CN114478456A 一种大麻黄酮类化合物的制备方法 （德义制药有限公司）

(19)国家知识产权局盛达月星商业中心1-2幢2幢单元9层王曙宾张平平蓝蓝所(特殊普通合伙)11690本发明公开了一种大麻黄酮类化合物的制酯(DEC)在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲叶醇反应得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚；最后将4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚在高温下缩合生成大麻黄酮A和/或大麻黄酮C,2反应得到大麻黄酮类化合物；所述大麻黄酮类化合物的结构为通式I:烷氧基、羧基、氨基、卤素；烷氧基、羧基、卤素；优选地，R₂为羟基；优选地，R4为羟基；优选地，R₇为羟基；优选地，R₆为甲氧基；优选地，R₃2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：将和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到33.根据权利要求1-2任一项所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：步骤(1):将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；步骤(2):将1,3,5-三羟基苯和香叶醇发生C烷基化反应得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚；步骤(3):将4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚在高温下缩合生成大麻黄酮A和/或大麻黄酮C。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)无氧的环境为惰性气体保护的反应环境；所述碱为无机碱；所述无机碱与4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为50-1000g/mol;所述4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯的摩尔比为1:3-3:1;6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)包括如下步骤：在惰性气体保护下，向反应容器中加入NaH和甲苯，搅拌，再加入碳酸二乙酯，加热，滴加4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与甲苯的混合液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；所述后处理包括淬灭步骤；所述淬灭包括：向反应容器中加入酸调整混合液pH=4.0-7.0;所述酸为无机酸，选自：醋酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种的混合物。7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括1,3,5-三羟基苯和8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中的无氧的环境为惰性4气体保护的反应环境，进一步地，惰性气体为氮气；所述1,3,5-三羟基苯与香叶醇的摩尔比为1:3-3:1;所述反应温度为0-25℃;所述反应时间为8-24h;所述反应还需滴加三氟化硼的乙醚溶液。9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)包括如下步骤：向反应容器中加入硝酸银饱和的乙腈，再加入1,3,5-三羟基苯和香叶醇，惰性气体保护下，降温，滴加三氟化硼的乙醚溶液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚；所述后处理包括淬灭步骤；所述淬灭包括如下步骤：向反应容器中加入淬灭溶剂；所述淬灭溶剂选自：冰水混合物、甲基叔丁基醚、乙醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯中的一种或多种。10.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚反应的步骤，所述反应是在无氧的环境下进行的。11.根据权利要求10所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)无氧的环境为惰性气体保护的反应环境；所述反应温度为150-230℃;所述反应时间为2-8h;所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的摩尔比为1:3-3:1。12.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)包括如下步骤：在惰性气体保护下，向反应容器中加入4’-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚，搅拌，加热，反应，然后将反应液经后处理得到大麻黄酮A和/或大麻黄酮C。13.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；向反应容器中加入硝酸银饱和的乙腈，再加入1,3,5-三羟基苯和香叶醇，惰性气体保护下，降温，滴加三氟化硼的乙醚溶液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚；在惰性气体保护下，向反应容器中加入4’-羟基-3’-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚，搅拌，加热，反应，然后将反应液经后处理得到大麻黄酮A和/或大麻黄酮C。14.一种4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯在制备化合物中的应用，其特征在于，所述的化合物为大麻黄酮类化合物；优选地，所述大麻黄酮类化合物为大麻黄酮A和/或大麻5技术领域[0001]本发明属于化学合成领域，具体涉及一种大麻黄酮类化合物的制备方法，特别是大麻黄酮A和/或大麻黄酮C的制备方法。背景技术[0002]200多种大麻生物活性化合物中，大麻素和萜烯一直是最受关注的，但是大麻还产生了另一种重要化合物——大麻黄酮类化合物，它们约占这些已知化合物的10%,其中约有20种已知存在于大麻中，这些类黄酮没有精神活性。[0003]大麻黄酮A早在1985年就已经被研究证实具有抗炎作用，大麻黄素C在2008年才被发现。与其他止痛药相比，大麻黄酮A和大麻黄酮C不会让患者对药物产生依赖性，发生上瘾的风险。[0004]大麻黄酮A和大麻黄酮C的黄酮骨架和骨架上的香叶基能够提高分子的亲脂性，从而增强细胞对分子的摄取以及分子在生物体内的积累，并且能够促进分子与细胞的相互作[0005]Moreau等在FlavonoidDerivativeofCannabisDemonstratesPotentialinPreclinicalModelsofMetastaticPancreaticCancer.([J].Front.Oncol,2019,9:660)报道了研究人员使用色谱法，从牙买加一种地方性大麻(CannabisSativaL.)菌株中提取大麻黄酮A和大麻黄酮C以及其他黄酮类化合物。研究人员先后对提取物进行了体外实验和体内实验。体内实验结果显示，在使用智能放射治疗生物材料持续提供的大麻黄酮类化合物时，在胰腺癌动物模型中延迟局部和转移性肿瘤进展的治疗效果。与对照组相比，反复试验也显示胰腺癌动物的存活率显著增加。研究结果表明，大麻黄酮A和大麻黄酮C在胰腺癌治疗中具有重要的治疗潜力，包括放射增敏和肿瘤转移治疗潜力。这些结果为进一步研究优化临床实验的治疗结果提供了依据。大麻植物中的类黄酮含量远小于1%,平均小于0.14%,大麻中的大麻黄酮A和大麻黄酮C的含量是极低的。因此，单纯依靠大麻植物提取来获取这些成分是不可行的。研究人员目前正在基于生物系统致力于制备这些活性因子，这将为大麻黄酮创造了大量的机会。sativaL.([J].Cellular&MolecularLifeSciences,1986,452-453)报道了从大麻的乙醇提取物中分离得到大麻黄酮A,但是大麻黄酮A的收率极低。[0007]Rea等在BiosynthesisofcannflavinsA([J].Phytochemistry,2019,134,162-171)报道了通过使用苜蓿中华根瘤菌的芳香异戊二烯基转移酶催化二甲基烯丙基二磷酸，合成大麻黄酮A。但是该生物合成的方法成本高且不易工业放大。[0008]专利文献WO2017091837公开了一种以2,4,6-三羟基苯乙酮为起始反应物，使用化学合成已知的技术进行合成，得到大麻黄酮类化合物的主链，再经过共轭闭环形成三环结构，最后进行一系列酶促修饰得到大麻黄酮A和大麻黄酮C以及其他黄酮类化合物。CN114478456A说明书2/9页6[0009]已经公开的化学合成方法存在合成步骤长、多步反应需要硅胶柱层析纯化、不易放大的缺点。因此，当务之急，非常有必要开发一种简便的、快速的、易于放大的合成大麻黄酮A和大麻黄酮C的新方法。得、反应步骤少、生产周期短、操作简便等优点。备方法包括：[0015]所述大麻黄酮类化合物的结构为通式I:[0020]在本发明的一个实施例中，R₃为香叶基。[0021]在本发明的一个实施例中，R₁为香叶基。[0023]在本发明的一个实施例中，R4为羟基。[0024]在本发明的一个实施例中，R₇为羟基。[0025]在本发明的一个实施例中，R₆为甲氧基。7[0030]将和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到[0032]将反应得到大麻黄酮类化合物；[0033]所述大麻黄酮类化合物的结构为通式Ⅱ:叶基。[0038]本发明的目的还在于提供一种以1,3,5-三羟基苯和4’-羟基-3'-甲氧基苯乙酮为起始原料制备大麻黄酮A和/或大麻黄酮C的方法，所述方法包括：[0039]步骤(1):将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯；[0040]步骤(2):将1,3,5-三羟基苯和香叶醇发生C烷基化反应得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚；[0041]步骤(3):将4’-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚在高温下缩合生成大麻黄酮A和/或大麻黄酮C。[0042]步骤(2)反应方程如下：8气或氩气；所述反应体系中还包括溶剂，所述溶剂为乙腈和/或乙醚；在本发明的一个实施[0045]优选地，所述步骤(2)中，1,3,5-三羟基苯与香叶醇的摩尔比为1:3-3:1,进一步[0046]优选地，所述步骤(2)中，反应温度为0-25℃,进一步地，反应温度为0℃、5℃、10[0047]优选地，所述步骤(2)中，反应时间为8-24h,进一步地，反应时间为8h、12h、16h、[0048]优选地，所述步骤(2)中，所述反应还需滴加三氟化硼的乙醚溶液。[0049]在本发明的一个实施例中，所述步骤(2)包括如下具体步骤：向反应容器中加入硝酸银饱和的乙腈，再加入1,3,5-三羟基苯和香叶醇，惰性气体保护下，降温，滴加三氟化硼的乙醚溶液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚。丁酯中的一种或多种；在本发明的一个实施例中，所述淬灭溶剂为冰水混合物。[0053]优选地，所述后处理在淬灭步骤后还包括萃取步骤。或多种；在本发明的一个实施例中，所述萃取溶剂为乙酸乙酯。[0055]更优选地，所述萃取的温度为5-40℃,进一步优选为15-25℃,进一步地，萃取的温[0056]在本发明的一个实施例中，所述萃取步骤包括如下具体步骤：向反应液中加入萃[0057]优选地，所述后处理在萃取步骤后还包括蒸馏步骤；更优选地，所述蒸馏步骤包括常压蒸馏和减压蒸馏步骤。[0058]优选地，所述减压蒸馏温度为20-50℃,真空度为-0.1～-0.05MPa。[0059]优选地，所述后处理在蒸馏步骤后还依次包括柱层析步骤；更优选地，所述柱层析步骤包括正相柱层析和反相柱层析。[0060]更优选地，所述柱层析为正相柱层析，所述柱层析中的洗脱剂溶液选自：石油醚、剂溶液为石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA),洗脱剂的配比为PE:EA=8:1→4:1→2:1。各步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0062]在本发明的一个具体实施例中，所述(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的制备方法包括如下步骤：[0063](2-1)反应步骤：向反应容器中加入硝酸银饱和的乙腈，再加入1,3,5-三羟基苯和9[0064](2-2)控制步骤：向(2-1)的混合液中加入冰水混合物，分层；水层加乙酸乙酯萃液浓缩；[0065](2-3)将步骤(2-2)的浓缩物经柱层析(硅胶200-300目，PE:EA=8:1→4:1→2:1)分离，得到(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚。[0066]步骤(3)反应方程式如下：体保护的反应环境；在本发明的一个实施例中，所述反应环境为氮气保护的反应环境。[0069]优选地，所述步骤(3)中，反应发明的一个实施例中，所述反应时间为3h。基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的摩尔比为1:3-3:1,进一步地，4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯与(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的摩尔比为1:3、[0072]在本发明的一个实施例中，所述步骤(3)包括如下具体步骤：在惰性气体保护下，向反应容器中加入4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二麻黄酮C。[0073]优选地，所述后处理包括柱层析步骤；更优选地，所述柱层析步骤包括正相柱层析和反相柱层析。[0074]更优选地，所述柱层析步骤包括：将混合液经过多次正相硅胶反相硅胶柱层析。石油醚和乙酸乙酯，洗脱剂的配比为PE:EA=10:1→2:1,所述反相硅胶柱层析的洗脱剂溶液为水和甲醇，洗脱剂的配比为水：甲醇=50:50→10:90。[0076]优选地，所述后处理在柱层析步骤后还包括重结晶步骤；更优选地，所述的重结晶步骤包括溶解和降温析出步骤。[0077]更优选地，所述溶解的溶剂选自：甲苯、甲醇、丙酮、水等中的一种或多种的混合[0078]更优选地，所述溶解的温度为40-100℃;进一步优选为60-100℃;在本发明中的一[0079]更优选地，所述降温析出步骤包括降温至1-30℃;在本发明的一个实施例中，所述降温析出步骤包括降温至18-22℃。[0080]在本发明的一个实施例中，所述重结晶步骤包括：加入溶剂，升温至40-100℃,固[0081]优选地，所述后处理在重结晶步骤后还包括干燥步骤。[0082]更优选地，所述干燥步骤为真空干燥；进一步优选地，其真空度为-0.08～-[0083]更优选地，所述干燥温度为45-65℃。各步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0085]在本发明的一个具体实施例中，所述大麻黄酮A和/或大麻黄酮C的制备方法中，包括如下步骤：[0086](3-1)反应步骤：在氮气保护下，向反应容器中加入向反应容器中加入4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯和(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚，搅拌，加热至150-230℃,反应2-8h;[0087](3-2)降至室温，混合液经过多次正相硅胶柱层析，再经过多次反相硅胶柱层析，产物蒸干；[0088](3-3)向步骤(3-2)所得蒸干物加入甲醇，升温至65℃,固体全部溶解，降温至18-[0089](3-4)将步骤(3-3)所得滤饼在50-55℃下真空干燥。[0090]优选地，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯由如下步骤制备：将4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮和碳酸二乙酯在碱性条件下缩合得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙[0091]步骤(1)反应方程式如下：[0093]优选地，所述步骤(1)中，所述反应在为反应体系中包括碱，如无机碱，所述无机碱选自：氢化钠的无机碱纯品或石蜡油包裹的氢化钠中的一种或多种的混合物；在本发明的一个实施例中，所述无机碱为石蜡油包裹的氢化钠。[0094]更优选地，所述碱与4’-羟基-3'-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为50-1000g/mol,进一步优选为100-150g/mol,进一步地，碱与4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮的质量摩尔比为本发明的一个实施例中，所述溶剂为甲苯。[0096]优选地，所述步骤(1)中，4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与碳酸二乙酯的摩尔比为1:3:1,最优选为1:2。11体保护的反应环境；在本发明的一个实施例中，所述反应环境为氮气保护的反应环境。12h,最优选为4h。[0100]优选地，所述步骤(1)中，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮是滴加到碳酸二乙酯中[0101]在本发明的一个实施例中，所述制备方法包括如下具体步骤应容器中加入60%NaH和甲苯，搅拌，再加入碳酸二乙酯，加热，滴加4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与甲苯的混合液，搅拌，反应，然后将反应液经后处理得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯。[0104]更优选地，所述酸为无机酸，选自：醋酸的无机酸纯品或其水溶液中的一种或多种[0105]优选地，所述后处理在淬灭步骤后还包括萃取步骤。或多种；在本发明的一个实施例中，所述萃取溶剂为乙酸乙酯。[0107]更优选地，所述萃取的温度为5-40℃,进一步优选为15-25℃。[0108]在本发明的一个实施例中，所述萃取步骤包括如下具体步骤：向反应液中加入萃[0109]优选地，所述后处理在萃取步骤后还包括蒸馏步骤；更优选地，所述蒸馏步骤包括常压蒸馏和减压蒸馏步骤。[0110]优选地，所述减压蒸馏温度为20-50℃,真空度为-0.1～-0.05MPa。[0111]优选地，所述后处理在蒸馏步骤后还依次包括洗涤；更优选地，所述洗涤溶剂选步骤的具体操作和条件如本发明上述。[0113]在本发明的一个具体实施例中，所述4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯的制备方法包括如下步骤：[0114](1-1)反应步骤：在氮气保护下，向反应容器中加入60%NaH和甲苯，搅拌，再加入碳酸二乙酯，加热至80-130℃,滴加4'-羟基-3'-甲氧基苯乙酮与甲苯的混合液，搅拌，反应[0115](1-2)控制步骤：向(1-1)的混合液中加入醋酸调节pH=4.0-7.0,再加入乙酸乙[0116](1-3)将步骤(1-2)的浓缩物加入正己烷，搅拌2-12h,过滤得到4'-羟基-3'-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯。[0117]本发明还提供一种大麻黄酮类化合物的制备方法，其包含本发明上述(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的制备步骤。[0118]本发明还提供了一种4’-羟基-3’-甲氧基苯甲酰乙酸乙酯在制备化合物中的应用，所述的化合物为大麻黄酮A和/或大麻黄酮C。[0119]本发明中采用的原料价廉易得，合成路线简单，操作简便，生产周期短，合成成本具体实施方式[0120]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。[0123]反应瓶中加入60%NaH(6.00g,150mmol),氮气保护下，加入甲苯(60mL)和DEC苯(60mL)溶液。加完后回流4小时。降至室温，用醋酸调节pH值为中性，加入饱液(150mL),水相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相依次用饱和氯化铵水溶液(100mL[0124]实施例2、(E)-2-(3,7-二甲基辛-2,6-二烯-1-基)苯-1,3,5-三酚的合成[0126]反应瓶中加入50mL用硝酸银饱和的乙腈，搅拌。加入1,3,5-三羟基苯(3.33g,26.41mmol)和香叶醇(Geraniol,4.08g,26.45mmol)。氮气保护下，冰水浴降温，滴加三氟化硼的乙醚溶液(1.23g,8.85mmol)。加毕，室温搅拌过夜。将反应液倾入50mL冰水混合物中，用乙酸乙酯(30mL×3)萃取