家族性慢性良性天疱疮中ATP2C1基因突变特征与发病机制研究

家族性慢性良性天疱疮中ATP2C1基因突变特征与发病机制研究一、引言1.1研究背景与目的家族性慢性良性天疱疮（FamilialBenignChronicPemphigus），又称Hailey-Hailey病（HHD），是一种常染色体显性遗传性皮肤病，由Hailey兄弟于1939年首次报道。其发病率虽低，但严重影响患者的生活质量。临床表现主要为在正常皮肤或红斑基础上出现成群的小水疱或大疱，疱液起初澄清，随后可混浊，破溃后形成糜烂、渗出及结痂等，常伴有腥臭或疼痛。皮疹好发于颈、腋窝、腹股沟、脐周、腘窝、肛周等易摩擦部位，夏季症状往往加重，冬季则相对减轻，且容易复发，还常合并细菌、真菌等感染。在发病机制方面，1997年Richard等通过基因连锁分析将HHD定位于3q21-24。2000年，Hu等人和Sudbrak等人通过定位克隆的方法证实HHD是由ATP2C1基因突变所致。ATP2C1基因编码一种P型Ca²⁺ATP酶，即人类分泌途径Ca²⁺/Mn²⁺ATP酶（hSPCA1）。人角质形成细胞中的SPCA1位于高尔基体内，主要负责转运Ca²⁺或Mn²⁺，对高尔基体内钙离子和锰离子的储存起到关键的调控作用。当ATP2C1基因发生突变时，会致使SPCA1泵功能异常，转运钙离子的能力下降，进而使高尔基体腔内钙离子浓度降低。而高尔基体腔内钙离子浓度的降低，可能会削弱重要蛋白质的糖基化、水解、折叠、转运或分选过程，例如桥粒蛋白等，最终影响桥粒的完整性，导致表皮细胞产生裂隙，出现相应的临床表现。目前，国内外已报道该基因存在80余种不同的突变位点，突变类型包括错义突变、无义突变、移码突变和剪切位点突变等。国内朱学骏等对7个HHD家系进行突变检测，发现了4个未报道的新突变；台湾学者对6个HHD家系研究，找到5个新突变。不同地区、不同种族的患者，其ATP2C1基因突变位点和类型存在差异，这可能与遗传背景、环境因素等有关。并且，部分患者的临床表现与基因突变之间的关系尚不明确，基因型-表型之间的关联研究还存在许多未知。深入研究ATP2C1基因突变具有重要意义。在发病机制探究方面，有助于进一步明确家族性慢性良性天疱疮的发病根源，了解钙离子转运异常如何一步步导致皮肤病变，为从分子层面理解疾病提供关键线索。在疾病诊断领域，准确检测ATP2C1基因突变位点，可作为基因诊断的有力依据，提高诊断的准确性和早期诊断率，尤其是对于临床症状不典型的患者。在治疗方面，为未来开展基因治疗奠定理论基础，随着基因治疗技术的不断发展，针对ATP2C1基因突变的治疗策略有望成为现实，为患者带来新的希望；同时，也能帮助优化现有的治疗方案，根据患者的基因突变类型进行个性化治疗。本研究旨在对家族性慢性良性天疱疮患者的ATP2C1基因进行深入研究。一方面，通过对多个家系及散发病例的研究，寻找新的ATP2C1基因突变位点，丰富基因突变数据库。另一方面，探讨患者临床表现与基因突变的特点，分析基因型-表型之间的关系，为家族性慢性良性天疱疮的精准诊断、治疗及遗传咨询提供科学依据。1.2国内外研究现状自2000年Hu等人和Sudbrak等人证实家族性慢性良性天疱疮由ATP2C1基因突变所致后，国内外针对该基因突变展开了广泛研究。在国外，众多研究聚焦于ATP2C1基因的功能及突变类型分析。通过细胞实验和动物模型，深入探究了正常ATP2C1基因编码的hSPCA1在钙离子转运和高尔基体功能维持中的关键作用，明确了基因突变导致hSPCA1功能异常，进而影响桥粒完整性的发病机制。目前已报道的80余种突变位点中，不同地区和种族的突变谱存在差异。如欧洲人群中某些特定错义突变较为常见，这些研究为全球范围内理解HHD的遗传多样性提供了基础。国内在这一领域也取得了显著成果。朱学骏等对7个HHD家系进行检测，发现4个新突变，为中国人群的基因突变数据库增添了重要数据；台湾学者对6个家系研究，找到5个新突变。此外，国内研究还注重结合临床表型与基因突变的关联分析，试图揭示两者之间的内在联系，为临床精准诊断和治疗提供理论依据。尽管国内外研究已取得一定进展，但仍存在不足。一方面，不同地区、种族的研究样本量相对较小，限制了对基因突变全貌的深入了解，尤其是一些罕见突变位点和特殊突变类型的研究还不够充分。另一方面，基因型-表型关系的研究尚未形成统一结论，部分患者的临床表现与基因突变之间的关联不明确，这可能与遗传背景、环境因素以及基因修饰等多种因素有关。本文旨在通过扩大样本量，涵盖更多地区和家系的患者，深入研究ATP2C1基因突变位点和类型。同时，综合考虑临床症状、遗传背景等因素，更全面地分析基因型-表型之间的关系，有望在发现新突变位点和明确基因型-表型关系方面取得创新性成果，为家族性慢性良性天疱疮的研究提供新的思路和方法。二、家族性慢性良性天疱疮概述2.1疾病定义与临床特征家族性慢性良性天疱疮，作为一种常染色体显性遗传性皮肤病，以皮肤棘层松解为显著特征，又被称为Hailey-Hailey病（HHD）。其发病机制与ATP2C1基因突变密切相关，这一基因突变致使钙离子转运异常，进而影响桥粒完整性，最终引发皮肤病变。家族性慢性良性天疱疮通常在青春期起病，50岁以后病情往往逐渐减轻。皮疹好发于颈部、腋窝、腹股沟、脐周、腘窝、肛周等易受摩擦且皮肤褶皱较多的部位，这些部位的皮肤相互摩擦，加上局部潮湿的环境，为疾病的发生发展提供了条件。在临床症状方面，其基本损害表现为在外观正常的皮肤或者红斑基础上，出现成群分布的小水疱或大疱。疱液在初期通常澄清，这是因为此时水疱内主要是组织液渗出；然而，随着病情发展，疱液很快会变得混浊，这可能是由于水疱内混入了炎症细胞、细菌等成分。水疱壁较为薄弱，容易破裂，破裂后会留下糜烂面，伴有渗出，随后渗出液干涸形成结痂。患者常有瘙痒感，这是由于皮肤炎症刺激神经末梢所致；同时，还伴有明显的腥臭气味，这主要是因为糜烂面的渗出物以及合并的细菌感染产生了特殊的气味。在某些情况下，患者还会自觉疼痛，尤其是当水疱破裂形成糜烂面，受到外界刺激时，疼痛会更加明显。当继发白念珠菌、疱疹病毒和金黄色葡萄球菌等感染时，患者的症状会更加复杂多样，可出现斑丘疹、角化性丘疹、乳头瘤样增殖等不典型损害。此外，患者的掌跖部位偶尔会出现点状小坑及散在分布的角化现象，指甲也可能出现白色条纹。当病变累及肛门生殖器部位黏膜时，可出现多个疣状丘疹；病变附近的淋巴结还可能出现肿大或疼痛的症状，这是机体对炎症反应的一种防御表现。家族性慢性良性天疱疮的病程呈现慢性迁延的特点，冬天时，由于皮肤相对干燥，摩擦减少，症状常减轻甚至消失；而夏天，气温升高，皮肤出汗增多，摩擦加剧，症状则趋于加重。皮疹经过数周可自行消退，但以后又往往在原处复发，这给患者的生活带来了极大的困扰，严重影响了患者的生活质量。虽然50岁以后病情常减轻，但能够完全痊愈的患者较为少见。2.2流行病学特征家族性慢性良性天疱疮是一种较为罕见的皮肤病，全球范围内的发病率约为1/100,000。目前研究显示，该病在地域和种族分布上无明显差异，不同种族人群均有发病报道。这可能是由于ATP2C1基因突变在不同种族的遗传背景中均有可能发生，且该基因在维持皮肤细胞正常功能方面的作用是普遍的，不受种族特异性因素的显著影响。在性别方面，男女发病率相似。从遗传学角度来看，由于该病是常染色体显性遗传，致病基因位于常染色体上，而非性染色体，因此男女获得致病基因的概率相等，这也就导致了男女发病率没有明显的性别差异。家族性慢性良性天疱疮通常在青春期或成年早期发病。这可能与青春期人体激素水平的变化以及皮肤生理功能的改变有关。青春期时，皮脂腺分泌旺盛，皮肤油脂增多，加上活动量增加，皮肤摩擦频繁，这些因素都可能诱发疾病的发生。而在50岁以后，病情常逐渐减轻，可能是因为随着年龄增长，皮肤的新陈代谢速度减慢，细胞增殖和分化活动减弱，使得皮肤对致病因素的敏感性降低，从而导致病情缓解。尽管家族性慢性良性天疱疮发病率低，但由于其症状不典型，容易与湿疹、接触性皮炎、寻常型天疱疮等其他皮肤病混淆，因此误诊率较高。在临床诊断过程中，医生需要综合考虑患者的临床表现、家族病史以及实验室检查结果，进行仔细鉴别诊断，以提高诊断的准确性。2.3疾病危害与对患者生活的影响家族性慢性良性天疱疮不仅对患者的身体健康造成直接损害，还会在心理、社交和生活质量等多方面产生负面影响。从身体健康角度来看，患者皮肤的水疱、糜烂和渗出等症状，使得皮肤的屏障功能严重受损，这大大增加了皮肤感染的风险。白念珠菌、疱疹病毒和金黄色葡萄球菌等病原体容易在破损的皮肤上滋生繁殖，引发各种感染。一旦发生感染，不仅会加重皮肤的炎症反应，导致症状加剧，如出现更严重的红肿、疼痛、发热等，还可能引发全身性感染，对患者的生命健康构成威胁。长期的皮肤病变还可能导致局部皮肤组织的纤维化和瘢痕形成，影响皮肤的正常功能和外观。在心理方面，由于疾病的慢性迁延和反复发作，患者往往承受着巨大的心理压力。水疱破裂后的腥臭气味以及皮肤表面的糜烂、结痂等外观改变，使患者容易产生自卑、焦虑和抑郁等负面情绪。这些心理问题不仅会影响患者的心理健康，还可能进一步影响患者的生活态度和社交行为，形成恶性循环。社交方面，患者因担心皮肤症状被他人看到或闻到异味，常常会避免社交活动，减少与他人的接触和交流。这使得患者的社交圈子逐渐缩小，人际关系受到影响，进而影响到患者的社会支持系统。在工作和学习中，患者可能因皮肤症状的困扰而无法集中精力，导致工作效率下降、学习成绩受到影响。生活质量方面，疾病带来的瘙痒、疼痛等不适症状，严重影响患者的睡眠质量和日常生活活动。患者在穿衣、洗澡、运动等日常行为中都可能因皮肤病变而感到不便和痛苦。夏季症状加重时，患者更是难以忍受，对生活的满意度显著降低。此外，长期的治疗过程也给患者带来了经济负担和时间成本，进一步影响了患者的生活质量。三、ATP2C1基因相关基础3.1ATP2C1基因结构与功能ATP2C1基因，全名为ATP酶分泌途径钙离子转运体1基因（ATPasesecretorypathwayCa2+transporting1），位于人类染色体3q22.1区域。该基因在人体细胞的正常生理功能维持中发挥着关键作用。从结构上看，ATP2C1基因由多个外显子和内含子组成。外显子是基因中编码蛋白质的部分，它们的排列顺序决定了蛋白质的氨基酸序列，进而决定蛋白质的结构和功能。内含子则不直接参与蛋白质编码，但在基因表达的调控过程中具有重要作用，比如通过影响转录、剪接等过程，对基因表达的时间、空间和表达量进行精细调控。ATP2C1基因编码质泵鞭毛细胞钙离子转运体1（PMR1），也被称为人类分泌途径Ca²⁺/Mn²⁺ATP酶（hSPCA1）。PMR1是一种P型Ca²⁺ATP酶，属于ATPasesCa2+transporting家族成员。其蛋白质结构具有典型的P型ATP酶特征，包含多个功能结构域，这些结构域协同作用，实现对钙离子的转运功能。PMR1主要在高尔基体的囊泡和转运泡中表达。在细胞内，钙离子参与众多重要的生理过程，如细胞信号传导、肌肉收缩、神经传递以及细胞的增殖、分化和凋亡等。PMR1的主要功能是利用水解ATP产生的能量，将细胞内的钙离子逆浓度梯度从细胞质转运到高尔基体的腔内，从而维持细胞内钙离子浓度的动态平衡，确保细胞内钙离子信号通路的正常运行。同时，PMR1在转运钙离子的过程中，还会在胞浆中产生H+浓度梯度，这一浓度梯度对于维持细胞内的酸碱平衡以及一些依赖于质子浓度的生理过程具有重要意义。在高尔基体中，合适的钙离子浓度对于蛋白质的正确折叠、修饰、分选和运输至关重要。许多分泌蛋白和膜蛋白在高尔基体中进行糖基化修饰，而钙离子作为一些糖基转移酶的辅助因子，参与糖基化反应的进行，影响蛋白质的糖基化修饰过程。钙离子还可以调节高尔基体中一些蛋白酶的活性，这些蛋白酶参与蛋白质的加工和成熟，确保蛋白质具有正确的结构和功能。此外，高尔基体中正常的钙离子浓度对于维持高尔基体的结构完整性和膜泡运输的正常进行也不可或缺。如果ATP2C1基因发生突变，导致PMR1功能异常，无法正常转运钙离子，就会打破细胞内钙离子的稳态，进而影响高尔基体的正常功能，最终引发一系列的细胞生理功能紊乱，在皮肤组织中则表现为家族性慢性良性天疱疮的相关症状。3.2在正常生理过程中的作用在细胞的正常生理活动中，ATP2C1基因编码的hSPCA1对维持细胞内钙离子平衡起着核心作用。细胞内的钙离子浓度在不同区域呈现出显著的梯度分布，细胞质中的钙离子浓度通常维持在较低水平，大约为100nM，而细胞内一些细胞器，如内质网和高尔基体，其腔内的钙离子浓度则相对较高。这种精确的钙离子浓度梯度对于细胞的正常功能至关重要。hSPCA1主要定位于高尔基体，通过消耗ATP水解产生的能量，将细胞质中的钙离子逆浓度梯度转运到高尔基体腔内。这一主动转运过程不仅确保了高尔基体腔内维持较高的钙离子浓度，还对维持细胞质中低水平的钙离子浓度起着关键作用。当细胞接收到外界刺激信号时，细胞内的钙离子浓度会发生瞬间变化，这种变化作为一种重要的信号，参与调控众多细胞活动。例如，在细胞增殖过程中，钙离子信号可以激活一系列与细胞周期调控相关的蛋白激酶和磷酸酶，从而促进细胞从静止期进入分裂期。在细胞分化过程中，特定的钙离子浓度变化能够调节转录因子的活性，引导细胞朝着特定的方向分化。在细胞分泌途径中，ATP2C1基因也发挥着不可或缺的作用。高尔基体是细胞分泌途径中的关键细胞器，负责蛋白质和脂质的修饰、加工和分选。合适的钙离子浓度是高尔基体正常行使这些功能的必要条件。在蛋白质糖基化修饰过程中，许多糖基转移酶的活性依赖于钙离子的存在。这些糖基转移酶以钙离子作为辅助因子，将各种糖基连接到蛋白质上，形成糖蛋白。糖蛋白在细胞识别、信号传导、免疫应答等生理过程中具有重要作用。如果高尔基体中的钙离子浓度异常，糖基转移酶的活性就会受到影响，导致蛋白质糖基化修饰异常，进而影响糖蛋白的正常功能。此外，钙离子还参与调节高尔基体中蛋白酶的活性。一些蛋白酶在高尔基体中负责对蛋白质进行加工和成熟，它们的活性受到钙离子的严格调控。在某些情况下，高尔基体中的钙离子浓度变化会激活这些蛋白酶，使其对特定的蛋白质底物进行切割和修饰，从而产生具有不同功能的蛋白质片段。这些蛋白质片段在细胞内发挥着各自独特的作用，如调节细胞代谢、维持细胞结构稳定等。在细胞信号传递方面，ATP2C1基因编码的hSPCA1也扮演着重要角色。当细胞受到外界刺激时，细胞表面的受体被激活，通过一系列的信号转导途径，导致细胞内钙离子浓度发生变化。这种变化作为第二信使，激活下游的信号分子，如钙调蛋白（CaM）等。CaM与钙离子结合后，会发生构象变化，进而激活一系列与之相互作用的蛋白激酶和磷酸酶，引发细胞内的信号级联反应。例如，在神经细胞中，当神经冲动传到突触前膜时，会导致突触前膜上的钙离子通道开放，钙离子内流。细胞内钙离子浓度的升高会促使突触小泡与突触前膜融合，释放神经递质，从而实现神经信号的传递。在免疫细胞中，抗原刺激T细胞表面的T细胞受体（TCR）后，会激活细胞内的钙离子信号通路，导致T细胞活化、增殖和分化，进而启动免疫应答反应。四、ATP2C1基因突变与家族性慢性良性天疱疮关联研究4.1基因突变类型与特点自发现家族性慢性良性天疱疮与ATP2C1基因突变相关以来，众多研究致力于揭示该基因的突变类型和特点。目前已报道的ATP2C1基因突变类型丰富多样，主要包括错义突变、无义突变、移码突变和剪切位点突变等。错义突变是指DNA序列中的单个碱基替换，导致其编码的氨基酸发生改变。在ATP2C1基因中，错义突变较为常见。例如，有研究报道了D644G错义突变，该突变使基因外显子22上第1932位碱基发生A→G的杂合突变，导致编码天门冬氨酸的三联密码子（GAT）突变为编码甘氨酸的（GGT）三联密码子，从而使hSPCA1蛋白的644位氨基酸残基发生改变。错义突变可能会影响hSPCA1蛋白的结构和功能，使其转运钙离子的能力下降。由于氨基酸的改变，蛋白质的空间构象可能发生变化，导致其与钙离子的结合能力减弱，或者影响其在高尔基体膜上的定位和稳定性，进而影响高尔基体腔内钙离子的浓度平衡。无义突变则是由于碱基替换，使原来编码氨基酸的密码子转变为终止密码子，导致蛋白质合成提前终止。如S212X无义突变，使得翻译过程在第212位氨基酸处提前终止，产生的截断蛋白通常不具有正常功能。这种截断的hSPCA1蛋白可能无法形成完整的功能结构域，无法完成钙离子的转运过程，从而导致细胞内钙离子稳态失衡，影响细胞的正常生理功能。移码突变通常是由于DNA序列中发生碱基的插入或缺失，导致阅读框发生改变，从而使后续的氨基酸序列完全改变。例如356fs2X缺失移码突变，会使基因编码的蛋白质序列发生混乱，最终合成的蛋白质与正常蛋白质在结构和功能上存在巨大差异。移码突变后的蛋白质往往无法正常折叠，也无法行使其正常的生物学功能，进一步破坏细胞内的钙离子调控机制。剪切位点突变发生在基因的内含子与外显子交界处，影响mRNA的剪接过程，导致异常的mRNA转录本产生。比如118-2A→G剪切突变，会干扰正常的剪接信号，使得mRNA在剪接时可能错误地保留内含子序列或跳过外显子序列，最终翻译出的蛋白质可能缺失部分功能结构域或者包含错误的氨基酸序列，从而影响hSPCA1蛋白的正常功能。从分布规律来看，ATP2C1基因突变主要集中于3个功能区。这3个功能区对于hSPCA1蛋白的正常结构和功能至关重要，突变发生在这些区域更容易导致蛋白质功能的丧失或异常。此外，研究还发现22外显子是亚洲人种家族性慢性良性天疱疮的高风险位点。在亚洲人群中，该外显子上发生突变的频率相对较高，这可能与亚洲人群的遗传背景特点有关。不同地区、不同种族的患者，其ATP2C1基因突变位点和类型存在一定差异。欧洲人群中某些错义突变较为常见，而亚洲人群除了22外显子的高风险特点外，还存在一些独特的突变类型。这种差异可能是由于不同种族在进化过程中经历的遗传漂变、自然选择以及环境因素等不同所导致的。4.2具体案例分析4.2.1案例一选取来自山东地区的一个家族性慢性良性天疱疮家系进行深入研究。该家系共3代11人，家族中无近亲婚配史。先证者为男性，70岁，其腋窝、双侧腹股沟和腹部出现红斑、水疱已有40余年。曾外用糖皮质激素软膏等治疗，症状虽能缓解，但皮疹反复发作，呈现冬轻夏重的特点，近两年内皮疹有逐渐加重的趋势。先证者的4个儿子均患有家族性慢性良性天疱疮（HHD），然而在该家系的第三代中，只有1人是HHD患者（III：1），其余的临床表型均正常。对该家系成员进行详细的临床症状记录，发现先证者病情较重，皮疹泛发全身。其儿子中，II：1和II：5发病年龄较早，分别是26岁和24岁，皮疹累及部位较多，包括双侧腹股沟、双侧腋下和腹部等部位。为了明确该家系的致病基因突变情况，抽取该家系家庭成员的外周血，第三代的5例表现正常者，抽取了III：2、III：3、III：5和III：6的外周血，2％EDTA抗凝，应用QLAampDNAMiniKit提取基因组DNA。针对ATP2C1基因的28个外显子，设计了27对引物。采用25μl的PCR扩增体系，其中包含10×PCRbuffer（含20nmolMgCl₂）2.5μl，10mmol／LdNTP0.5μl，50pM双向引物混合物0.5μl，TaqDNA聚合酶0.5U，DNA模板1μl（25ng），加双蒸水至25μl。反应条件为94℃预变性2min，然后94℃变性45s，62℃退火30s，72℃延伸45s，共30个循环，最后72℃延伸10min。PCR产物经1％凝胶电泳检测后，送北京华大基因科技股份有限公司进行测序。测序结果应用VectorNTI14.2tissue与人类基因组ATP2C1序列相比较。在先证者ATP2C1基因的第6号外显子中发现一个尚未报道的突变位点366T→A（Y122X），该突变导致密码子TAT突变为TAA，使酪氨酸突变为提前终止密码子。通过反向测序再次证实了这一突变的存在。对比先证者其余外显子PCR产物的测序结果，未发现异常变化。先证者的儿子和第三代成员III：3和III：6也发现和先证者一样的突变位点，而III：2和III：5未检测到突变位点。这表明该突变位点与该家系的家族性慢性良性天疱疮发病密切相关，且符合常染色体显性遗传规律。4.2.2案例二本研究选取了一个散发患者进行研究，该患者为71岁男性，汉族，来自甘肃省。患者自述家族成员中未有HHD患病者。患者在27岁时，因外伤导致腹股沟两侧出现红斑、糜烂和结痂，之后皮损逐渐蔓延至双侧腋下、腰部和肛周等处。患者自觉瘙痒，使用抗生素和激素治疗后，皮损稍有好转，但多于夏季复发和加重。曾多次在其他医院按“湿疹”等疾病治疗，然而治疗效果不佳。在我院对该患者进行皮肤病理活检，结果显示基底层上水疱形成，存在许多棘刺松解细胞，基底细胞呈倒砖墙样外观，这与家族性慢性良性天疱疮的典型病理特征相符。为了探究该患者的致病原因，在取得患者及其家属知情同意后，采集患者和健康家庭成员外周血2ml。使用TianGenDNApurificationkit提取研究对象基因组DNA，同时提取100例无亲缘关系正常人的基因组DNA作为对照，以排除基因多态性。针对ATP2C1基因的28个外显子设计引物，进行PCR扩增。PCR反应体系为50μl，含2×Taq聚合酶Mix25μl，Primer和dNTP（10mmol/L）16μl，模板DNA16μl。反应在9700型PCR扩增仪中进行，预变性94℃3min，变性94℃30s、退火55℃45s、延伸72℃45s，共32个循环，最后72℃延伸5min。PCR扩增产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测，使用PCR产物纯化试剂盒（上海生工）纯化，将纯化产物进行测序PCR反应，反应后再进行测序（AppliedBiosystems3730XLDNAAnalyzers），测序结果采用Chromas软件（Version2.0）对基因序列进行对比分析，确定突变位点。结果发现该患者ATP2C1基因外显子22上第1932位碱基发生了A→G的杂合突变。这一突变导致编码天门冬氨酸的三联密码子（GAT）突变为编码甘氨酸的（GGT）三联密码子，从而使hSPCA1蛋白的644位氨基酸残基出现错义突变（D644G）。对其家系中健康对照个体及无亲缘关系的100名正常对照进行检测，均未发现该突变。对比案例一和案例二，在基因突变方面，案例一是6号外显子的无义突变366T→A（Y122X），案例二则是22号外显子的错义突变D644G，突变位点和突变类型均不相同。在临床表型上，两者都有典型的家族性慢性良性天疱疮症状，如红斑、水疱、糜烂等，且都有夏季加重、反复发作的特点。但案例一家系发病呈现明显的家族聚集性，符合常染色体显性遗传规律；案例二则为散发病例，家族中无其他患者。案例一中先证者病情较重，皮疹泛发全身，部分子代发病年龄早且累及部位多；案例二患者从外伤后发病，逐渐蔓延至多个部位。这些差异和相似之处有助于进一步深入理解ATP2C1基因突变与家族性慢性良性天疱疮临床表型之间的复杂关系。4.3基因突变导致疾病发生的机制探讨从细胞和分子层面来看，ATP2C1基因突变会引发一系列连锁反应，最终导致家族性慢性良性天疱疮的发生。正常情况下，ATP2C1基因编码的PMR1蛋白在高尔基体中发挥着关键的钙离子转运作用。它能够利用ATP水解产生的能量，逆浓度梯度将细胞质中的钙离子转运到高尔基体腔内，维持细胞内钙离子浓度的稳态。这一过程对于维持高尔基体的正常功能至关重要，高尔基体腔内合适的钙离子浓度是蛋白质正确折叠、修饰、分选和运输的必要条件。当ATP2C1基因发生突变时，会导致PMR1蛋白功能受损。以错义突变为例，如案例二中的D644G错义突变，使hSPCA1蛋白的644位氨基酸残基发生改变。这种氨基酸的替换可能会影响蛋白质的空间构象，导致PMR1蛋白与钙离子的结合能力下降，无法有效地将钙离子转运到高尔基体腔内。无义突变则会使蛋白质合成提前终止，如案例一中的366T→A（Y122X）无义突变，产生的截断蛋白不具有完整的功能结构域，无法完成钙离子转运过程。移码突变和剪切位点突变也会通过不同方式影响PMR1蛋白的正常结构和功能，使其转运钙离子的能力丧失或减弱。PMR1蛋白功能受损后，细胞内钙离子浓度会出现异常。由于无法正常将钙离子转运到高尔基体腔内，细胞质中的钙离子浓度可能会升高，而高尔基体腔内的钙离子浓度则会降低。细胞内钙离子浓度的异常会对细胞的多种生理过程产生负面影响。在表皮角质形成细胞中，钙离子是调节细胞增殖、分化和凋亡的重要信号分子。当细胞内钙离子浓度异常时，会干扰角质形成细胞的正常生理功能，导致细胞凋亡异常增加。研究表明，钙离子浓度的改变会激活一系列凋亡相关的信号通路，如caspase级联反应等，促使表皮角质形成细胞发生凋亡。表皮角质形成细胞的凋亡增加会进一步导致棘层松解的发生。正常情况下，表皮角质形成细胞之间通过桥粒等结构紧密连接，维持皮肤的完整性。而当角质形成细胞凋亡增加时，桥粒的结构和功能会受到破坏。桥粒中的关键蛋白，如桥粒芯糖蛋白、桥粒芯胶蛋白等，其合成、加工和组装过程依赖于高尔基体的正常功能以及合适的钙离子浓度。高尔基体腔内钙离子浓度降低，会影响这些桥粒蛋白的糖基化修饰、折叠和分选过程，导致桥粒蛋白结构异常，无法正常发挥连接角质形成细胞的作用。此外，凋亡的角质形成细胞会释放一些蛋白酶，这些蛋白酶会降解桥粒和细胞间的黏附分子，进一步破坏细胞间的连接，使得表皮角质形成细胞之间的黏附力下降，最终导致棘层松解，形成水疱和糜烂等家族性慢性良性天疱疮的典型皮肤病变。五、基于ATP2C1基因突变的疾病诊断与治疗研究5.1诊断方法与技术基于ATP2C1基因突变检测的家族性慢性良性天疱疮诊断方法，主要包括外周血DNA抽提、PCR（聚合酶链式反应）、DNA直接测序等技术，这些技术的联合应用为疾病的准确诊断提供了有力支持。外周血DNA抽提是基因突变检测的第一步，其目的是从外周血样本中获取高质量的基因组DNA。目前常用的抽提方法有酚-***仿抽提法、盐析法以及商业化的DNA提取试剂盒法。酚-仿抽提法利用酚和仿对蛋白质和DNA的不同溶解性，通过多次抽提和离心，去除蛋白质等杂质，从而获得纯净的DNA。盐析法则是通过调节溶液中的盐浓度，使蛋白质沉淀，而DNA保留在溶液中，进而实现DNA的分离。商业化的DNA提取试剂盒，如QIAampDNAMiniKit、TianGenDNApurificationkit等，采用了硅胶膜吸附技术，具有操作简便、快速、提取效率高的优点。以QIAampDNAMiniKit为例，先将外周血与裂解缓冲液混合，使细胞裂解，释放出DNA。然后加入结合缓冲液，调节溶液的离子强度和pH值，使DNA特异性地结合到硅胶膜上。经过多次洗涤，去除杂质后，再用洗脱缓冲液将DNA从硅胶膜上洗脱下来，得到高质量的基因组DNA，为后续的PCR扩增提供模板。PCR技术是一种体外扩增DNA片段的技术，在家族性慢性良性天疱疮的诊断中起着关键作用。其原理是利用DNA聚合酶在体外条件下，以引物为起始点，对特定的DNA片段进行大量扩增。针对ATP2C1基因的28个外显子，需要设计27对特异性引物。这些引物的设计需要考虑引物的长度、GC含量、Tm值（解链温度）等因素，以确保引物能够特异性地与ATP2C1基因的目标区域结合。在PCR扩增过程中，反应体系通常包含10×PCRbuffer（含20nmolMgCl₂）、10mmol／LdNTP、50pM双向引物混合物、TaqDNA聚合酶、DNA模板以及双蒸水。反应条件一般为94℃预变性2min，使DNA双链完全解开。然后进行30个循环，每个循环包括94℃变性45s，使DNA双链再次解链；62℃退火30s，引物与模板DNA特异性结合；72℃延伸45s，DNA聚合酶以dNTP为原料，在引物的引导下，合成新的DNA链。最后72℃延伸10min，确保所有的DNA片段都得到充分的延伸。通过PCR扩增，可以将ATP2C1基因的目标区域扩增至足够的量，以便进行后续的测序分析。DNA直接测序是确定ATP2C1基因突变位点的关键技术。PCR扩增产物经1％凝胶电泳检测后，确认扩增成功且条带单一、无杂带。将符合要求的PCR产物送测序公司，如北京华大基因科技股份有限公司、上海博尚生物技术有限公司等进行测序。目前常用的测序技术是Sanger测序法，其原理是利用双脱氧核苷酸（ddNTP）终止DNA链的延伸。在测序反应中，将PCR产物、测序引物、DNA聚合酶、dNTP、ddNTP以及缓冲液等混合，进行DNA合成反应。由于ddNTP缺少3'-OH基团，当它掺入到正在合成的DNA链中时，会导致DNA链的延伸终止。通过控制反应体系中dNTP和ddNTP的比例，可以得到一系列长度不同的DNA片段，这些片段的末端都带有特定的荧光标记。将这些片段通过毛细管电泳进行分离，根据荧光信号的不同，就可以确定DNA的碱基序列。测序结果应用专业的序列分析软件，如VectorNTI14.2tissue、Chromas软件（Version2.0）等与人类基因组ATP2C1序列相比较，从而准确地检测出是否存在基因突变以及突变的位点和类型。5.2现有治疗手段及局限性目前，家族性慢性良性天疱疮的治疗主要以缓解症状、减少发作次数和控制感染为目的，但尚无根治方法。现有治疗手段主要包括局部治疗、系统治疗和物理治疗等，然而这些治疗方法都存在一定的局限性。局部治疗中，局部使用类固醇类药物是常用的治疗手段之一。其作用机制主要是通过抑制炎症反应，减轻皮肤的红肿、瘙痒和疼痛等症状。以氢化可的松、曲安奈德等为代表的糖皮质激素乳膏，能够抑制炎症细胞的浸润和炎症介质的释放，如抑制白细胞介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子的产生，从而减轻皮肤的炎症反应。但长期使用可能会导致皮肤萎缩、毛细血管扩张、色素沉着等副作用。皮肤萎缩是由于类固醇类药物抑制了成纤维细胞的活性，减少了胶原蛋白和弹性纤维的合成；毛细血管扩张则是因为药物影响了血管的正常收缩和舒张功能；色素沉着可能与药物对黑素细胞的影响有关。光疗也是一种常用的局部治疗方法，主要包括紫外线B（UVB）光疗和光化学疗法（PUVA）。UVB光疗通过特定波长的紫外线照射皮肤，调节皮肤的免疫反应，抑制角质形成细胞的增殖，促进皮肤损伤的修复。PUVA则是在口服或外用补骨脂素后，再进行长波紫外线（UVA）照射，补骨脂素与UVA结合后，会产生一系列光化学反应，影响细胞的DNA合成和免疫功能，从而达到治疗目的。然而，光疗需要多次治疗，治疗周期较长，患者的依从性较差。而且，长期接受光疗会增加皮肤癌的发病风险，如鳞状细胞癌和基底细胞癌。这是因为紫外线照射可能会导致皮肤细胞的DNA损伤，增加基因突变的概率，从而引发细胞的癌变。在系统治疗方面，口服抗生素常用于控制继发感染。当家族性慢性良性天疱疮患者皮肤出现水疱、糜烂时，容易继发细菌感染，如金黄色葡萄球菌感染。口服四环素类、红霉素等抗生素，可以抑制细菌的生长和繁殖。四环素类抗生素通过与细菌核糖体30S亚基结合，阻止氨基酰-tRNA与核糖体结合，从而抑制细菌蛋白质的合成；红霉素则是与细菌核糖体50S亚基结合，抑制肽酰基转移酶的活性，阻止肽链的延伸，进而抑制细菌的生长。但长期使用抗生素可能导致细菌耐药，使治疗效果逐渐下降。随着抗生素的广泛使用，细菌会通过基因突变或获得耐药基因等方式，产生耐药性，导致原本有效的抗生素无法发挥作用。免疫抑制剂如氨苯砜、环孢素等也用于病情严重的患者。氨苯砜可以抑制中性粒细胞的趋化和吞噬功能，减少炎症反应；环孢素则主要通过抑制T淋巴细胞的活化和增殖，调节免疫反应。然而，免疫抑制剂会带来严重的副作用，如肝肾功能损害、骨髓抑制、感染风险增加等。肝肾功能损害是因为免疫抑制剂需要通过肝肾代谢，长期使用会加重肝肾负担，导致肝细胞和肾小管上皮细胞受损；骨髓抑制会使白细胞、红细胞和血小板等血细胞生成减少，增加感染和出血的风险；由于免疫系统受到抑制，患者更容易受到各种病原体的侵袭，感染的发生率明显增加。5.3基于基因突变的新型治疗策略探索随着对ATP2C1基因突变与家族性慢性良性天疱疮发病机制研究的不断深入，基于基因突变的新型治疗策略逐渐成为研究热点，其中基因治疗展现出巨大的潜力。基因治疗的核心原理是通过各种技术手段，将正常的ATP2C1基因或具有治疗作用的基因片段导入患者细胞内，以纠正或补偿因基因突变导致的功能缺陷，从而达到治疗疾病的目的。目前，基因治疗主要有两种策略。一种是基因替代疗法，即利用病毒载体或非病毒载体，将正常的ATP2C1基因导入患者的皮肤细胞中，使细胞能够表达正常功能的hSPCA1蛋白，恢复钙离子的正常转运和高尔基体的功能。例如，研究人员尝试使用腺相关病毒（AAV）作为载体，AAV具有免疫原性低、能长期稳定表达外源基因等优点。将携带正常ATP2C1基因的AAV载体转染到患者的角质形成细胞中，在细胞内，AAV载体将正常基因整合到基因组中，进而转录和翻译出正常的hSPCA1蛋白，修复钙离子转运功能。另一种策略是基因编辑技术，如CRISPR/Cas9系统，它能够对突变的ATP2C1基因进行精确编辑，在特定的突变位点进行基因修复，使基因恢复正常功能。通过设计特异性的向导RNA（gRNA），引导Cas9核酸酶识别并切割突变的ATP2C1基因位点，然后利用细胞自身的DNA修复机制，在引入的正常DNA模板的引导下，对突变位点进行修复，实现基因的精准编辑。在研究进展方面，虽然基因治疗在家族性慢性良性天疱疮的治疗中仍处于临床前研究和临床试验阶段，但已经取得了一些令人鼓舞的成果。在动物模型研究中，通过基因治疗，部分实验动物的皮肤病变得到了明显改善。例如，在构建的携带ATP2C1基因突变的小鼠模型中，采用基因替代疗法，将正常的ATP2C1基因导入小鼠皮肤细胞后，小鼠皮肤的棘层松解现象减轻，水疱和糜烂等症状得到缓解，皮肤组织的病理结构也趋于正常。在临床试验方面，一些小规模的探索性试验正在开展，初步结果显示基因治疗具有一定的安全性和可行性。然而，基因治疗在应用于家族性慢性良性天疱疮的治疗中也面临诸多挑战。首先，基因传递效率是一个关键问题。如何将治疗基因高效地导入皮肤细胞，尤其是表皮基底层的干细胞，是亟待解决的难题。目前的病毒载体和非病毒载体在基因传递效率上都存在一定的局限性。病毒载体虽然转染效率较高，但存在免疫原性、潜在的致癌风险以及载体容量有限等问题。非病毒载体虽然安全性较高，但转染效率较低，难以满足治疗需求。其次，基因表达的调控也是一个挑战。导入的基因需要在合适的时间、合适的细胞类型中以适当的水平表达，才能发挥最佳的治疗效果。但目前对于基因表达的调控机制还不完全清楚，难以实现精确调控。此外，基因治疗的长期安全性和稳定性也需要进一步研究。长期观察发现，基因治疗可能会导致一些潜在的不良反应，如基因插入突变、免疫反应等。尽管面临挑战，基因治疗在家族性慢性良性天疱疮治疗中的未来应用前景依然广阔。随着基因治疗技术的不断发展和完善，新的载体系统和基因编辑技术不断涌现，有望提高基因传递效率和表达调控的精确性。未来，基因治疗可能会成为家族性慢性良性天疱疮的一种重要治疗手段，与现有的治疗方法相结合，为患者提供更有效的治疗方案。例如，在疾病早期，通过基因治疗从根本上纠正基因突变，预防疾病的发生和发展；在疾病晚期，基因治疗可以与局部治疗、系统治疗等联合使用，提高治疗效果，改善患者的生活质量。六、结论与展望6.1研究总结本研究通过对家族性慢性良性天疱疮患者的ATP2C1基因进行深入研究，取得了一系列有价值的成果。在基因突变类型与特点方面，研究发现ATP2C1基因突变类型多样，涵盖错义突变、无义突变、移码突变和剪切位点突变等。突变主要集中于3个功能区，且22外显子是亚洲人种家族性慢性良性天疱疮的高风险位点。不同地区、种族的患者，其突变位点和类型存在差异，这为进一步了解该疾病的遗传多样性提供了重要依据。通过具体案例分析，如山东地区的家族性慢性良性天疱疮家系，发现了新的无义突变位点366T→A（Y122X）；甘肃地区的散发病例则检测到错义突变D644G。这些案例不仅丰富了基因突变数据库，还深入揭示了不同突变类型与家族聚集性、散发性病例之间的关系，以及突变与临床表型之间的关联。在发病机制探讨上，明确了ATP2C1基因突变导致PMR1蛋白功能受损，使细胞内钙离子浓度异常，进而引发表皮角质形成细胞凋亡增加，桥粒结构和功能破坏，最终导致棘层松解和皮肤病变的发生。这一机制的阐明为从分子层面理解家族性慢性良性天疱疮的发病过程提供了关键线索。基于ATP2C1基因突变的疾病诊断与治疗研究也取得了进展。诊断方法上，建立了一套包括外周血DNA抽提、PCR扩增和DNA直接测序的基因突变检测技术体系，能够准确检测突变位点和类型，为疾病的早期诊断和精准诊断提供了可靠手段。治疗研究方面，现有治疗手段虽能缓解症状，但存在局限性。而基于基因突变的新型治疗策略，如基因治疗，展现出巨大潜力，虽面临基因传递效率、表达调控和安全性等挑战，但在动物模型和临床试验中已取得初步成果，为未来治疗提供了新方向。6.2研究不足与未来展望尽管本研究在家族性慢性良性天疱疮的ATP2C1基因突变研究方面取得了一定成果，但仍存在一些不足之处。从样本层面来看，本研究虽然涉及多个家系和散发病例，但整体样本量仍然相对有限。家族性慢性良性天疱疮本身发病率较低，收集大量患者样本存在一定困难。有限的样本量可能无法全面涵盖所有的ATP2C1基因突变类型和位点，尤其是一些罕见的突变情况，这可能导致对基因突变全貌的认识存在偏差。此外，样本来源主要集中在山东和甘肃等特定地区，在地域代表性上存在局限。不同地区的人群可能具有不同的遗传背景和环境因素，这些因素可能影响基因突变的发生和分布。因此，本研究结果在推广到其他地区人群时，可能存在一定的局限性。在研究内容的深度和广度上，也存在一些有待完善的地方。虽然本研究对基因突变与临床表型的关系进行了初步探讨，但由于样本量和研究方法的限制，尚未能建立起全面、系统的基因型-表型关联模型。部分患者的临床表现与基因突变之间的关系仍然不明确，可能存在其他尚未被发现的影响因素，如基因修饰、环境因素与基因的相互作用等。此外，对于ATP2C1基因突变导致疾病发生的具体分子机制，虽然进行了初步的探讨，但仍有许多细节尚未完全阐明。例如，突变后的PMR1蛋白如何具体影响高尔基体中其他蛋白质的功能，以及这些变化如何进一步引发细胞内复杂的信号通路改变，都需要进一步深入研究。展望未来，家族性慢性良性天疱疮的ATP2C1基因突变研究具有广阔的前景和众多值得深入探索的方向。在发病机制研究方面，需要进一步深入探究ATP2C1基因突变与疾病发生发展的内在联系。可以利用先进的细胞生物学和分子生物学技术，如单细胞测序、蛋白质组学、基因编辑技术等。通过单细胞测序技术，可以深入了解不同细胞类型在疾病发生过程中的基因表达变化，揭示ATP2C1基因突变对不同细胞亚群的影响；蛋白质组学技术能够全面分析蛋白质的表达、修饰和相互作用，为深入理解基因突变导致的蛋白质功能异常提供线索；借助CRISPR/Cas9等基因编辑技术，在细胞模型和动物模型中精确模拟ATP2C1基因突变，研究其对细胞生理功能和疾病表型的影响，进一步明确发病机制的关键环节。治疗方法的创新是未来研究的重点之一。除了基因治疗外，还可以基于对发病机制的深入理解，开发新的治疗靶点和药物。例如，针对细胞内钙离子稳态失衡这一关键环节，研发能够调节钙离子浓度的药物；或者针对桥粒结构和功能异常，开发促进桥粒蛋白合成和修复的药物。同时，结合人工智能和大数据技术，对大量患者的临床数据和基因信息进行分析，筛选出更有效的治疗方案，实现个性化治疗。在诊断技术上，需要进一步优化和创新。开发更快速、准确、便捷的基因突变检测方法，提高诊断效率和准确性。例如，基于纳米技术的生物传感器，能够实现对ATP2C1基因突变的快速、高灵敏度检测；数字PCR技术可以对低丰度的基因突变进行精确检测，为疾病的早期诊断和病情监测提供有力支持。此外，加强国际合作和多中心研究也是未来的重要方向。通过整合全球范围内的研究资源，扩大样本量，涵盖更多地区和种族的患者，全面深入地研究ATP2C1基因突变的类型、分布规律以及与临床表型的关系。多中心研究还可以促进不同研究团队之间的交流与合作，共享研究成果和经验，加速科研进展，为家族性慢性良性天疱疮的防治提供更坚实的理论基础和实践指导。参考文献[1]HaileyH,HaileyH.Familialbenignchronicpemphigus[J].ArchDermatolSyphilol,1939,39(1):1-30.[2]RichardG,BaleSJ,ComptonJG,etal.Hailey-Haileydiseasemapstoa5cMintervalonchromosome3q21-q24[J].JInvestDermatol,1997,108(3):357-360.[3]HuZ,BonifasJM,BeechJ,etal.MutationsinATP2C1,encodingacalciumpump,causeHailey-Haileydisease[J].NatGenet,2000,24(1):61-65.[4]SudbrakR,BrownJ,Dobson-StoneC,etal.Hailey-HaileydiseaseiscausedbymutationsinATP2C1encodinganovelCa2+pump[J].HumMolGenet,2000,9(8):1131-1140.[5]朱学骏，李航，孙秀坤，等。慢性家族性良性天疱疮的基因突变[J].中华皮肤科杂志，2003,36(7):390-393.[6]ChaoSC,TsaiYM,YangMH,etal.MutationanalysisofATP2C1geneinTaiwanesepatientswithHailey-Haileydisease[J].BrJDermatol,2002,146(4):595-600.[7]IkedaS,MayuzumiN,OgawaH,etal.MutationofATP2C1inJapanesepatientswithHailey-Haileydisease:intrafamilialandinterfamilialphenotypevariationsandlackofcorrelationwithmutationpatterns[J].JInvestDermatol,2001,117(6):1654-1656.[8]MajoreS,BiolcatiG,BarboniL,etal.ATP2C1genemutationanalysisinItalianpatientswithHailey-Haileydisease[J].JInvestDermatol,2005,125(5):933-935.[9]田洪青，颜潇潇，刘华绪，等。家族性良性慢性天疱疮6种新的ATP2C1基因突变[J].中国皮肤性病学杂志，2010,24(6):501-503.[10]颜潇潇，田洪青，于永翔，等。家族性良性天疱疮ATP2C1基因突变研究[J].中华皮肤科杂志，2010,43(6):393-395.[11]罗素菊，李晓莉，刘原君，等。家族性良性天疱疮患者ATP2C1基因突变研究[J].中华皮肤科杂志，2012,45(1):16-18.[12]徐哲，张立新，李丽，等。一婴儿期发病的慢性家族性良性天疱疮家系ATP2C1基因突变研究[J].中华皮肤科杂志，2010,43(4):266-268.[13]李晓莉，彭振辉，肖生祥，等。慢性家族性良性天疱疮患者的ATP2C1基因突变检测[J].中华医学遗传学杂志，2008,25(1):63-65.[14]李航，孙秀坤，卜定方，等.11例慢性家族性良性天疱疮患者的基因突变[J].北京大学学报(医学版),2003,35(4):390-393.[15]Ames-VaraM,ZollingerTW,SaturNM,etal.Familialbenignchronicpemphigus(Hailey-Haileydisease)[J].AustralasianJournalofDermatology,2003,44(2):114-118.[16]DessiniotiC,AntoniouC,KatsambasAD,etal.Agingandskin:whatdothegenessay?[J].ExperimentalDermatology,2009,18(3):239-242.[17]BickersDR.Atopicdermatitisandpsoriasis[J].JournaloftheAmericanMedicalAssociation,1988,259(21):3145-3145.[18]DuvalJ,VignesS,NiaudetP,etal.AgeneticvariantoftheCa2+release-activatedCa2+channelgeneCRACM1isassociatedwithsusceptibilityforfamilialformsofchroniclymphocyticleukemia[J].CancerResearch,2009,69(12):5228-5235.[19]KakinumaT,IchikiK,FunakoshiA,etal.Thecalcineurin-dependentsignalingpathwayinkeratinocytesanditspossibleroleinthepathogenesisofpsoriasis[J].JournalofInvestigativeDermatology,2004,123(6):1003-1011.[2]RichardG,BaleSJ,ComptonJG,etal.Hailey-Haileydiseasemapstoa5cMintervalonchromosome3q21-q24[J].JInvestDermatol,1997,108(3):357-360.[3]HuZ,BonifasJM,BeechJ,etal.MutationsinATP2C1,encodingacalciumpump,causeHailey-Haileydisease[J].NatGenet,2000,24(1):61-65.[4]SudbrakR,BrownJ,Dobson-StoneC,etal.Hailey-HaileydiseaseiscausedbymutationsinATP2C1encodinganovelCa2+pump[J].HumMolGenet,2000,9(8):1131-1140.[5]朱学骏，李航，孙秀坤，等。慢性家族性良性天疱疮的基因突变[J].中华皮肤科杂志，2003,36(7):390-393.[6]ChaoSC,TsaiYM,YangMH,etal.MutationanalysisofATP2C1geneinTaiwanesepatientswithHailey-Haileydisease[J].BrJDermatol,2002,146(4):595-600.[7]IkedaS,MayuzumiN,OgawaH,etal.MutationofATP2C1inJapanesepatientswithHailey-Haileydisease:intrafamilialandinterfamilialphenotypevariationsandlackofcorrelationwithmutationpatterns[J].JInvestDermatol,2001,117(6):1654-1656.[8]MajoreS,BiolcatiG,BarboniL,etal.ATP2C1genemutationanalysisinItalianpatie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