DB54-T 0565-2026牛羊肉孢子虫病防控技术规程

ICS11.220CCSB4154IDB54/T0565—2026 2规范性引用文件 3术语和定义 4流行特点 5样品的采集、保存和运输 6诊断 7预防 8检疫监督 附录A（规范性）压片镜检法 附录B（资料性）住肉孢子虫形态 附录C（规范性）住肉孢子虫PCR实验方法 DB54/T0565—2026本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所、中国农业科学院上海兽医研究所。本文件主要起草人：单曲拉姆、米荣升、扎西央宗、索朗曲吉、赵霞玲、王冬经、马弘财、任越。DB54/T0565—20261牛羊住肉孢子虫病防控技术规程本文件规定了牛羊住肉孢子虫病的流行特点、样品采集、保存和运输、诊断、预防、检疫监督及人员防护措施。本文件适用于牛羊住肉孢子虫病的防控工作。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16567种畜禽调运检疫技术规范GB7959粪便无害化卫生要求GB/T36195畜禽粪便无害化处理技术规范NY/T3961畜禽屠宰加工人员防护技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1住肉孢子虫病住肉孢子虫侵入中间宿主的肌肉和终末宿主肠道引起的一种危害严重的人兽共患食源性寄生虫病。4流行特点4.1宿主特异性牛羊是住肉孢子虫的中间宿主，犬、猫、狐狸等肉食动物以及人类是终末宿主。4.2传播途径中间宿主食入被终末宿主粪便污染的饲料或水，终末宿主通过捕食感染的中间宿主而感染。4.3流行季节发病多为秋、冬季。5样品的采集、保存和运输DB54/T0565—202625.1样品的采集采集50g～80g新鲜牛羊肌肉，记录样品采集地点、日期、牲畜种类、年龄、采集部位及病史等内5.2样品的保存和运输样品低温保存送回实验室，短期在2℃~8℃保存，长期在-20℃及以下保存或浸泡于福尔马林溶液6诊断6.1临床诊断6.1.1临床症状通常表现为食欲减退、贫血、水肿、尾端脱毛并坏死，严重时出现流产、四肢伸直、肌肉僵硬等症状。6.1.2病理变化肉眼可见大量顺肌纤维方向着生的白色条纹或乳白色包囊，肉质糜烂或坏死。若包囊破裂崩解，导致虫体死亡，则会引起局部结缔组织增生和单核细胞、嗜酸性粒细胞反应，肌纤维变性、坏死以及进一步发生钙化。6.1.3临床结果判定牛羊出现上述临床症状可判定为疑似住肉孢子虫感染。在病理学检查时发现被检样品中有白色条纹或包囊，即可确诊为住肉孢子虫感染。6.2实验室诊断6.2.1压片镜检法肌肉样品压片镜检法具体操作见附录A，牛羊住肉孢子虫形态见附录B。6.2.2PCR诊断法PCR诊断具体方法见附录C。6.2.3血清检测法可采用ELISA试剂盒方法按说明书检测血清中住肉孢子虫特异性抗体，适用于群体筛查和流行病学调查。7预防7.1粪便无害化处理加强对住肉孢子虫终末宿主粪便的管理，按GB7959规定进行无害化处理。7.2切断传播途径DB54/T0565—20263圈舍内严禁犬猫，加强对鼠的控制；严防犬、猫等动物粪便接触牛羊饲料及饮水。7.3环境消毒定期用25%来苏尔、含氯消毒剂或过氧化物消毒剂交替使用对圈舍进行消毒。发生过本病的区域，消毒后空舍时间不低于30d。7.4饲养管理保持圈舍的干净卫生，严格控制圈舍的温度湿度，避免潮湿闷热，加强圈舍通风、光照。减少应激因素，提高动物的免疫力。7.5肉品安全处理屠宰发现有白色包囊的肉品应无害化处理。7.6人员防护接触犬、猫等粪便时做好个人防护，作业后彻底洗手，防止经口感染。使用过的口罩和一次性手套采用高温或焚烧等方式按NY/T3961进行无害化处理。8检疫监督8.1产地检疫牛羊出售或流动之前，养殖场/户应向当地动物卫生监督机构申报检疫，按畜禽产地检疫取得动物检疫合格证明。8.2屠宰检疫动物卫生监督机构的检疫人员对待宰牛羊进行查证验物，合格后方可入厂/场屠宰。8.3引种检疫引进牛羊时，按GB16567进行畜禽调运检疫。引入的牛羊必须隔离饲养15d～30d,合格后方可进场/户饲养。8.4监督管理牛羊及其产品凭检疫合格证明运输、销售；牛羊尸体、圈舍内粪便和废弃物按GB/T36195规定进行无害化处理。DB54/T0565—20264（规范性）压片镜检法A.1主要仪器设备外科手术剪、不锈钢镊子、不锈钢、铝合金或塑料肉样盘,载玻片及生物显微镜。A.2试剂甘油。A.3操作方法A.3.1目镜剔除脂肪、结缔组织及肌膜，暴露出肌肉，在光线下观察肌纤维间是否含灰白/乳白色纺锤形、圆柱形等包囊。A.3.2压片镜检取疑似包囊或随机取剪肉样，顺肌纤维剪铅笔芯大小条，每片4条～6条，加甘油后压至半透明，显微镜下全片检查。A.4结果判定少数住肉孢子虫包囊肉眼可见，其形态大小各异；多数则需镜检，若镜检发现纺锤形、卵圆形包囊，判定为阳性，否则判定为阴性。DB54/T0565—20265（资料性）住肉孢子虫形态图B.1巨型住肉孢子虫图B.2显微镜下住肉孢子虫A：羊柔嫩住肉孢子虫（VP呈指状突起）；B：白羊犬住肉孢子虫（VP呈毛状突起）;C：牦牛犬住肉孢子虫（VP呈现长毛状突起）；D：海氏住肉孢子虫（VP呈现短毛状突起E：诺氏住肉孢子虫（VP呈长指状突起F：似人住肉孢子虫（VP呈短指状突起）图B.3不同种类住肉孢子虫（镜检400X)DB54/T0565—20266（规范性）住肉孢子虫PCR实验方法C.1主要仪器高速离心机、PCR基因扩增仪、微量可调移液器、核酸电泳仪及凝胶成像分析系统。C.2主要试剂2×PCRMix、DL2000DNAMarker、Ts-GelRed、核酸染料及琼脂糖。C.3操作方法C.3.1PCR扩增采用PCR方法扩增住肉孢子虫基因部分序列，PCR采用50μL反应体系:DNA模板4μL，2×PCRMix25μL，上下游引物各2μL，加ddH2O补足至50.0μL。PCR循环参数：95℃预变性5min;94℃变性15s,Tm退火15s,72℃延伸1kb/s,35个循环;72℃延伸10min。引物序列信息见表C.1。C.3.2琼脂糖凝胶电泳用1XTAE缓冲溶液配制1.0%琼脂糖凝胶,每100mL凝胶中加入10μL核酸染料。取PCR产物5μL,在1.0%琼脂糖凝胶中以150V凝胶的电