免疫细胞制备技术员岗位招聘考试试卷及答案

免疫细胞制备技术员岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.免疫细胞制备中最常用的T细胞激活剂是______。2.分离外周血单个核细胞（PBMC）常用的密度梯度试剂是______。3.细胞冻存的核心保护剂是______。4.CO₂培养箱的常规CO₂浓度为______%。5.台盼蓝染色后，活细胞呈______色。6.免疫细胞表型鉴定的常用技术是______。7.CAR-T细胞制备常用的病毒载体是______。8.细胞培养的无菌环境工具是______。9.常用的T细胞扩增细胞因子是______。10.免疫细胞质量控制的核心指标包括活率、纯度和______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.下列不属于免疫细胞的是（）A.T细胞B.B细胞C.红细胞D.NK细胞2.细胞冻存的正确降温速率是（）A.-10℃/minB.-1℃/minC.室温自然降温D.直接入液氮3.会导致细胞污染的操作是（）A.超净台紫外照30minB.酒精擦手C.瓶口对火焰D.开瓶远离火焰4.PBMC分离时血液与Ficoll的比例是（）A.1:1B.2:1C.1:2D.3:15.无血清培养基的优势不包括（）A.减少批间差B.避免病原体污染C.降低成本D.便于标准化6.流式检测中不常用的荧光染料是（）A.FITCB.PEC.DAPID.EB7.CAR-T细胞转染后筛选方法不包括（）A.抗生素筛选B.磁珠分选C.流式分选D.直接培养8.细胞活率检测方法不包括（）A.台盼蓝排斥法B.MTT法C.AnnexinV/PID.显微镜计数9.生物安全柜使用错误的是（）A.操作前开紫外B.操作时关风机C.试剂离火焰D.及时清废弃物10.用于T细胞扩增的细胞因子是（）A.IL-2B.IL-4C.IL-6D.IL-10三、多项选择题（每题2分，共20分）1.免疫细胞来源包括（）A.外周血B.脐带血C.骨髓D.肿瘤组织2.细胞培养基本条件（）A.无菌环境B.37℃温度C.95%湿度D.5%CO₂3.细胞污染类型（）A.细菌B.真菌C.支原体D.病毒4.流式细胞术应用（）A.表型鉴定B.活率检测C.凋亡检测D.细胞因子检测5.CAR-T制备关键步骤（）A.T细胞分离B.载体构建C.转染D.扩增6.细胞冻存注意事项（）A.活率≥90%B.DMSO浓度10%C.直接入液氮D.标记清晰7.细胞分离方法（）A.密度梯度离心B.磁珠分选C.流式分选D.贴壁培养8.质量控制指标（）A.计数B.活率C.纯度D.功能9.属于细胞因子的是（）A.IL-2B.IFN-γC.TNF-αD.CD310.生物安全柜维护（）A.换HEPA滤网B.检测风速C.清洁内部D.避免堆放四、判断题（每题2分，共20分）1.CO₂的作用是维持培养基pH（√）2.支原体污染不影响细胞生长（×）3.血清可直接使用无需灭活（×）4.活细胞流式检测需固定（×）5.冻存细胞长期存-80℃（×）6.磁珠可特异性分离免疫细胞（√）7.所有试剂需无菌处理（√）8.CAR结构无抗原结合域（×）9.台盼蓝染色不超5min（√）10.生物安全柜避免放风口（√）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述PBMC分离原理及要点答案：原理：利用Ficoll密度梯度（PBMC密度1.077g/mL，介于红细胞和血浆之间）离心分层。要点：①血液与Ficoll按2:1稀释；②缓慢铺层避免混匀；③2000rpm离心30min（无刹车）；④吸取中间层PBMC；⑤PBS洗涤2次去残留。2.免疫细胞冻存复苏注意事项答案：冻存：①活率≥90%；②冻存液10%DMSO+90%血清/无血清添加剂；③慢速降温（-1℃/min），-80℃过夜转液氮；④标记清晰。复苏：①37℃快速解冻（1-2min）；②立即加预热培养基稀释DMSO；③离心弃上清重悬；④24h换液去死细胞。3.流式表型鉴定流程答案：①细胞制备：调浓度1×10⁶/mL；②荧光抗体孵育（如CD3-PE、CD4-FITC），避光30min；③PBS洗涤2次；④可选固定（1%多聚甲醛）；⑤上机收集10⁴-10⁵细胞；⑥软件分析表型比例（如CD3+CD4+占比）。4.常见污染及预防答案：污染类型：细菌、真菌、支原体。预防：①无菌操作（紫外照30min、酒精消毒）；②试剂过滤灭菌；③定期清洁培养箱；④支原体定期检测（PCR/培养）；⑤个人防护（手套、口罩）。六、讨论题（每题5分，共10分）1.无血清培养基的优势与挑战答案：优势：①无动物源病原体（疯牛病、支原体）；②批间差小，标准化易；③避免血清不明成分影响细胞功能；④利于下游纯化（如CAR-T临床）。挑战：①成本高（添加剂贵）；②部分细胞（如TIL）依赖血清；③需优化配方（细胞系差异大）；④复苏活率略低。2.免疫细胞质量控制体系建立答案：①原材料：试剂/耗材合格证明及检测；②过程控制：分离活率≥90%、扩增倍数（T细胞≥1000倍）、无菌检测；③终产品：计数、活率≥85%、纯度≥90%（如CD3+T）、功能（IFN-γ分泌、杀伤活性）；④记录：全程可追溯；⑤验证：方法学（流式准确性）、稳定性（冻存细胞功能）。答案汇总一、填空题1.CD3/CD28磁珠2.Ficoll-Paque3.DMSO4.55.无色（拒染）6.流式细胞术7.慢病毒8.生物安全柜9.IL-210.功能活性二、单项选择题1.C2.B3.D4.B5.C6.D7.D8.D9.B10.A三、