检验科生化检验常用方法手册

演讲人：日期:检验科生化检验常用方法手册目录CATALOGUE01概述部分02常用检验方法03样品处理规范04仪器操作指南05结果解读与报告06质量控制措施PART01概述部分生化检验基本概念010203定义与范畴生化检验是通过检测体液（如血液、尿液）中的化学成分（如酶、代谢物、电解质等），评估机体生理功能或病理状态的实验室技术，涵盖肝功能、肾功能、血糖、血脂等核心指标。技术原理主要基于分光光度法、电化学法、免疫比浊法等，通过化学反应产生的光信号或电信号定量分析目标物质浓度，需严格校准仪器和质控流程以保证准确性。临床意义为疾病诊断（如糖尿病、肝炎）、疗效监测（如化疗后肝功能）及健康筛查（如高脂血症）提供客观依据，是临床决策的重要支持工具。常用检验项目分类包括血糖、糖化血红蛋白（HbA1c）、尿酸等，用于评估糖代谢异常、痛风等疾病风险，需注意空腹与非空腹采血的差异对结果的影响。代谢类项目如ALT、AST（肝功能）、肌酐、尿素氮（肾功能），反映肝细胞损伤或肾小球滤过率，需结合影像学和其他检验综合判断。总胆固醇、低密度脂蛋白（LDL）、白蛋白等，用于心血管风险评估或营养状态评价，需关注采样前饮食禁忌。器官功能类项目血钾、血钠、甲状腺激素（T3/T4/TSH）等，平衡紊乱可危及生命（如高钾血症），需快速检测并干预。电解质与激素类01020403血脂与蛋白类2014手册使用指南04010203项目检索方法按字母索引或疾病系统分类快速定位检验项目，附录提供中英文对照及参考值范围，便于跨科室协作时查阅。标本采集规范详细列出不同项目对采血管类型（如血清分离管、肝素抗凝管）、采集时间（如晨起空腹）及保存条件（如避光、低温）的要求，避免预处理误差。结果解读要点标注常见异常结果的临床关联（如AST/ALT比值对肝病分型的提示），并附典型病例分析，辅助非检验科医师理解数据。质控与故障处理提供室内质控操作步骤、常见仪器报警原因（如试剂耗尽、光源衰减）及应急解决方案，确保检验流程稳定性。PART02常用检验方法光谱分析法原理紫外-可见分光光度法荧光光谱法原子吸收光谱法基于物质对紫外或可见光的吸收特性，通过测量吸光度定量分析目标物浓度，适用于蛋白质、核酸等生物大分子检测，具有操作简便、成本低的优势。利用基态原子对特定波长光的吸收特性，测定金属元素（如钙、镁、铁）含量，灵敏度高且抗干扰能力强，常用于电解质和微量元素检测。通过测量物质受激发后发射的荧光强度进行定量，适用于痕量物质（如维生素、激素）分析，灵敏度可达纳克级，但易受环境因素干扰。利用固定相与流动相的分配差异分离复杂样本，广泛应用于血药浓度监测（如抗生素、抗癫痫药）、氨基酸分析及代谢产物检测，分离效率高且重现性好。色谱分析法应用高效液相色谱（HPLC）适用于挥发性物质（如乙醇、有机酸）的分离检测，需配合衍生化处理非挥发性组分，在毒理学筛查和脂肪酸分析中具有不可替代的作用。气相色谱（GC）通过电荷相互作用分离离子化合物（如尿液中的阴离子、阳离子），常用于电解质紊乱诊断，需严格控制流动相pH和离子强度以优化分离效果。离子交换色谱免疫分析法步骤03放射免疫分析（RIA）使用放射性同位素标记抗原竞争结合抗体，经离心分离后测定放射性强度，虽逐渐被替代，但仍为某些小分子物质（如T3、T4）的金标准方法，需严格防护辐射风险。02化学发光免疫分析（CLIA）将抗原抗体反应与化学发光信号结合，通过光电倍增管检测光强度，用于心肌标志物（肌钙蛋白、BNP）等高灵敏度项目，动态范围宽且自动化程度高。01酶联免疫吸附试验（ELISA）包被抗体→样本孵育→酶标二抗结合→底物显色→终止反应并测吸光度，适用于激素（如HCG、胰岛素）和肿瘤标志物检测，需注意钩状效应导致的假阴性。PART03样品处理规范样品采集标准无菌操作原则采集血液、体液等样品时需严格遵循无菌操作规范，使用一次性采血管或容器，避免交叉污染或微生物感染风险。抗凝剂选择根据检测项目需求选择合适抗凝剂（如肝素、EDTA、枸橼酸钠等），确保样品不发生凝固或成分改变，影响检测结果准确性。采集时间与状态需明确样品采集时患者状态（空腹、运动后等），部分项目对采集时间敏感，如激素类检测需固定时间点采样以符合生理节律。标识与记录样品容器需清晰标注患者信息、采集时间及检测项目，同步记录患者用药史、特殊生理状态等关键信息。样品预处理流程离心分离血液样品需在规定转速与时间内离心，分离血清或血浆，避免溶血或纤维蛋白残留干扰检测；离心后需及时转移上清液至备用管。去杂质处理对含脂血或浑浊样品需采用高速离心、过滤或化学沉淀法去除干扰物，确保光学检测类项目的透光率符合要求。分装与稀释根据检测需求对样品进行分装保存，高浓度样品需按比例稀释（如酶类检测），避免超出仪器线性范围。稳定性验证对易降解物质（如乳酸、氨等）需立即检测或加入稳定剂（氟化钠、冰浴等），延缓代谢反应。保存与运输要求4生物安全防护3时效性要求2避光与密封1温度控制传染性样品需双层包装并标注生物危害标识，符合《病原微生物运输管理条例》的防护与申报要求。光敏感物质（如胆红素、维生素B12）需用棕色管避光保存；挥发性样品（如乙醇）需严格密封防止蒸发损失。不稳定检测项目（如血气分析）需在采样后规定时间内完成检测，延迟运输需注明并评估数据有效性。不同样品需按特性保存（如4℃冷藏用于常规生化项目，-20℃/-80℃冷冻用于酶类或代谢物长期保存），运输过程需使用专用冷链箱维持恒温。PART04仪器操作指南生化分析仪操作开机与系统校准按照标准流程启动仪器，完成光学校准、温度校准及试剂空白检测，确保仪器处于最佳工作状态。需定期验证校准曲线，避免因环境变化导致检测偏差。样本加载与参数设置根据检测项目选择对应的试剂盒和样本架，输入样本编号及检测项目代码。注意避免交叉污染，高浓度样本需稀释后复测。质控程序执行每批次检测前运行质控品，记录Levey-Jennings质控图数据，若出现失控需排查试剂、仪器或操作问题，确保结果可靠性。离心机操作规范定期校准移液器容量，使用匹配的吸头并预润洗，避免液体残留影响加样准确性。微量移液时需垂直操作以减少误差。移液器精度验证恒温水浴箱维护保持水温恒定于设定值（如37℃），每日记录温度波动范围，及时更换蒸发损耗的水量以确保孵育条件稳定。根据样本类型设置转速与时间（如血清分离需3000rpm/10分钟），平衡对称放置样本管，避免离心不均导致溶血或分层不彻底。辅助设备使用日常维护要点光学系统清洁每周用无尘棉签擦拭比色杯和光源窗口，避免灰尘或结晶影响吸光度读数。发现划痕或老化需立即更换部件。环境监控维持实验室温度（20-25℃）与湿度（40-60%），避免极端条件影响仪器性能。电源需配备稳压器以防电压波动损坏电路。管道与探针保养每日执行自动冲洗程序，防止蛋白沉积或结晶堵塞；每月手动拆卸探针，使用专用清洗液浸泡去除残留物。PART05结果解读与报告数据解读方法结合患者历史检测数据，观察指标变化趋势，判断病情进展或治疗效果，避免孤立解读单次结果。动态变化趋势分析多指标关联性评估干扰因素排除将检测结果与实验室提供的参考值范围进行比对，分析是否在正常区间内，需考虑年龄、性别等因素对参考值的影响。综合分析同一标本中多项生化指标的相关性（如肝功能中的ALT与AST、肾功能中的BUN与Cr），识别潜在病理模式。评估溶血、脂血、黄疸等标本质量因素对检测结果的干扰，必要时重新采样或采用校正方法。参考值范围对比异常结果处理复核检测流程对异常结果（如极端高值或低值）进行仪器复核、手工复测或更换检测方法验证，排除操作误差或仪器故障。记录与溯源详细记录异常结果的复核过程、处理措施及最终结论，保存原始数据以备后续追溯。临床沟通与确认联系临床医生了解患者用药史、病史及采样条件，确认结果是否符合临床表现，避免误判。危急值报告机制对危及生命的指标（如血钾>6.5mmol/L）立即启动危急值报告流程，确保临床及时干预。报告需包含患者信息、检测项目、结果数值、单位、参考范围及异常标记，统一字体和排版以提升可读性。对异常结果附加简明注释（如“↑”或“↓”符号），必要时提供进一步检查或复测建议。报告需经授权人员审核并附电子签名，确保结果的法律效力和责任可追溯。支持纸质报告、PDF电子版及LIS系统数据对接，满足不同临床场景的查阅需求。报告格式规范标准化模板设计结果注释与建议电子签名与审核多平台兼容输出PART06质量控制措施室内质控实施质控品选择与频率根据检测项目特性选择合适浓度范围的质控品，每日至少运行两次质控，确保检测系统稳定性。质控品应覆盖医学决定水平，并模拟临床样本特性。质控规则设定采用Westgard多规则（如1-2s、1-3s、2-2s等）判断失控情况，结合Levey-Jennings质控图分析趋势性偏移，及时识别系统误差与随机误差。失控处理流程明确失控后的纠正措施，包括复测质控、检查试剂批号、仪器状态及环境条件，必要时执行校准或维护，并记录根本原因分析报告。样本接收与检测对比同组实验室的靶值和标准差，识别偏移项目，结合室内质控数据排查问题来源，制定改进计划（如优化校准周期或更换试剂品牌）。结果分析与改进文件化与审核保存所有室间质评报告及纠正措施记录，定期由质量主管审核，作为实验室认可的重要依据。严格按照室间质评机构要求处理冻干或液态质控样本，与临床样本同批次检测，避免特殊处理导致结果偏差。检测后及时提交数据，确保时效性。室间质评流程校准与验证标准校准品溯源要求