临床实验室梅毒血清学检测流程指南（2025版）

临床实验室梅毒血清学检测流程指南（2025版）临床实验室梅毒血清学检测是梅毒诊断、疗效评估及流行病学监测的重要手段。为规范检测流程，提升结果准确性与可靠性，结合当前检验医学进展及临床需求，制定本流程指南，适用于开展梅毒血清学检测的各类临床实验室（含第三方医学实验室）。一、检测前准备（一）人员要求检测人员需具备医学检验专业背景，经过梅毒血清学检测专项培训并考核合格。培训内容应涵盖检测原理、操作规范、质量控制、生物安全及结果判读等，每2年复训1次。实验室需明确检测人员、审核人员及质量管理人员职责，确保分工清晰。（二）设备与试剂管理1.设备配置：需配备符合国家标准的检测设备，包括但不限于酶标仪（含洗板机）、化学发光免疫分析仪、梅毒血清反应旋转器（用于RPR/TRUST试验）、离心机（转速≥3000r/min，控温范围4-25℃）、生物安全柜（BSL-2级）及冷链存储设备（2-8℃冰箱、-20℃冰柜）。设备需定期校准（每年至少1次）、维护并记录，确保性能稳定。2.试剂选择：应选用经国家药品监督管理局（NMPA）批准的检测试剂，优先选择敏感性≥98%、特异性≥95%的高准确性试剂。非梅毒螺旋体抗原试验（如RPR、TRUST）与梅毒螺旋体抗原试验（如TPPA、ELISA、化学发光法）需分属不同检测原理的试剂组合，避免同源性干扰。试剂需按说明书要求存储（2-8℃或-20℃），使用前检查有效期及外观（如无沉淀、变色），开瓶后标注启用日期，超出稳定期的试剂禁止使用。（三）环境与生物安全实验室需分区明确，设置样本接收区、前处理区、检测区及废弃物处理区，各区域标识清晰，避免交叉污染。检测过程需在生物安全柜内进行，操作人员需穿戴工作服、手套、口罩，接触样本后及时消毒。医疗废弃物分类处理：感染性废物（如样本管、吸头）需置于双层黄色医疗废物袋，经高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）后由专业机构回收；化学废物（如废弃试剂）按实验室化学品管理规范处理。（四）患者准备与样本要求1.患者准备：检测前无需严格禁食，但需避免溶血（如止血带绑扎时间≤1分钟、避免反复穿刺）、脂血（如空腹4小时以上）及严重黄疸（胆红素＞342μmol/L可能干扰比色法）。近期（2周内）接受免疫球蛋白输注、血液制品治疗或使用免疫抑制剂者，需在病历中注明，检测结果需结合临床综合分析。2.样本类型：首选血清（无抗凝剂真空管采集），次选血浆（EDTA抗凝，避免肝素抗凝，因可能导致非特异性反应）。样本量≥1.0ml（化学发光法）或≥0.5ml（ELISA法），确保满足检测需求。二、样本处理流程（一）样本接收与核查样本接收时需核对以下信息：患者姓名、性别、年龄、唯一标识（如住院号、门诊号）、样本类型、采集时间（需标注具体时间，精确至分钟）及临床诊断（如“梅毒筛查”“疗效监测”）。对信息不全、样本溶血（血红蛋白＞5g/L）、脂血（乳糜指数＞3+）或采集后超过48小时未分离血清（2-8℃保存）的样本，需登记为不合格样本，联系临床重新采集并记录沟通内容。（二）样本前处理1.血清分离：采集后2小时内（室温）或4小时内（2-8℃）离心，转速3000r/min，时间10分钟，分离血清至洁净离心管（避免反复冻融）。2.样本保存：检测前样本需2-8℃保存，保存时间≤72小时；需复检或备份的样本-20℃保存（≤6个月），-80℃可长期保存（≤5年）。三、检测方法与操作规范梅毒血清学检测分为非梅毒螺旋体抗原试验（非特异性试验）与梅毒螺旋体抗原试验（特异性试验），临床需结合两种试验结果综合判读。（一）非梅毒螺旋体抗原试验（初筛/疗效监测）以快速血浆反应素试验（RPR）为例：1.试剂准备：RPR抗原悬液使用前室温平衡30分钟，轻轻摇匀（避免气泡）。2.操作步骤：取50μl血清（未稀释）滴加于RPR卡片圆圈内，均匀涂布；用专用滴管垂直滴加1滴抗原悬液（约50μl），置旋转器（100±5r/min）水平旋转8分钟；立即在强光下观察结果。3.结果判读：-阴性：无凝集颗粒，液体均匀。-阳性：可见中等或大的凝集颗粒（1+：颗粒分布均匀；2+：较大颗粒，背景清晰；3+：大颗粒或块状物；4+：大的块状物）。-临界值：需用原倍血清重复检测，仍为临界者判为阴性。-滴度检测：将血清用生理盐水做1:2、1:4…1:32稀释，按上述步骤操作，记录最高稀释度的阳性结果（如1:16阳性）。（二）梅毒螺旋体抗原试验（确认/诊断）以化学发光免疫分析法（CLIA）为例：1.试剂与仪器准备：试剂卡、校准品、质控品需与仪器型号匹配，上机前检查试剂位、样本架及反应杯状态。2.操作步骤：-样本加载：将处理后的血清（或血浆）按顺序放入样本架，设置检测项目（梅毒螺旋体抗体IgG/IgM）。-仪器运行：仪器自动完成加样、温育（37℃，15分钟）、洗涤（3次）、加化学发光底物（吖啶酯标记物）、检测光子信号。3.结果判读：以S/CO值表示，S/CO≥1.0为阳性，0.9≤S/CO＜1.0为灰区（需48小时后复检或换用其他方法确认），S/CO＜0.9为阴性。四、质量控制与结果审核（一）室内质量控制（IQC）1.质控品选择：使用与检测项目匹配的第三方质控品（涵盖阴性、临界、阳性水平），每批号试剂至少检测1次，日常检测每批次样本需同步检测质控品。2.质控规则：采用Westgard多规则（12s、13s、22s、R4s、41s、10x），每日记录质控值并绘制Levey-Jennings图。若出现失控，需立即排查原因（如试剂失效、仪器故障、操作失误），重新检测失控批次样本并记录处理过程。（二）室间质量评价（EQA）实验室需每年参加国家或省级临床检验中心组织的梅毒血清学室间质评，评价项目包括阳性符合率、阴性符合率及滴度准确性。对EQA结果不满意的项目，需分析偏差原因（如方法学差异、校准错误），制定改进措施并记录。（三）结果审核与复核1.双人审核：检测结果需经检测人员初核、授权审核人员复核，重点核对样本信息、检测方法、结果一致性（如非特异性试验阳性需核查特异性试验结果）及异常值（如滴度突然升高4倍以上）。2.复核规则：对以下情况需重新检测：-初筛阳性但确认试验阴性（需换用另一种特异性试验复核）；-滴度变化≥4倍（如治疗前1:32，治疗后1:8，需排除样本混淆）；-灰区结果（S/CO0.9-1.0）需用原样本复检，仍为灰区者报告“灰区，建议结合临床”。五、报告发放与后处理（一）报告内容与格式检测报告需包含以下信息：-实验室名称、地址、联系方式（仅公开实验室官方电话，无私人信息）；-患者信息（姓名、性别、年龄、唯一标识）；-检测项目（如“梅毒螺旋体抗体（CLIA）”“RPR滴度”）；-检测结果（阳性/阴性，滴度需注明稀释倍数）；-参考范围（如“梅毒螺旋体抗体：阴性（S/CO＜1.0）”）；-检测时间、报告时间；-检测人员与审核人员签名（电子签名需符合《电子签名法》要求）。（二）报告发放与隐私保护报告通过实验室信息系统（LIS）发送至临床科室，或打印后密封传递，禁止通过公共社交平台发送。患者本人查询结果需提供有效身份证件，授权他人代领需签署委托书。（三）样本与记录保存1.样本保存：检测后剩余样本2-8℃保存7天，需复检的样本-20℃保存3个月；阳性样本建议-80℃长期保存（≤5年），用于追溯或科研（需患者知情同意）。2.记录归档：检测原始记录（包括质控数据、仪器运行日志、结果审核记录）需电子备份并纸质存档，保存期限≥5年（法律另有规定的从其规定）。六、特殊场景处理（一）新生儿检测新生儿梅毒抗体可能来自母体IgG（可通过胎盘），需检测特异性IgM抗体（CLIA法或免疫荧光法）。若IgM阳性或非特异性试验滴度≥母体4倍，提示先天感染；IgM阴性但非特异性试验阳性，需随访至18月龄（若18月龄后仍阳性，需重新评估）。（二）HIV合并感染HIV感染者因免疫功能异常，可能出现梅毒血清学假阴性（早期感染）或假阳性（自身抗体干扰）。建议同时检测非特异性试验（滴度≥1:8）与两种不同原理的特异性试验（如CLIA+TPPA），必要时结合暗