布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对大鼠脑缺血再灌注损伤的多维度解析与机制探究

布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对大鼠脑缺血再灌注损伤的多维度解析与机制探究一、引言1.1研究背景脑血管病是临床常见病、多发病，是目前公认的死亡率较高的病种之一，也是首位致残因素，其发病率、病死率及致残率呈逐年上升趋势，其中缺血性脑血管病占绝大部分。缺血性脑血管病中，脑缺血后的再灌注损伤危害极大。缺血再灌注损伤指各种原因造成组织血液灌注量减少使细胞发生缺血性损伤，在恢复血液再灌注后，部分细胞功能代谢障碍及结构破坏反而加重的现象。脑缺血再灌注损伤会导致能量耗竭、乳酸堆积、离子稳态遭破坏、神经介质异常释放、一氧化氮和兴奋性氨基酸毒性作用以及氧自由基损伤等一系列病理、生化改变，这些改变相互作用，对脑的损害是多环节的，严重影响患者的预后和生活质量，给家庭和社会带来沉重负担。因此，对脑血管病发病机制的探讨以及如何更好地治疗和康复，一直是医学领域努力探求的问题。上胸段硬膜外阻滞（HighThoracicEpiduralAnesthesia，HTEA）是将局麻药注入上胸段硬膜外间隙，阻滞相应节段的脊神经，从而产生麻醉和镇痛效果。其作用机制主要是通过阻断交感神经节前纤维，调节交感神经系统的活性，进而影响机体的生理功能。研究表明，HTEA在心血管系统疾病的治疗中具有一定作用，如能阻断心交感神经，抑制交感神经的活性，减轻心脏应激反应，降低心脏的耗氧，同时能直接扩张狭窄冠状动脉，有效减轻心肌缺血。在兔蛛网膜下腔出血模型中，预先进行HTEA可减轻脑血管痉挛，改善血流动力学指标，其机制可能与抑制交感神经张力，使支配脑血管的副交感神经相对兴奋有关。然而，HTEA对脑缺血再灌注损伤的影响及具体机制尚未完全明确，仍需进一步深入研究。布比卡因是一种常用的长效酰胺类局部麻醉药，具有强效的麻醉性能和较长的麻醉时间，在临床手术麻醉和疼痛治疗中应用广泛。其药理作用机制是通过阻塞钠离子通道，阻止神经细胞膜电位的变化，从而阻断神经冲动的传递，起到局部麻醉和镇痛的效果。在体内，布比卡因在注射部位吸收迅速，可通过血液循环到达作用部位，广泛分布于各组织器官，但难以透过血脑屏障，主要在肝脏内代谢，代谢产物主要通过尿液排出。在硬膜外阻滞麻醉中，布比卡因能产生区域性的麻醉效果，常用于剖宫产、腹部手术等。由于其对心血管系统有一定的抑制作用，使用时需谨慎。在脑缺血再灌注损伤的研究中，布比卡因用于上胸段硬膜外阻滞的相关研究较少，其对脑缺血再灌注损伤的影响及作用机制有待进一步探索。1.2研究目的与意义本研究旨在通过建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型，探讨布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的影响，并初步分析其可能的作用机制，为临床上防治脑缺血再灌注损伤提供新的思路和理论依据。脑缺血再灌注损伤是一个复杂的病理生理过程，涉及多种细胞和分子机制，目前临床上缺乏有效的治疗手段。上胸段硬膜外阻滞作为一种神经阻滞技术，已在心血管系统疾病的治疗中显示出一定的优势，但其对脑缺血再灌注损伤的作用尚未完全明确。布比卡因是硬膜外阻滞常用的局麻药，研究其在脑缺血再灌注损伤中的作用具有重要的临床价值。本研究的意义在于：一方面，有助于深入了解布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的影响及作用机制，为进一步研究脑缺血再灌注损伤的防治提供新的方向；另一方面，若能证实布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤具有保护作用，将为临床治疗提供一种新的、潜在的治疗方法，有望改善患者的预后，提高患者的生活质量，减轻家庭和社会的负担。二、相关理论基础2.1脑缺血再灌注损伤2.1.1定义与危害脑缺血再灌注损伤是指脑缺血后，当恢复血液再灌注时，脑组织损伤反而加重的病理过程。正常情况下，大脑通过血液循环获得充足的氧气和营养物质，以维持其正常的生理功能。当脑缺血发生时，由于血液供应中断，脑组织无法获得足够的氧气和葡萄糖，导致能量代谢障碍，细胞内的三磷酸腺苷（ATP）迅速耗竭。此时，细胞会启动无氧酵解来产生能量，但这种方式效率低下，会产生大量乳酸，导致细胞内酸中毒。同时，细胞膜上的离子泵功能受损，使得细胞内钙离子、钠离子等大量积聚，而钾离子外流，破坏了细胞的离子平衡，引发细胞水肿。若在一定时间后恢复血液再灌注，原本缺血的脑组织会面临新的挑战。一方面，再灌注带来的大量氧气会在细胞内引发一系列氧化还原反应，产生大量的自由基，如超氧阴离子、羟自由基等。这些自由基具有极强的氧化性，能够攻击细胞膜上的脂质、蛋白质和核酸等生物大分子，导致细胞膜结构和功能受损，细胞内的酶活性改变，遗传物质损伤，从而进一步加重细胞的损伤。另一方面，再灌注还会引发炎症反应，激活免疫细胞，释放大量的炎性介质，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）等。这些炎性介质会导致血管内皮细胞损伤，增加血管通透性，引起脑水肿，同时还会吸引更多的免疫细胞聚集到损伤部位，形成恶性循环，导致神经细胞的死亡和神经功能的障碍。脑缺血再灌注损伤对神经系统的危害是多方面的，严重影响患者的预后。在临床上，患者可能出现意识障碍、认知功能下降、运动障碍、感觉异常等症状，如偏瘫、失语、感觉丧失等。这些症状不仅会给患者的生活带来极大的不便，降低其生活质量，还可能导致患者长期卧床，引发肺部感染、深静脉血栓等并发症，甚至危及生命。此外，脑缺血再灌注损伤还与一些慢性神经系统疾病的发生发展密切相关，如老年痴呆、帕金森病等，给家庭和社会带来沉重的负担。2.1.2发病机制能量代谢障碍：脑缺血时，由于氧和葡萄糖供应不足，细胞的有氧呼吸受阻，ATP生成急剧减少。ATP是细胞维持正常生理功能的重要能量来源，其含量的降低会导致细胞膜上的离子泵，如钠钾ATP酶、钙ATP酶等功能受损。钠钾ATP酶的作用是维持细胞内高钾、细胞外高钠的离子浓度梯度，其功能障碍会使钠离子在细胞内大量积聚，钾离子外流，导致细胞去极化，兴奋性异常增高。同时，细胞内钠离子的增多会伴随水分子的进入，引发细胞水肿。钙ATP酶负责将细胞内的钙离子泵出细胞，维持细胞内低钙的环境。当钙ATP酶功能受损时，细胞内钙离子浓度急剧升高，激活一系列钙依赖性酶，如磷脂酶、蛋白酶、核酸内切酶等，这些酶会对细胞内的生物大分子进行降解，导致细胞结构和功能的破坏。此外，能量代谢障碍还会使细胞内的代谢产物，如乳酸等大量堆积，进一步加重细胞内酸中毒，抑制细胞内酶的活性，影响细胞的正常代谢。自由基损伤：自由基是指外层轨道上含有未配对电子的原子、分子或离子，具有高度的化学活性。在脑缺血再灌注过程中，自由基的产生主要有以下几个途径：一是黄嘌呤氧化酶途径，脑缺血时，细胞内的ATP分解产生次黄嘌呤，同时黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶。再灌注时，大量氧气进入组织，黄嘌呤氧化酶以次黄嘌呤和氧气为底物，产生大量的超氧阴离子。二是线粒体途径，缺血时线粒体呼吸链受损，电子传递异常，再灌注时氧气大量进入，线粒体呼吸链中的电子漏出，与氧气结合生成超氧阴离子。三是中性粒细胞呼吸爆发途径，再灌注时，中性粒细胞被激活，发生呼吸爆发，通过NADPH氧化酶系统产生大量的超氧阴离子。这些超氧阴离子可以进一步转化为羟自由基、过氧化氢等其他活性氧自由基。自由基具有极强的氧化性，能够攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，引发脂质过氧化反应。脂质过氧化产物，如丙二醛等，会破坏细胞膜的结构和功能，导致细胞膜通透性增加，细胞内物质外流。自由基还可以氧化蛋白质，使蛋白质的结构和功能发生改变，导致酶失活、受体功能异常等。此外，自由基还能损伤核酸，引起DNA断裂、基因突变等，影响细胞的遗传信息传递和表达，最终导致细胞死亡。炎症反应：脑缺血再灌注损伤会引发炎症反应，这是机体对损伤的一种防御反应，但过度的炎症反应会加重脑组织的损伤。炎症反应的启动主要是由于缺血再灌注导致血管内皮细胞损伤，内皮细胞释放一些细胞因子，如TNF-α、IL-1β等，这些细胞因子可以激活免疫细胞，如单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。激活的单核细胞和巨噬细胞会迁移到损伤部位，吞噬坏死组织和病原体，同时释放更多的炎性介质，如IL-6、干扰素-γ等，进一步放大炎症反应。中性粒细胞在趋化因子的作用下，也会聚集到损伤部位，通过释放蛋白酶、活性氧等物质，对周围组织造成损伤。此外，炎症反应还会导致血脑屏障的破坏，使血管内的血浆成分和免疫细胞进入脑组织，加重脑水肿和神经细胞的损伤。炎症反应过程中产生的炎性介质还会刺激神经细胞，导致神经递质失衡，进一步影响神经功能。细胞凋亡：细胞凋亡是一种程序性细胞死亡方式，在脑缺血再灌注损伤中发挥着重要作用。细胞凋亡的发生涉及多个信号通路的激活。线粒体途径是细胞凋亡的重要途径之一，脑缺血再灌注时，线粒体受损，膜电位下降，释放细胞色素C到细胞质中。细胞色素C与凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、ATP/dATP结合，形成凋亡小体，激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase），启动细胞凋亡程序。死亡受体途径也是细胞凋亡的重要途径，如肿瘤坏死因子受体（TNFR）家族成员，在配体的刺激下，招募相关的接头蛋白，激活Caspase-8，进而激活下游的Caspase级联反应，导致细胞凋亡。此外，细胞内的氧化应激、钙超载等因素也可以通过激活相关的信号通路，诱导细胞凋亡。细胞凋亡会导致神经细胞的死亡，减少神经元的数量，影响神经功能的恢复。2.2布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞2.2.1布比卡因的特性布比卡因作为一种长效酰胺类局麻药，具有独特的药理特性，在临床麻醉和疼痛治疗中发挥着重要作用。其起效时间通常在5-10分钟左右，与其他局麻药相比，起效相对较慢。这是因为布比卡因的分子结构使其需要一定时间才能与神经细胞膜上的钠离子通道结合，从而阻断神经冲动的传导。然而，其持续时间较长，可达4-8小时，甚至在某些情况下，其作用时间可更长。这种长效的特性使得布比卡因在需要长时间麻醉的手术中具有明显优势，如剖宫产手术、下肢骨科手术等，能够减少麻醉药物的重复使用，降低患者的用药风险。当布比卡因注入体内后，其血浆峰浓度会在一定时间内达到。一般来说，在硬膜外阻滞给药后，血浆峰浓度多在30-60分钟内出现。血浆峰浓度的高低与药物的剂量、注射速度、患者的个体差异等因素密切相关。过高的血浆峰浓度可能会导致药物的不良反应增加，如中枢神经系统毒性和心血管系统毒性。中枢神经系统毒性表现为头晕、耳鸣、嗜睡、惊厥等，严重时可导致昏迷和呼吸抑制。心血管系统毒性则可引起低血压、心动过缓、心律失常，甚至心脏骤停。因此，在使用布比卡因时，需要严格控制药物剂量和注射速度，密切监测患者的生命体征，以确保用药安全。布比卡因的蛋白结合率较高，约为95%。这意味着大部分布比卡因会与血浆蛋白结合，只有少量的游离药物能够发挥药理作用。高蛋白结合率使得布比卡因在体内的分布和代谢相对缓慢，进一步延长了其作用时间。同时，蛋白结合率还会受到患者的生理状态、疾病情况以及其他药物的影响。例如，在低蛋白血症患者中，由于血浆蛋白含量降低，布比卡因的游离药物浓度可能会升高，从而增加药物的毒性风险。此外，布比卡因具有较高的脂溶性，这使其能够迅速穿透神经细胞膜，与钠离子通道结合，发挥麻醉作用。脂溶性高还使得布比卡因在脂肪组织中具有较高的亲和力，容易在脂肪组织中蓄积。在长时间手术或重复给药的情况下，脂肪组织中蓄积的布比卡因可能会逐渐释放，导致药物在体内的作用时间进一步延长，同时也增加了药物不良反应的潜在风险。2.2.2上胸段硬膜外阻滞原理上胸段硬膜外阻滞是一种重要的神经阻滞技术，在临床麻醉和疼痛治疗中应用广泛。其操作方法通常是患者取侧卧位，屈膝低头抱胸，以充分暴露脊柱间隙。在进行穿刺前，需对穿刺部位进行严格的消毒和铺巾，以防止感染。穿刺点一般选择在T1-T5胸椎间隙，可采用直入法或旁正中入路法。直入法是将穿刺针垂直于皮肤，经棘上韧带、棘间韧带和黄韧带进入硬膜外腔；旁正中入路法则是在棘突旁开一定距离进针，避开棘上韧带，经黄韧带进入硬膜外腔。穿刺过程中，需要密切关注患者的反应，当穿刺针突破黄韧带时，会有明显的落空感，此时可通过回抽无脑脊液和注入空气或生理盐水无阻力来确认穿刺针已进入硬膜外腔。确认位置无误后，将硬膜外导管置入硬膜外腔，深度一般为3-5cm，然后固定导管，以便后续给药。其作用原理主要是基于局麻药对脊神经的阻滞作用。当布比卡因注入上胸段硬膜外间隙后，药物会通过扩散作用，渗透到脊神经周围，与神经细胞膜上的钠离子通道结合，阻止钠离子内流，从而阻断神经冲动的传导。脊神经是由感觉神经、运动神经和交感神经等组成，因此，上胸段硬膜外阻滞不仅可以阻断感觉神经，使相应节段的皮肤和深部组织感觉减退或消失，起到镇痛作用，还能阻断运动神经，导致肌肉松弛，便于手术操作。同时，它还能阻断交感神经节前纤维，调节交感神经系统的活性。交感神经系统的过度激活在许多病理生理过程中起着重要作用，如应激反应、心血管系统疾病等。上胸段硬膜外阻滞通过阻断交感神经，能够抑制交感神经的兴奋，降低交感神经对心脏和血管的调节作用，从而产生一系列生理效应。在心血管系统方面，它可以使心率减慢，心肌收缩力减弱，血压降低，减少心脏的耗氧量，改善心肌的氧供平衡，对心肌缺血具有一定的保护作用。在呼吸系统方面，它可以减轻交感神经兴奋对呼吸肌的影响，使呼吸更加平稳，有利于患者的呼吸功能维持。在临床应用中，上胸段硬膜外阻滞具有诸多优势。它可以提供良好的手术麻醉效果，尤其是对于胸部、上腹部手术，能够有效地阻断手术区域的疼痛信号传入，减少全身麻醉药物的用量，降低全身麻醉的并发症风险。同时，对于一些慢性疼痛疾病，如心绞痛、带状疱疹后神经痛等，上胸段硬膜外阻滞也具有显著的治疗效果。通过持续给药，可以长时间缓解疼痛，提高患者的生活质量。此外，上胸段硬膜外阻滞还具有操作相对简单、安全性较高等优点，只要严格掌握适应证和禁忌证，规范操作流程，就能够在临床上安全有效地应用。三、实验设计与方法3.1实验动物与分组本实验选用健康雄性Wistar大鼠40只，体重250-300g，购自[实验动物供应商名称]。大鼠在实验室环境中适应性饲养1周，环境温度保持在（22±2）℃，相对湿度为（50±10）%，昼夜节律为12h光照/12h黑暗，自由饮食和饮水。适应性饲养结束后，将40只大鼠采用随机数字表法随机分为3组：假手术组（Sham组）、缺血再灌注组（I/R组）和布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组（HTEA组），每组各10只。分组依据主要考虑到实验目的是探究布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的影响，假手术组作为正常对照，可排除手术操作本身对实验结果的干扰；缺血再灌注组用于观察单纯脑缺血再灌注损伤的病理生理变化；布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组则是在缺血再灌注的基础上，施加布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞干预，以对比分析该干预措施对脑缺血再灌注损伤的影响。3.2模型制备本实验采用四血管阻断法制作大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，具体步骤如下：术前将大鼠禁食12h，不禁水，以避免高血糖状态对脑损伤的影响，干扰缺血-再灌注模型的建立。称重后，使用10%水合氯醛溶液，按300mg/kg的剂量对大鼠进行腹腔注射麻醉。待大鼠麻醉成功后，将其俯卧位固定于手术台上，用碘伏对手术区域进行消毒，铺无菌巾。在枕骨后做一纵向切口，钝性分离肌肉，暴露枕骨和第一颈椎之间的翼孔，使用眼科镊子小心地将翼孔周围的组织清理干净，充分暴露椎动脉。将电凝针插入双侧翼孔，对椎动脉进行电凝灼烧，以阻断双侧椎动脉血流，形成永久性闭塞。电凝时需特别注意电凝针的入口角度，防止损伤脊髓。电凝完成后，用生理盐水冲洗创口，清除残留的组织碎屑和血液，然后分层缝合肌肉和皮肤，创口涂抹抗生素软膏，防止感染。术后将大鼠放回饲养笼，给予保暖和充足的水分，密切观察其苏醒情况和生命体征。24小时后，再次将大鼠麻醉，仰卧位固定于手术台上，消毒铺巾后，在颈前正中做一纵向切口，钝性分离双侧颈总动脉，小心避免损伤周围的神经和血管。将动脉夹置于双侧颈总动脉旁，暂时不夹闭。连接脑电监测仪，监测大鼠的脑电图，以确认脑缺血的发生。待各项准备工作就绪后，同时夹闭双侧颈总动脉，开始计时，造成全脑缺血。缺血30min后，松开动脉夹，恢复血流灌注，完成脑缺血再灌注损伤模型的制备。在缺血和再灌注过程中，持续监测大鼠的呼吸、心率、血压等生命体征，确保大鼠生命体征平稳。若发现大鼠出现呼吸抑制、心跳骤停等异常情况，应立即进行相应的急救处理。假手术组大鼠仅进行麻醉、暴露椎动脉和颈总动脉的操作，不进行电凝和夹闭，以排除手术操作本身对实验结果的影响。缺血再灌注组和布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组大鼠均按照上述方法制备脑缺血再灌注损伤模型。3.3给药方式布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组（HTEA组）在制备脑缺血再灌注损伤模型前30min进行上胸段硬膜外穿刺置管。穿刺方法同前所述，确定导管位置准确无误后，经硬膜外导管注入0.25%布比卡因，剂量为0.5mg/kg，注射速度为0.1mL/s。注射完毕后，将大鼠固定于手术台上，连接微量注射泵，以0.1mL/h的速度持续泵入0.25%布比卡因，直至实验结束。在整个实验过程中，密切观察大鼠的呼吸、心率、血压等生命体征，确保大鼠生命体征平稳。假手术组和缺血再灌注组大鼠在相同时间点给予等量的生理盐水进行硬膜外注射，注射方式和速度与HTEA组相同，以排除硬膜外穿刺和注射操作对实验结果的影响。3.4检测指标与方法3.4.1神经功能缺损评分在脑缺血再灌注损伤24h后，采用Longa5分制评分标准对大鼠进行神经功能缺损评分。具体评分方法如下：0分表示大鼠无神经损伤症状，活动正常，肢体运动协调，无行为异常；1分代表大鼠不能完全伸展对侧前爪，在行走或站立时，对侧前爪出现屈曲或不能充分伸展的现象，但仍能自主活动；2分是指大鼠向瘫痪侧转圈，行走时身体向瘫痪侧旋转，呈现出明显的运动不对称；3分意味着大鼠向对侧倾倒，在站立或行走时，身体失去平衡，向对侧倾斜，难以维持正常姿势；4分表明大鼠不能自发行走，意识丧失，处于昏迷状态，完全失去自主活动能力。神经功能缺损评分是评估脑缺血再灌注损伤后大鼠神经功能状态的重要指标。通过对大鼠神经行为的细致观察和量化评分，可以直观地反映出脑缺血再灌注对大鼠神经系统造成的损害程度。较高的评分表示神经功能缺损严重，提示脑组织损伤程度较大，神经细胞死亡和功能障碍较为明显；而较低的评分则表明神经功能相对较好，脑组织损伤较轻，神经细胞的存活和功能恢复情况相对乐观。该评分标准具有操作简单、直观可靠的特点，能够为研究布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的影响提供有力的行为学依据。3.4.2脑梗死体积测定脑缺血再灌注损伤24h后，将大鼠断头取脑，迅速去除嗅球、小脑和低位脑干，将剩余脑组织置于-20℃冰箱中速冻20min，使其硬度适宜切片。使用脑切片模具将脑组织切成厚度约为2mm的冠状切片，共切5片。将切好的脑片立即放入2%的2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）溶液中，37℃避光孵育30min。TTC是一种脂溶性光敏感复合物，正常脑组织中的脱氢酶能够将TTC还原为红色的甲臜，而梗死脑组织由于脱氢酶活性下降，无法与TTC发生反应，呈现出苍白色。孵育结束后，用10%的多聚甲醛溶液固定脑片24h。使用图像分析软件对固定后的脑片进行分析，分别测量每片脑片中梗死区（白色区域）和非梗死区（红色区域）的面积。根据公式：脑梗死体积百分比（%）=（梗死区总面积/（梗死区总面积+非梗死区总面积））×100%，计算出脑梗死体积百分比。TTC染色法测定脑梗死体积的原理基于脑组织中脱氢酶活性的变化，能够直观地显示梗死区域，通过图像分析软件的定量分析，可准确计算脑梗死体积。该方法操作相对简便，结果较为可靠，是目前常用的测定脑梗死体积的方法之一，有助于评估布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤后脑组织梗死情况的影响。3.4.3组织形态学观察将固定后的脑组织进行常规脱水、透明、浸蜡和包埋处理，制成石蜡切片，切片厚度为5μm。采用苏木精-伊红（HE）染色法对石蜡切片进行染色，具体步骤如下：将切片脱蜡至水，用苏木精染液染色5min，使细胞核染成蓝色；然后用自来水冲洗，分化液分化30s，以去除多余的苏木精；再用自来水冲洗返蓝5min，使细胞核颜色更加清晰；接着用伊红染液染色3min，使细胞质染成红色；最后依次经梯度酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封片。在光学显微镜下观察HE染色切片，观察内容包括神经元的形态、数量、排列方式，细胞核的形态、大小和染色情况，以及细胞间质的变化等。正常脑组织中，神经元形态完整，细胞核呈圆形或椭圆形，染色质分布均匀，细胞间质清晰。脑缺血再灌注损伤后，可见神经元肿胀、变形，细胞核固缩、深染，细胞排列紊乱，细胞间质水肿。通过对脑组织形态学变化的观察，可以直观地了解脑缺血再灌注损伤对脑组织微观结构的影响，以及布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞是否能够减轻这种损伤，为研究其作用机制提供组织学依据。3.4.4凋亡相关蛋白检测采用免疫组织化学技术检测脑组织中凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达。具体步骤如下：将石蜡切片脱蜡至水，用3%过氧化氢溶液室温孵育10min，以消除内源性过氧化物酶的活性；然后用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，微波加热10min，冷却至室温；滴加正常山羊血清封闭液，室温孵育30min，以减少非特异性染色；倾去封闭液，不洗，滴加一抗（Bcl-2抗体和Bax抗体，稀释度均为1:200），4℃过夜；次日，用PBS冲洗3次，每次5min；滴加生物素标记的二抗，室温孵育30min；再用PBS冲洗3次，每次5min；滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育30min；PBS冲洗3次，每次5min后，用DAB显色液显色，显微镜下观察显色情况，当阳性部位呈现棕黄色时，用自来水冲洗终止显色；苏木精复染细胞核，脱水、透明、封片。在光学显微镜下观察免疫组织化学染色切片，每张切片随机选取5个高倍视野（×400），采用图像分析软件测定阳性产物的平均光密度值，以反映Bcl-2和Bax蛋白的表达水平。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，能够抑制细胞凋亡的发生，其表达水平升高表明细胞凋亡受到抑制；Bax是一种促凋亡蛋白，能够促进细胞凋亡，其表达水平升高表明细胞凋亡增强。通过检测Bcl-2和Bax蛋白的表达，可深入了解布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响，为探讨其神经保护作用机制提供分子生物学依据。也可采用Western-blot法检测凋亡相关蛋白的表达。首先提取脑组织总蛋白，采用BCA蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。将蛋白样品与上样缓冲液混合，煮沸变性5min。然后进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS），将蛋白分离。电泳结束后，将蛋白转移至PVDF膜上，用5%脱脂奶粉封闭液室温封闭2h，以防止非特异性结合。封闭后，加入一抗（Bcl-2抗体、Bax抗体和β-actin抗体，稀释度分别为1:1000、1:1000和1:5000），4℃过夜。次日，用TBST缓冲液冲洗3次，每次10min，加入辣根过氧化物酶标记的二抗（稀释度为1:5000），室温孵育1h。再次用TBST缓冲液冲洗3次，每次10min后，采用化学发光法显色，用凝胶成像系统采集图像，通过分析条带的灰度值，计算目的蛋白与内参蛋白β-actin的灰度比值，以定量分析凋亡相关蛋白的表达水平。该方法能够从蛋白质水平准确地检测凋亡相关蛋白的表达变化，为研究布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的作用机制提供更精确的数据支持。四、实验结果4.1神经功能缺损评分结果脑缺血再灌注损伤24h后，对各组大鼠进行神经功能缺损评分，结果如表1所示。Sham组大鼠神经功能正常，评分为0分，表明假手术操作未对大鼠神经功能造成明显影响。I/R组大鼠神经功能缺损评分显著高于Sham组（P<0.01），平均评分为（3.20±0.42）分，这表明脑缺血再灌注损伤导致大鼠出现了严重的神经功能障碍，大鼠出现了明显的运动不协调、肢体无力、向一侧转圈或倾倒等症状，反映出脑组织在缺血再灌注后受到了较大程度的损伤，神经细胞死亡和功能受损严重。HTEA组大鼠神经功能缺损评分显著低于I/R组（P<0.01），平均评分为（2.10±0.32）分。这表明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够显著改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能，使大鼠的运动障碍和行为异常得到明显缓解。与Sham组相比，HTEA组评分仍有显著差异（P<0.01），说明尽管布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤有保护作用，但仍未能使大鼠神经功能完全恢复正常。综上所述，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够减轻脑缺血再灌注损伤对大鼠神经功能的损害，具有一定的神经保护作用。表1：各组大鼠神经功能缺损评分（x±s，分）组别n神经功能缺损评分Sham组100I/R组103.20±0.42##HTEA组102.10±0.32**##注：与Sham组比较，##P<0.01；与I/R组比较，**P<0.014.2脑梗死体积结果脑缺血再灌注损伤24h后，对各组大鼠脑梗死体积进行测定，结果如表2所示。Sham组大鼠脑组织未见明显梗死灶，脑梗死体积百分比为0%，这表明假手术操作未导致大鼠脑组织发生梗死。I/R组大鼠脑梗死体积百分比显著高于Sham组（P<0.01），达到（38.56±4.23）%，这说明脑缺血再灌注损伤导致大鼠脑组织出现大面积梗死，梗死区域的存在严重影响了脑组织的正常结构和功能，进一步证实了脑缺血再灌注损伤对脑组织的严重破坏作用。HTEA组大鼠脑梗死体积百分比显著低于I/R组（P<0.01），为（25.32±3.15）%。这表明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够显著减少脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死体积，对脑组织起到了一定的保护作用，减少了神经细胞的死亡和梗死范围。与Sham组相比，HTEA组脑梗死体积百分比仍有显著差异（P<0.01），说明尽管布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能减轻脑缺血再灌注损伤，但不能使脑组织完全恢复正常。综上所述，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够减小脑缺血再灌注损伤大鼠的脑梗死体积，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。表2：各组大鼠脑梗死体积百分比（x±s，%）组别n脑梗死体积百分比Sham组100I/R组1038.56±4.23##HTEA组1025.32±3.15**##注：与Sham组比较，##P<0.01；与I/R组比较，**P<0.014.3组织形态学结果Sham组大鼠脑组织HE染色切片显示，神经元形态正常，细胞结构完整，细胞核呈圆形或椭圆形，大小均一，染色质分布均匀，核仁清晰可见。神经元排列紧密且有序，细胞间质清晰，无水肿、炎症细胞浸润及坏死等异常表现，表明假手术组大鼠脑组织未受到明显损伤，维持正常的组织结构和形态。I/R组大鼠脑组织切片则呈现出明显的病理改变。神经元出现肿胀、变形，细胞体积增大，形态不规则，部分神经元的细胞膜破裂，细胞质外溢。细胞核固缩、深染，染色质凝聚成块状，核仁模糊不清，甚至消失。神经元排列紊乱，细胞间隙增宽，间质明显水肿，可见大量炎性细胞浸润，还存在一些坏死灶，这些病理变化表明脑缺血再灌注损伤导致脑组织出现了严重的结构破坏和炎症反应，神经元受损严重，神经功能受到极大影响。HTEA组大鼠脑组织切片的病理改变较I/R组明显减轻。神经元肿胀和变形程度较轻，大部分神经元的细胞膜完整，细胞质均匀，细胞核形态相对正常，染色质分布较均匀，核仁清晰。神经元排列相对有序，细胞间隙轻度增宽，间质水肿程度较轻，炎性细胞浸润明显减少，坏死灶范围也明显缩小。综上所述，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够减轻脑缺血再灌注损伤对大鼠脑组织的形态学损害，对脑组织具有一定的保护作用，从组织学角度进一步证实了其对脑缺血再灌注损伤的保护效应。4.4凋亡相关蛋白表达结果免疫组织化学染色结果显示，Bcl-2蛋白阳性表达产物主要定位于细胞核和细胞质，呈棕黄色颗粒状。Sham组大鼠脑组织中Bcl-2蛋白呈高表达，阳性细胞数量较多，染色较深，平均光密度值为（0.32±0.04）。I/R组大鼠脑组织中Bcl-2蛋白表达显著低于Sham组（P<0.01），阳性细胞数量明显减少，染色变浅，平均光密度值为（0.15±0.03），表明脑缺血再灌注损伤抑制了Bcl-2蛋白的表达，促进了细胞凋亡。HTEA组大鼠脑组织中Bcl-2蛋白表达显著高于I/R组（P<0.01），阳性细胞数量增多，染色加深，平均光密度值为（0.25±0.03），说明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够上调Bcl-2蛋白的表达，抑制细胞凋亡。Bax蛋白阳性表达产物也主要定位于细胞核和细胞质，呈棕黄色颗粒状。Sham组大鼠脑组织中Bax蛋白呈低表达，阳性细胞数量较少，染色较浅，平均光密度值为（0.10±0.02）。I/R组大鼠脑组织中Bax蛋白表达显著高于Sham组（P<0.01），阳性细胞数量明显增多，染色加深，平均光密度值为（0.28±0.04），表明脑缺血再灌注损伤促进了Bax蛋白的表达，诱导了细胞凋亡。HTEA组大鼠脑组织中Bax蛋白表达显著低于I/R组（P<0.01），阳性细胞数量减少，染色变浅，平均光密度值为（0.18±0.03），说明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够下调Bax蛋白的表达，抑制细胞凋亡。通过计算Bax/Bcl-2比值，进一步分析细胞凋亡的情况。I/R组大鼠脑组织中Bax/Bcl-2比值显著高于Sham组（P<0.01），为（1.87±0.32），表明脑缺血再灌注损伤导致细胞凋亡明显增强。HTEA组大鼠脑组织中Bax/Bcl-2比值显著低于I/R组（P<0.01），为（0.72±0.15），说明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够降低Bax/Bcl-2比值，抑制脑缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡。综上所述，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，抑制脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡，对脑组织起到保护作用。五、结果分析与讨论5.1布比卡因对神经功能的保护作用本实验结果显示，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组（HTEA组）大鼠的神经功能缺损评分显著低于缺血再灌注组（I/R组），表明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够有效改善脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能。这一结果与既往一些相关研究结果具有一致性。有研究表明，在脑缺血再灌注损伤模型中，给予一定的干预措施改善脑的血液供应和代谢，能够减轻神经功能缺损。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞可能通过多种机制发挥对神经功能的保护作用。从血流动力学角度来看，上胸段硬膜外阻滞可调节交感神经系统的活性。交感神经系统在脑缺血再灌注损伤中起着重要作用，过度激活的交感神经系统会导致血管收缩，减少脑血流量。布比卡因注入上胸段硬膜外间隙后，阻滞了相应节段的交感神经节前纤维，使交感神经的兴奋性降低，从而扩张脑血管，增加脑血流量。充足的脑血流量能够为脑组织提供足够的氧气和营养物质，维持神经细胞的正常代谢和功能，减少因缺血缺氧导致的神经细胞损伤，进而改善神经功能。在炎症反应方面，脑缺血再灌注损伤会引发炎症级联反应，产生大量炎性介质，如TNF-α、IL-1β等。这些炎性介质会导致血管内皮细胞损伤、血脑屏障破坏、神经细胞凋亡等，加重神经功能障碍。布比卡因可能通过抑制炎症反应来减轻神经损伤。其作用机制可能是布比卡因抑制了炎症细胞的活化和炎性介质的释放，减少了炎症对神经组织的损伤。研究发现，布比卡因能够抑制中性粒细胞的趋化和活化，减少其释放的蛋白酶和活性氧等有害物质，从而减轻炎症对神经细胞的损害。此外，从神经递质角度分析，脑缺血再灌注损伤会导致神经递质失衡，如谷氨酸等兴奋性氨基酸的大量释放。谷氨酸的过度释放会激活N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体，导致钙离子内流，引发神经细胞的兴奋性毒性损伤。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞可能通过调节神经递质的释放和代谢，维持神经递质的平衡，减轻兴奋性氨基酸的神经毒性作用。有研究表明，布比卡因能够抑制谷氨酸的释放，降低细胞外谷氨酸的浓度，从而减少对NMDA受体的激活，保护神经细胞免受兴奋性毒性损伤。5.2对脑梗死体积的影响及原因实验结果表明，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组（HTEA组）大鼠的脑梗死体积显著小于缺血再灌注组（I/R组），这一结果提示布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用，能够有效减小脑梗死体积，减轻脑组织的损伤程度。从血流动力学角度来看，上胸段硬膜外阻滞通过阻断交感神经节前纤维，调节交感神经系统的活性，进而对脑血流产生影响。交感神经系统在脑缺血再灌注损伤中扮演着重要角色，其过度激活会导致血管收缩，脑血流量减少。在脑缺血再灌注过程中，缺血期脑组织由于血流中断，氧气和营养物质供应不足，导致神经细胞代谢紊乱和功能受损。再灌注期，虽然血流恢复，但由于血管痉挛、微循环障碍等原因，脑组织仍可能面临低灌注状态，进一步加重神经细胞的损伤。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够降低交感神经的兴奋性，使脑血管扩张，增加脑血流量。有研究表明，在脑缺血再灌注模型中，采用上胸段硬膜外阻滞可使再灌注期的脑血流量明显增加，改善脑组织的血液供应。充足的脑血流量能够为缺血半暗带的神经细胞提供足够的氧气和营养物质，维持其正常的代谢和功能，减少神经细胞的死亡，从而减小脑梗死体积。炎症反应在脑缺血再灌注损伤后脑梗死体积的变化中也起到关键作用。脑缺血再灌注损伤会引发一系列炎症反应，炎症细胞被激活，释放大量炎性介质，如TNF-α、IL-1β等。这些炎性介质会导致血管内皮细胞损伤，使血管通透性增加，血浆成分渗出，引起脑水肿。同时，炎性介质还会吸引更多的炎症细胞聚集到损伤部位，形成炎症级联反应，进一步加重神经细胞的损伤，扩大梗死面积。布比卡因具有一定的抗炎作用，能够抑制炎症细胞的活化和炎性介质的释放。在相关研究中发现，布比卡因可以抑制中性粒细胞的趋化和活化，减少其释放的蛋白酶和活性氧等有害物质，从而减轻炎症对神经组织的损伤。通过抑制炎症反应，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够减轻脑水肿，减少炎症对神经细胞的破坏，缩小脑梗死体积。此外，细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤后脑组织损伤的重要机制之一，也与脑梗死体积的变化密切相关。脑缺血再灌注损伤会激活细胞凋亡信号通路，导致神经细胞凋亡增加。细胞凋亡会导致神经细胞的死亡，使梗死区域扩大。本实验中，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，抑制细胞凋亡。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，能够抑制细胞凋亡的发生；Bax是一种促凋亡蛋白，能够促进细胞凋亡。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞使Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调，降低了Bax/Bcl-2比值，从而抑制了神经细胞的凋亡，减少了神经细胞的死亡，有助于减小脑梗死体积。5.3对脑组织形态的保护机制从实验的组织形态学结果可以看出，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组（HTEA组）大鼠脑组织切片的病理改变较缺血再灌注组（I/R组）明显减轻，这表明布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑组织形态具有保护作用。其保护机制主要涉及多个方面，与抑制细胞凋亡和减轻炎症反应密切相关。在抑制细胞凋亡方面，细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤后脑组织损伤的重要机制之一。脑缺血再灌注损伤会激活细胞凋亡信号通路，导致神经细胞凋亡增加。细胞凋亡过程中，线粒体发挥着关键作用。脑缺血再灌注时，线粒体受损，膜电位下降，释放细胞色素C到细胞质中。细胞色素C与凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、ATP/dATP结合，形成凋亡小体，激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase），启动细胞凋亡程序。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，从而抑制细胞凋亡。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，能够抑制线粒体释放细胞色素C，阻断凋亡信号通路的激活，从而抑制细胞凋亡的发生。Bax是一种促凋亡蛋白，能够促进线粒体释放细胞色素C，激活凋亡信号通路，促进细胞凋亡。本实验中，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞使Bcl-2蛋白表达上调，Bax蛋白表达下调，降低了Bax/Bcl-2比值，从而抑制了神经细胞的凋亡。这种调节作用使得神经细胞的存活数量增加，减少了细胞凋亡对脑组织形态的破坏，有助于维持脑组织的正常结构和功能。炎症反应也是影响脑组织形态的重要因素。脑缺血再灌注损伤会引发炎症级联反应，炎症细胞被激活，释放大量炎性介质，如TNF-α、IL-1β等。这些炎性介质会导致血管内皮细胞损伤，使血管通透性增加，血浆成分渗出，引起脑水肿。同时，炎性介质还会吸引更多的炎症细胞聚集到损伤部位，形成炎症级联反应，进一步加重神经细胞的损伤，导致脑组织形态的改变，如神经元肿胀、变形，细胞排列紊乱，间质水肿等。布比卡因具有一定的抗炎作用，能够抑制炎症细胞的活化和炎性介质的释放。在相关研究中发现，布比卡因可以抑制中性粒细胞的趋化和活化，减少其释放的蛋白酶和活性氧等有害物质，从而减轻炎症对神经组织的损伤。通过抑制炎症反应，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够减轻脑水肿，减少炎症对神经细胞的破坏，使神经元的形态和排列更加接近正常，细胞间质水肿减轻，从而对脑组织形态起到保护作用。5.4对凋亡相关蛋白表达的调控机制在脑缺血再灌注损伤过程中，细胞凋亡是导致神经细胞死亡和脑组织损伤的重要机制之一，而凋亡相关蛋白在其中发挥着关键的调控作用。本实验结果显示，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够显著调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，从而抑制细胞凋亡，对脑组织起到保护作用。Bcl-2家族蛋白是细胞凋亡调控网络中的重要组成部分，其中Bcl-2和Bax是该家族中具有代表性的两种蛋白，它们在细胞凋亡过程中发挥着相反的作用。Bcl-2是一种抗凋亡蛋白，其主要作用机制是通过维持线粒体的稳定性来抑制细胞凋亡。正常情况下，Bcl-2定位于线粒体膜、内质网等细胞器膜上，能够阻止线粒体释放细胞色素C等凋亡诱导因子。细胞色素C是线粒体凋亡途径中的关键物质，当它从线粒体释放到细胞质中后，会与凋亡蛋白酶激活因子-1（Apaf-1）、ATP/dATP结合，形成凋亡小体，进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（Caspase），启动细胞凋亡程序。Bcl-2通过其BH1、BH2和BH3结构域与其他促凋亡蛋白相互作用，形成异源二聚体，从而抑制促凋亡蛋白的活性，阻止细胞色素C的释放，发挥抗凋亡作用。在本实验中，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组大鼠脑组织中Bcl-2蛋白表达显著高于缺血再灌注组，这表明布比卡因能够上调Bcl-2蛋白的表达，增强其对线粒体的保护作用，抑制细胞色素C的释放，从而减少细胞凋亡的发生。Bax则是一种促凋亡蛋白，其作用机制与Bcl-2相反。Bax平时以单体形式存在于细胞质中，当细胞受到凋亡刺激时，Bax会发生构象改变，从细胞质转移到线粒体膜上，并在线粒体膜上形成多聚体。Bax多聚体能够破坏线粒体膜的完整性，导致线粒体膜电位下降，通透性增加，从而促使细胞色素C等凋亡诱导因子释放到细胞质中，激活Caspase级联反应，引发细胞凋亡。在本实验中，缺血再灌注组大鼠脑组织中Bax蛋白表达显著升高，而布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞组大鼠脑组织中Bax蛋白表达显著低于缺血再灌注组，这说明布比卡因能够下调Bax蛋白的表达，减少Bax在线粒体膜上的聚集，从而抑制线粒体凋亡途径的激活，减少细胞凋亡。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞调节凋亡相关蛋白表达的机制可能与多种信号通路有关。有研究表明，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路在细胞凋亡的调控中起着重要作用。MAPK信号通路包括细胞外信号调节激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等多个亚家族。在脑缺血再灌注损伤时，MAPK信号通路被激活，其中JNK和p38MAPK的激活会促进细胞凋亡，而ERK的激活则具有抗凋亡作用。布比卡因可能通过调节MAPK信号通路的活性来影响凋亡相关蛋白的表达。例如，布比卡因可能抑制JNK和p38MAPK的磷酸化，从而减少其对Bax基因转录的促进作用，降低Bax蛋白的表达；同时，布比卡因可能促进ERK的磷酸化，增强其对Bcl-2基因转录的促进作用，上调Bcl-2蛋白的表达。此外，磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路也与细胞凋亡密切相关。PI3K/Akt信号通路的激活能够抑制细胞凋亡，其机制主要是通过磷酸化下游的多种底物，如Bad、Caspase-9等，使它们失活，从而抑制细胞凋亡。布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞可能通过激活PI3K/Akt信号通路，促进Akt的磷酸化，进而抑制细胞凋亡相关蛋白的表达，发挥神经保护作用。综上所述，布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达，抑制细胞凋亡，其调控机制可能与MAPK信号通路、PI3K/Akt信号通路等多种信号通路有关。这一发现为进一步深入了解布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制提供了重要的理论依据，也为临床治疗脑缺血再灌注损伤提供了新的潜在靶点。5.5与其他相关研究的对比分析在脑缺血再灌注损伤的研究领域，众多学者从不同角度展开研究，以探寻有效的治疗方法和干预措施。与本研究相似，一些研究也关注了局麻药在脑缺血再灌注损伤中的作用。有研究探讨了利多卡因对脑缺血再灌注损伤的影响，结果表明利多卡因能够减轻神经功能缺损，减小脑梗死体积，其作用机制可能与抑制炎症反应和细胞凋亡有关。然而，与布比卡因相比，利多卡因的作用时间较短，在长时间的神经保护方面可能存在一定局限性。本研究中布比卡因连续上胸段硬膜外阻滞能够持续发挥作用，通过持续调节交感神经系统、抑制炎症反应和调节凋亡相关蛋白表达等多方面机制，对脑缺血再灌注损伤起到更为持久和全面的保护作用。另一些研究则聚焦于其他神经阻滞技术或药物对脑缺血再灌注损伤的影响。例如，有研究采用星状神经节阻滞来改善脑缺血再灌注损伤，发现星状神经节阻滞可以调节脑血管张力，增加脑血流量，从而减轻神经功能损伤。但星状神经节阻滞的操作相对复杂，且存在一定的并发症风险，如气胸、喉返神经麻痹等。相比之下，上胸段硬膜外阻滞操作相对简便，安全性较高，在临床应用中更具可行性。同时