生物制药纯化技术员岗位招聘考试试卷及答案

生物制药纯化技术员岗位招聘考试试卷及答案填空题（每题1分，共10分）1.衡量层析柱分离效率的核心指标是______2.单克隆抗体纯化常用的亲和层析配基是______3.除菌过滤常用的滤膜孔径为______μm4.缓冲液pH值通常用______调节（酸碱溶液）5.蛋白纯度检测常用方法是______（SDS/HPLC）6.纯化记录需具备______性以确保产品可追溯7.带正电的蛋白会结合到______型离子交换树脂上8.病毒灭活常用方法包括低pH处理和______（溶剂-洗涤剂法）9.收率是目标蛋白总活性与______的比值10.疏水相互作用层析（HIC）常用高盐缓冲液是______（硫酸铵溶液）单项选择题（每题2分，共20分）1.以下属于亲和层析的是？A.ProteinA层析B.DEAE层析C.CM层析D.凝胶过滤层析2.除菌过滤滤膜材质一般不包括？A.PESB.尼龙C.PVDFD.玻璃纤维3.可检测蛋白纯度的方法是？A.紫外280nm（测浓度）B.SDSC.凯氏定氮法D.渗透压测定4.GMP中纯化工艺验证的核心是？A.成本控制B.速度快C.工艺重现性D.设备数量5.阴离子交换树脂的功能基团是？A.季铵基B.羧甲基C.磺酸基D.羟基6.低pH病毒灭活的常用pH范围是？A.2.0-3.0B.3.0-4.0C.4.0-5.0D.5.0-6.07.凝胶过滤中分子量小的蛋白会？A.先流出B.后流出C.同时流出D.不确定8.与缓冲液缓冲能力无关的是？A.缓冲对浓度B.pH与pKa差值C.溶液体积D.温度9.上样量通常不超过层析柱的？A.动态结合载量B.静态结合载量C.10倍柱体积D.任意量10.导致柱效下降的情况是？A.样品过滤充分B.填料压缩过度C.缓冲液pH稳定D.流速合适多项选择题（每题2分，共20分）1.纯化常用层析技术包括？A.亲和层析B.离子交换层析C.凝胶过滤层析D.HIC2.除菌过滤关键要求包括？A.完整性测试B.无菌操作C.0.45μm滤膜D.压力稳定3.蛋白浓度检测方法有？A.BCA法B.SDSC.Bradford法D.紫外280nm法4.GMP对纯化记录的要求是？A.真实B.准确C.完整D.可追溯5.有效病毒灭活方法有？A.低pH处理B.溶剂-洗涤剂法C.纳米过滤D.100℃加热6.缓冲液配制注意事项包括？A.试剂纯度B.准确测pHC.任意溶解顺序D.过滤除菌7.离子交换层析洗脱方式有？A.改变pHB.改变盐浓度C.改变缓冲液类型D.改变流速8.凝胶过滤层析应用包括？A.分子量测定B.脱盐C.去除聚集体D.蛋白浓缩9.纯化工艺验证内容包括？A.重现性B.关键参数范围C.杂质去除D.收率稳定性10.纯化关键控制点（CCP）包括？A.柱效B.缓冲液pHC.滤膜完整性D.病毒灭活条件判断题（每题2分，共20分）1.凝胶过滤中分子量越大的蛋白越先流出。（√）2.ProteinA可纯化所有蛋白。（×）3.0.22μm滤膜可去除所有微生物。（×）4.pH越接近pKa，缓冲能力越强。（√）5.阳离子交换树脂结合带负电蛋白。（×）6.GMP要求纯化每一步都记录。（√）7.HIC高盐结合、低盐洗脱。（√）8.溶剂-洗涤剂法可去除所有病毒。（×）9.柱效越高，分离效果越好。（√）10.HPLC-SEC可检测蛋白聚集体。（√）简答题（每题5分，共20分）1.简述ProteinA亲和层析纯化单抗的原理。答案：ProteinA特异性结合单抗的Fc段。含单抗样品上样后，单抗结合填料，杂蛋白流穿；用低pH缓冲液（如pH3.0-4.0柠檬酸）破坏结合，收集洗脱峰得纯化单抗；最后用高pH缓冲液再生填料。2.简述除菌过滤完整性测试的方法及目的。答案：常用气泡点法、扩散流法。原理：湿润滤膜后施加压力，气泡通过最大孔径的压力与孔径成反比。目的是验证滤膜无破损，确保产品无菌，符合GMP要求，记录结果作为验证依据。3.简述离子交换层析缓冲液pH选择原则。答案：①阴离子交换树脂：pH高于目标蛋白pI（使蛋白带负电）；②阳离子交换树脂：pH低于目标蛋白pI（使蛋白带正电）；③pH在缓冲液有效范围（pKa±1）；④避免蛋白变性的pH范围。4.简述纯化收率的常用计算方法。答案：①活性收率：（纯化后总活性×体积）÷（纯化前总活性×体积）×100%（需活性检测）；②蛋白含量收率：（纯化后总量×体积）÷（纯化前总量×体积）×100%（需浓度检测）。收率需结合纯度、杂质去除综合评价。讨论题（每题5分，共10分）1.如何在保证纯度的前提下提高收率？答案：①优化层析条件：调整上样量（≤动态载量）、洗脱梯度（平缓）；②选高载量填料（如ProteinA）；③精准控制洗脱pH（避免过度/不足）；④样品预处理（过滤/离心除沉淀）；⑤过程监控（实时检测流穿/洗脱峰）；⑥验证关键参数范围（pH、盐浓度）。2.层析柱柱效下降的原因及解决方法？答案：原因：①填料污染（杂质吸附）；②填料压缩（流速快/长期使用）；③缓冲液不当（pH波动/盐浓度高）；④样品未过滤（颗粒堵塞）。解决：①清洗（高盐/去污剂）或再生；②重新装柱；③优化缓冲液；④上样前0.45μm过滤；⑤定期用标准蛋白测柱效。答案汇总填空题1.理论塔板数2.ProteinA3.0.224.HCl/NaOH5.SDS（或HPLC）6.可追溯7.阴离子交换8.溶剂-洗涤剂法9.上样总活性10.硫酸铵溶液单项选择题1.A2.D3.B4.C5.A6.B7.B8.