1以不同的间隔(1小时到4小时)添加到在培养基中含有细胞的每一孔中。为了查明细胞摄取是否经由ER介导的过程，向MCF-7细胞中添加了雌二醇(10次到100次)。细胞摄取是以总剂量的百分比来表[0128]图3A及图3B示出在本发明的实例2及实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1及组05-K-1及组合物99mTc-SC-05-L-1二者均显示出良好的细胞摄取。特别是，在组合物99mTSC-05-L-1中添加雌二醇之后，细胞摄取降低(30%到40%),如图3A所示。[0130]使用6孔板进行0VCAR3ER(+)及TOV-112DER(-)细胞摄取研究。每一孔在150μL无血清RPMI中含有100,000个细胞。将组合物9mTc-SC-05-K-1及组合物99mTc-SC-05-L-1以不同的间隔(0小时到2小时)添加到在培养基中含有细胞的每一孔中。为了查明组合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3细胞摄取是否经由ER介导的过程，进行了阻断研究。为了进行阻断研孔)的1%。将在培养基中含有细胞的孔温育不同的间隔(0小时到2小时)。随后，以冰冷的磷酸盐缓冲盐水(phosphate-bufferedsaline,PBS)将细胞洗涤了两次并以0.5mL胰蛋白酶(trypsin)溶液进行了胰蛋白酶化以分离肿瘤细胞。使用蛋白质浓度测定确定出每一孔中的蛋白质。在含有蛋白酶抑制剂(罗氏诊断公司(RocheDiagnostic),德国的曼海姆(Mannheim,Germany))的裂解(lysis)缓冲液中对细胞进行了裂解。使用由制造商(伯乐公司(Bio-RAD),美国加利福尼亚州的赫拉克勒斯(Hercules,CA,USA))阐述的布拉德福德方法(BradfordMethod)对细胞裂解物中的蛋白质浓度进行了量化。以蒸馏水对布拉德福德染料进行了稀释(1:4)并通过滤纸(数目1,沃特曼no.1,东京的爱多帮得科有限公司以1:9在裂解缓冲液中对蛋白质样本进行了稀释。将稀释的蛋白质样本或标准与96孔中的布拉德福德染料进行了混合，接着记录了在595nm下的吸光度。以γ计数器(康涅狄格州的帕卡德(Packard,CT))测量了细胞及培养基中的放射性浓度，且以细胞的cpm/g及培养基的cpm/g来表达放射性浓度。计算出蛋白质品质对培养基放射性浓度比率并绘制了随时间变化的图。[0131]图4A及图4B示出在本发明的实例2及实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-K-1及组合物99mTc-SC-05-L-1及组合物99mTc-SC-05-K-1进行的细胞摄取研究表明组合物99mTc-SC-05-L-1在ER(+)OVCAR3细胞中比在ER(-)TOV-112D细胞中具有更高的摄取。此外，组合物99mTc-SC-05-L-1具有比组合物990Trc-SC-05-K-1高的细胞/[0132]图5示出在本发明的实例4中合成的组合物99mTc-SC-05-L-1的OVCAR3细胞及TOV-断80%,表明发生了ER介导的过程。[0136]通过在代表性套细胞株(mantlecellline)及弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma,DLBCL)细胞株中使用细胞存活率(cellviability)测定，评估了化合物SC-05-K-1以及化合物SC-05-L-1抵抗淋巴瘤细胞的效果。[0137]图6示出本发明的化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1抵抗淋巴瘤细胞的效果。如图6所示，这些细胞株通过大麻受体过度表达。[0139]随着化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1的浓度增加，对细胞进行了治疗。比较了对化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1敏感或较不敏感的代表性DLBCL细胞株。[0140]图7A及图7B示出在本发明的实例3中合成的化合物SC-05-L-1的体外抗癌研究。图8A及图8B示出在本发明的实例1及实例3中合成的化合物SC-05-K-1及化合物SC-05-L-1的体外抗癌研究。如图7A及图7B所示，体外抗癌研究表明化合物SC-05-L-1抵抗淋巴瘤细胞具有剂量依赖方式(dose-dependentmanner)。如图8A及图8B所示，化合物SC-05-L-1及化合物SC-05-K-1二者显示出抵抗淋巴瘤细胞的相似的剂量依赖方式。然而，化合物SC-05-L-1的毒性低于化合物SC-05-K-1。换句话说，螯合剂环拉胺的毒性低于螯合剂大环多胺。[0141]综上所述，本发明提供雌激素受体与大麻受体之间的相互交谈用组合物。羟基包含在制成品中。在本发明的组合物中，使用受保护的螯合剂来使环氧基化受体配体反应以形成螯合剂-受体配体共轭体。技术平台可利用共轭拮抗剂及激动剂，并观察其在各种形式的疾病中的效果。此外，所述组合物还可使用技术人员所已知的化学程式而被制备成药物配方及套组。另外，还提供合成所述组合物的方法，且所述合成方法可不再需要向受体配体中添加保护基，且会提高制程效率并纯化最终产品。除此之外，可使用本发明的组合物对[0142]虽然本发明已以实施例揭示如上，然其并非用以限定本发明，任何所属技术领域中技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，当可作些许的更改与润饰，故本发明的保护范围当视权利要求所界定的为准。ε二ZHW20'002:bayJajauo256照照W三器三蔬转来二W二上三PulseSequence:s56