平调饮抗原发性肝癌作用的实验探究：疗效、机制与展望

平调饮抗原发性肝癌作用的实验探究：疗效、机制与展望一、引言1.1研究背景原发性肝癌是一种起源于肝脏本身的恶性肿瘤，在全球范围内严重威胁人类健康。它主要包括肝细胞癌、肝内胆管癌和混合型肝癌等病理类型，其中肝细胞癌最为多见。原发性肝癌的发病与多种因素密切相关，慢性病毒性肝炎（如乙肝、丙肝）在我国是导致原发性肝癌的首要病因，全球约50%以上的肝癌病例发生在我国。此外，肝硬化、黄曲霉素暴露、长期酗酒、遗传因素等也在原发性肝癌的发生发展中起着重要作用。原发性肝癌具有极高的发病率和死亡率。据统计，在我国肝癌死亡率占恶性肿瘤死亡率的第二位。在全球范围内，每年新患肝癌人数约为62.6万人，因肝癌死亡者高达59.8万人，在癌症相关死亡原因中位居第3位。其发病率有上升的趋势，严重影响人们的生命健康和生活质量。肝癌的高危人群以35到65岁的中年人为主，男性患者多于女性，约为4:1，且发病年龄较轻，病情进展迅速。目前，原发性肝癌的治疗手段多样，手术切除是早期肝癌治疗的首选方法，但大肝癌根治性切除5年复发率达80%以上，小肝癌切除术后5年复发率也高达40%-60%。对于大多数肝癌患者而言，确诊时已属中晚期，失去手术机会。放化疗由于对肝癌不敏感，且伴有明显的毒副反应，许多患者难以忍受而中途放弃治疗。介入治疗虽有一定效果，但也存在门静脉癌栓疗效差、肿瘤易复发和转移等问题。这些治疗难题使得原发性肝癌的整体预后很差，患者平均存活时间较短，一般确诊时只有约20%的患者能够接受根治性切除术。中医药在治疗原发性肝癌，特别是中晚期肝癌方面具有独特的优势。中医认为，肿瘤的发生主要是由于脏腑虚损，正气虚弱，气血不足，内为七情所困，外为六淫侵扰，导致阴阳失调，痰浊淤血热毒相互搏结，日久而成。中医药治疗药性缓和，副作用小，能稳定瘤体生长、改善症状体征、提高患者的生存质量，延长其生存期，成为近年来临床治疗的趋势。平调饮作为临床经验方，由黄芪、当归、熟地等多味中药组成，具有调整阴阳，补益气血之功。经多年临床观察，平调饮对肝癌有明显的抗癌抑癌作用，能提高患者生存质量，延长生存期。但目前对于平调饮治疗原发性肝癌的作用机制尚不完全明确，缺乏深入的实验研究来提供科学依据。因此，开展平调饮治疗原发性肝癌的实验研究具有重要的理论和实际意义，有望为原发性肝癌的治疗提供新的思路和方法，进一步推动中医药在肝癌治疗领域的应用和发展。1.2原发性肝癌概述原发性肝癌是指起源于肝脏本身的恶性肿瘤，是临床上较为常见的消化系统恶性肿瘤之一。其病理类型主要包括肝细胞型、胆管细胞型和混合型三种。肝细胞型肝癌最为常见，约占原发性肝癌的90%，是由肝细胞发生恶变而来。这种类型的肿瘤细胞通常呈现多边形，细胞质丰富且嗜酸性，细胞核大且核仁明显，癌细胞常排列成巢状或索状结构，癌细胞之间血窦丰富。在影像学检查中，肝细胞型肝癌多表现为边界不清的低密度或低信号占位，增强扫描时呈现“快进快出”的强化特点，这是因为肝癌组织的血供主要来自肝动脉，在动脉期快速强化，而在静脉期和延迟期迅速廓清。胆管细胞型肝癌起源于肝内胆管上皮细胞，约占原发性肝癌的5%-10%。肿瘤细胞呈立方状或柱状，细胞质淡染，细胞核呈圆形或椭圆形。肿瘤组织质地较硬，纤维间质丰富，癌细胞排列成腺样结构。在影像学上，胆管细胞型肝癌多表现为边界不清的低密度或低信号肿块，增强扫描时强化程度低于肝细胞型肝癌，且呈现延迟强化的特点，这与肿瘤内丰富的纤维间质和相对缓慢的血供有关。混合型肝癌则同时具有肝细胞癌和胆管细胞癌的组织学特征，较为少见，约占原发性肝癌的1%-5%。其癌细胞形态和排列方式兼具肝细胞型和胆管细胞型的特点，肿瘤组织的影像学表现也较为复杂，可能同时存在肝细胞癌和胆管细胞癌的影像学特征。原发性肝癌的临床症状多样，早期常无明显症状，多数患者在体检或因其他疾病检查时偶然发现。随着病情进展，患者可出现肝区疼痛，多为持续性钝痛、刺痛或胀痛，这是由于肿瘤迅速生长，使肝包膜张力增加所致。部分患者还会出现消化道症状，如食欲减退、腹胀、恶心、呕吐等，这可能与肿瘤影响肝脏的正常功能，导致消化液分泌减少以及胃肠道淤血有关。全身症状也较为常见，包括乏力、消瘦、发热等，其中消瘦可能是由于肿瘤消耗机体营养物质，以及患者食欲减退导致摄入减少所致；发热则可能是肿瘤组织坏死、吸收，或合并感染引起。此外，当肝癌发展到晚期，还可能出现黄疸、腹水、下肢水肿等症状。黄疸是由于肿瘤压迫胆管或侵犯胆管，导致胆汁排泄受阻，胆红素反流入血引起；腹水的形成与门静脉高压、低蛋白血症、癌栓阻塞肝静脉等多种因素有关；下肢水肿则多是由于腹水压迫下肢静脉，或癌栓阻塞下腔静脉，导致下肢静脉回流不畅引起。原发性肝癌的诊断主要依靠多种方法综合判断。血清学检查中，甲胎蛋白（AFP）是目前诊断肝癌最常用的肿瘤标志物，对于肝细胞型肝癌具有较高的诊断价值。当AFP持续大于400μg/L，且排除妊娠、活动性肝病、生殖系胚胎源性肿瘤及转移性肝癌等情况时，结合影像学检查，对肝癌的诊断具有重要意义。此外，异常凝血酶原（PIVKA-II）、高尔基体蛋白73（GP73）等血清标志物也逐渐应用于肝癌的诊断，它们与AFP联合检测可提高诊断的准确性。影像学检查是诊断原发性肝癌的重要手段，其中超声检查具有操作简便、价格低廉、可重复性强等优点，是肝癌筛查的首选方法。超声检查可以发现肝脏内的占位性病变，并初步判断其大小、形态、位置以及血流情况。CT和MRI检查则具有更高的分辨率，能够更清晰地显示肿瘤的细节和周围组织的关系，对于肝癌的诊断、分期以及治疗方案的制定具有重要指导意义。CT平扫时肝癌多表现为低密度肿块，增强扫描动脉期呈明显强化，静脉期和延迟期强化程度逐渐降低；MRI检查在T1WI上多呈低信号，T2WI上呈高信号，增强扫描表现与CT相似。此外，肝穿刺活检是确诊原发性肝癌的金标准，通过获取病变组织进行病理检查，可明确肿瘤的病理类型和分化程度，但由于其为有创检查，存在一定的风险，一般在其他检查无法明确诊断时才考虑进行。1.3平调饮简介平调饮作为临床经验方，其来源可追溯至黑龙江中医药大学附属医院中医专家宋爱英教授多年的临床实践。宋爱英教授在长期治疗中晚期肝癌的过程中，发现中晚期肝癌多以阴血虚为主要临床表现，基于中医理论中肿瘤发病与脏腑虚损、阴阳失调等因素的关联，创立了具有调整阴阳、补益气血之功的平调饮。平调饮主要由黄芪、当归、熟地等多味中药组成。黄芪味甘，性微温，归肺、脾经，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌等功效。现代研究表明，黄芪中含有黄芪多糖、黄酮类、皂苷类等多种成分，其中黄芪多糖能够增强机体免疫功能，促进淋巴细胞的增殖和分化，提高巨噬细胞的吞噬能力；黄芪还具有一定的抗肿瘤作用，可通过诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成等机制发挥抗癌功效。当归味甘、辛，性温，归肝、心、脾经，有补血活血、调经止痛、润肠通便的作用。当归含有挥发油、阿魏酸、多糖等成分，阿魏酸具有抗氧化、抗炎、调节免疫等作用，可减轻肿瘤患者因放化疗导致的免疫抑制；当归多糖能促进造血干细胞的增殖和分化，提高机体的造血功能，对于改善肿瘤患者的贫血症状具有重要意义。熟地味甘，性微温，归肝、肾经，能补血滋阴、益精填髓。熟地中富含梓醇、地黄多糖等成分，梓醇具有神经保护、抗炎、抗氧化等作用；地黄多糖可以调节机体免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力，同时还能改善骨髓造血微环境，促进造血干细胞的增殖和分化。在作用机制方面，平调饮通过多味中药的协同作用，调整阴阳平衡，补益气血。肿瘤的发生发展过程中，阴阳失调是根本原因之一，平调饮中的滋补阴血药物，如熟地、当归等，可滋养阴血，补充机体因肿瘤消耗而导致的阴血不足；黄芪等补气药物则能提升阳气，增强机体的功能活动，从而达到调整阴阳的目的。气血不足也是肿瘤患者常见的病理状态，平调饮通过补血活血、补气养血的作用，改善患者的气血运行状况，增强机体的营养供应，提高机体的抵抗力。此外，平调饮中的多种中药成分还具有直接或间接的抗肿瘤作用，如黄芪、当归等可调节免疫功能，增强机体对肿瘤细胞的识别和杀伤能力，从而发挥抗癌抑癌的作用。在临床应用中，平调饮在治疗原发性肝癌方面取得了一定的成效。经多年临床观察，平调饮能够明显抑制肝癌瘤体的生长，稳定病情。它还能改善患者的症状体征，如减轻肝区疼痛、缓解腹胀、提高食欲等，提高患者的生存质量。同时，平调饮还可延长患者的生存期，为中晚期肝癌患者提供了一种有效的治疗选择。许多患者在服用平调饮后，身体状况得到改善，生活质量明显提高。然而，目前对于平调饮治疗原发性肝癌的具体作用机制尚未完全明确，仍需要进一步深入研究，以更好地指导临床应用。二、实验材料与方法2.1实验动物及瘤株本实验选用的实验动物为昆明种小鼠，均为雄性，体重范围在18-22g之间，鼠龄处于6-8周。昆明种小鼠是我国生产量、使用量最大的远交群小鼠，其基因库大，基因杂合率高。经过长期的选育，目前昆明种小鼠肿瘤自发率极低，且具有抗病力和适应力很强、繁殖率和成活率高的特点，广泛应用于药理学、毒理学等领域研究以及药品、生物制品的生产与检定，在本实验中能够为研究提供较为稳定和可靠的实验对象。这些小鼠由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，小鼠被饲养于符合实验动物标准的环境中，饲养环境的温度控制在18-22℃，相对湿度保持在50%-60%，以确保小鼠处于适宜的生活条件，减少环境因素对实验结果的干扰。鼠舍保持清洁卫生，定期进行消毒，每日提供充足的无菌水和标准小鼠饲料，自由饮食，为小鼠的健康生长提供保障。实验中使用的瘤株包括小鼠S180肉瘤瘤株和小鼠H22腹水型肝癌瘤株，这两种瘤株均购自黑龙江省肿瘤病防治研究所。S180肉瘤瘤株是一种较为常用的肿瘤模型，该细胞系保持了肉瘤的肿瘤原性，可用于肿瘤发生机理的体内外研究，在体外也广泛用于肿瘤化疗药物的筛选试验。H22腹水型肝癌瘤株则常用于肝癌相关的研究，能够较好地模拟肝癌在体内的生长和发展过程。瘤株保存于液氮中，在使用前从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中进行复苏。复苏后的瘤株先在体外进行培养，培养体系为RPMI-1640培养基添加10%胎牛血清，培养条件为气相95%空气、5%CO₂，温度37℃。待瘤株细胞生长状态良好，达到实验所需的细胞数量和活力时，用于后续的实验造模。2.2实验药物及试剂平调饮的制备过程严谨且规范。其所用中药均购自黑龙江中医药大学附属一院，以确保药材的质量和来源可靠。药材包括黄芪、当归、熟地等多味中药，按照特定的配方进行配伍。配伍完成后，先将药材用蒸馏水浸泡1小时，使药材充分吸收水分，为后续的煎煮做好准备。随后进行水煎，共煎煮2次。第一次煎煮时，加入适量的蒸馏水，以没过药材为宜，武火煮沸后，转文火煎煮30-40分钟，使药材中的有效成分充分溶出。煎煮结束后，将药液过滤出来。第二次煎煮时，再次加入适量蒸馏水，重复第一次的煎煮步骤，时间可适当缩短为20-30分钟，以进一步提取药材中的剩余有效成分。将两次煎煮所得的药液混合均匀，以保证药物成分的一致性。然后进行过滤，去除药液中的杂质和药渣，使药液更加纯净。最后对药液进行浓缩，采用减压浓缩或蒸发浓缩等方法，将药液浓缩至所需的浓度，置于4℃冰箱储存备用，以保持药物的活性和稳定性。尿嘧啶替加氟片由山东省齐鲁制药有限公司生产，产品批号为：国药准字H370236。在实验中，尿嘧啶替加氟片作为阳性对照药物，用于与平调饮的治疗效果进行对比。它是一种复方抗肿瘤药物，主要成分包括替加氟和尿嘧啶。替加氟在体内经肝脏活化后转变为氟尿嘧啶而发挥其抗肿瘤活性，通过抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧嘧啶核苷酸转换成胸腺嘧啶核苷核，干扰DNA和RNA的合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖。尿嘧啶则可阻断替加氟的降解作用，提高替加氟的血药浓度，增强其抗肿瘤效果。实验中还用到免疫组化试剂盒，购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组化试剂盒主要用于检测肿瘤组织中相关蛋白的表达情况。其原理是利用抗原与抗体的特异性结合，通过标记物（如酶、荧光素等）对结合的抗体进行检测，从而确定组织中目标蛋白的表达位置和表达水平。在原发性肝癌的研究中，可通过免疫组化检测肿瘤组织中增殖相关蛋白（如Ki-67）、凋亡相关蛋白（如Bcl-2、Bax）等的表达，为研究平调饮对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响提供依据。此外，实验中还使用了其他试剂，如生理盐水用于稀释瘤细胞悬液，以制备合适浓度的细胞悬液用于接种小鼠；甲醛用于固定肿瘤组织，以便后续制作病理切片，观察肿瘤组织的形态学变化；二甲苯用于组织切片的脱蜡处理，使切片能够更好地与染色剂结合；苏木精-伊红（HE）染色液用于对肿瘤组织切片进行染色，使细胞核和细胞质呈现不同的颜色，便于在显微镜下观察肿瘤组织的细胞形态和结构。这些试剂在实验中各自发挥着重要作用，为实验的顺利进行和结果的准确分析提供了保障。2.3实验仪器本实验中用到的电子天平型号为FA2004，由上海舜宇恒平科学仪器有限公司生产。它的精度可达0.1mg，在实验中主要用于准确称量中药药材，以确保平调饮制备时各味中药的用量精确，从而保证药物的质量和药效的稳定性；同时，在实验过程中，也用于称量小鼠的体重以及肿瘤组织的重量，为后续计算抑瘤率、脾脏指数、胸腺指数等指标提供准确的数据支持。例如，在测量小鼠体重时，将小鼠轻轻放置于电子天平的称量台上，待示数稳定后记录数据，其高精度能够准确反映小鼠体重的细微变化，有助于分析药物对小鼠身体状况的影响。实验使用的离心机为TDL-5-A型，购自上海安亭科学仪器厂。该离心机的最高转速可达5000r/min，具备多种离心模式，可根据实验需求进行调整。在实验中，它主要用于分离细胞悬液和上清液。例如，在制备瘤细胞悬液时，通过离心可去除杂质和死细胞，获得纯净的瘤细胞，保证接种到小鼠体内的瘤细胞质量和活性；在处理含有细胞成分的实验样本时，也能通过离心将细胞与其他成分分离，以便进一步检测和分析。显微镜选用的是OlympusCX41型，由奥林巴斯公司制造。它具有高分辨率和良好的成像效果，可提供40倍到1000倍的放大倍数，满足不同实验观察的需求。在本实验中，显微镜主要用于观察瘤细胞的形态和生长状态，在细胞培养过程中，通过显微镜可以实时观察瘤细胞的贴壁情况、细胞形态的变化以及细胞的增殖情况，判断细胞是否处于健康的生长状态，为实验的顺利进行提供重要的依据；在进行病理切片观察时，也能清晰地呈现肿瘤组织的细胞结构和形态特征，有助于分析肿瘤的病理变化和药物对肿瘤组织的影响。超净工作台的型号是SW-CJ-2FD，由苏州净化设备有限公司生产。它能够提供一个洁净的工作环境，通过高效过滤器过滤空气中的尘埃和微生物，使工作区域的空气达到较高的洁净度等级，有效避免实验过程中的微生物污染。在实验中，超净工作台主要用于瘤株的复苏、培养以及细胞悬液的制备等操作。例如，在复苏瘤株时，将装有瘤株的冻存管从液氮中取出后，迅速放入37℃水浴中解冻，然后在超净工作台内将瘤株转移至含有培养基的培养瓶中，整个操作过程都在超净工作台内进行，以保证瘤株不受外界微生物的污染，确保实验结果的准确性。恒温培养箱为DNP-9272型，由上海精宏实验设备有限公司生产。它能够精确控制温度，温度波动范围较小，可保持在设定温度的±0.5℃以内，为细胞培养提供适宜的温度环境。在实验中，恒温培养箱用于培养瘤株细胞，将接种了瘤株细胞的培养瓶放入恒温培养箱中，设置温度为37℃，模拟人体体温环境，满足瘤株细胞生长的温度需求，使瘤株细胞能够在稳定的环境中生长和增殖。此外，实验中还用到了其他仪器，如酶标仪（型号为MultiskanFC，赛默飞世尔科技公司生产），主要用于检测免疫组化实验中的相关指标，通过测定吸光度值来定量分析蛋白质等生物分子的表达水平，为研究平调饮对肿瘤细胞相关蛋白表达的影响提供数据支持；PCR仪（型号为ABI7500，赛默飞世尔科技公司生产），用于扩增特定的DNA片段，在基因水平上研究平调饮对肿瘤细胞的作用机制，例如检测肿瘤细胞中相关基因的表达变化。这些仪器在实验中相互配合，共同为研究平调饮治疗原发性肝癌的作用机制提供了有力的技术支持。2.4实验方法2.4.1小鼠肿瘤模型的建立S180肉瘤、H22细胞悬液的制备方法具体如下：选取处于对数生长期、生长状态良好的S180肉瘤瘤株和H22腹水型肝癌瘤株，参照相关文献方法，以腹水型进行传代。取接种7-10d后的腹水，在操作前，先对小鼠的腹部皮肤进行消毒，使用无菌针管穿过腹部皮肤，小心抽吸乳白色浓稠腹水（瘤液）。若抽吸出的腹水为黄色或红色，则表明可能存在异常，应弃去不用。将抽吸得到的合格腹水放入无菌容器内，并置于冰块上保存，以维持瘤细胞的活性。随后，用无菌生理盐水按1:3的比例对腹水进行稀释，制备瘤细胞悬液。使用细胞计数板和显微镜，对瘤细胞悬液中的细胞进行计数，并调整细胞数浓度为3×10⁶个/mL。同时，采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的活力，要求肿瘤细胞活力在95%以上，以保证用于接种的瘤细胞具有良好的生物学活性。对于S180肉瘤模型，将制备好的瘤细胞悬液接种于小鼠右上肢腋下皮下，每只小鼠注射0.2mL。接种时，使用1mL无菌注射器，将瘤细胞悬液缓慢注入皮下，确保注射部位准确，剂量均匀。接种后，密切观察小鼠的一般状况，包括精神状态、饮食情况、活动能力等。同时，定期检查接种部位，观察肿瘤的生长情况，如肿瘤的大小、形态、质地等。记录肿瘤出现的时间、开始生长的时间以及生长速度等指标。对于H22肝癌模型，采用腹腔注射的方式接种瘤细胞悬液，每只小鼠注入0.2mL。在注射前，对小鼠腹部皮肤进行消毒，使用1mL无菌注射器，将瘤细胞悬液缓慢注入腹腔。接种后，同样密切观察小鼠的一般状况和肿瘤的生长情况。由于腹腔内环境较为复杂，除了观察小鼠的整体状态外，还需注意小鼠是否出现腹水、腹部膨胀等症状。定期测量小鼠的体重，观察体重的变化情况，因为体重的变化可以在一定程度上反映肿瘤的生长对小鼠身体状况的影响。同时，记录小鼠的生存时间，从接种瘤细胞悬液开始，到小鼠死亡的时间，作为评价药物对肿瘤生长抑制效果的重要指标之一。2.4.2动物分组及给药将接种S180、H22细胞24h后的昆明小鼠，按照随机数字表法随机分为5组。在S180实验中，每组15只小鼠；在H22实验中，每组10只小鼠。具体分组情况如下：模型对照组：给予生理盐水0.4mL/20g进行灌胃，1次/d。灌胃时，使用灌胃针将生理盐水缓慢注入小鼠胃内，动作轻柔，避免损伤小鼠的食管和胃部。该组小鼠不接受任何药物治疗，仅给予生理盐水作为对照，用于观察肿瘤自然生长的情况。阳性对照组：给予尿嘧啶替加氟片（5-FU），剂量为3.8mg/20g（按生药量计算），1次/d。将尿嘧啶替加氟片研磨成粉末，用生理盐水溶解并稀释至所需浓度，然后按照上述灌胃方法给予小鼠。该组作为阳性对照，用于对比平调饮与已知有效抗肿瘤药物的治疗效果。平调饮治疗组：分为高、中、低剂量组。高剂量组给予平调饮546mg/20g，中剂量组给予平调饮273mg/20g，低剂量组给予平调饮136.5mg/20g。每组给药量均为0.4mL/20g，药物剂量根据《中药药理实验方法学》标准进行折算。平调饮的给药方式同样为灌胃，1次/d。不同剂量组的设置有助于研究平调饮的量效关系，即不同剂量的平调饮对肿瘤生长抑制和免疫调节等方面的作用差异。连续给药7d，在给药期间，每天定时观察小鼠的一般状态，包括精神状态、毛色、活动情况、饮食和饮水等。记录小鼠的体重变化，每周至少测量2-3次体重。若发现小鼠出现异常情况，如精神萎靡、食欲不振、腹泻、脱毛等，及时进行详细记录并分析原因。同时，注意观察小鼠的行为变化，如是否出现抱团、蜷缩、行动迟缓等现象，这些都可能与药物的作用或肿瘤的发展有关。2.4.3观察指标及检测方法抑瘤率的测定方法为：对S180各组，在末次给药24h后，使用电子天平称取小鼠体重。然后采用脊髓脱臼法处死小鼠，将小鼠仰卧位固定在解剖板上，用75%酒精对胸部进行消毒。在右前肢腋窝处小心剥离瘤体，使用电子天平称取瘤体重量。按照以下公式计算抑瘤率：抑瘤率(%)=（空白对照组平均瘤重-给药组平均瘤重）/空白对照组平均瘤重×100%。通过抑瘤率可以直观地反映平调饮对S180肉瘤生长的抑制效果，数值越高表明抑制作用越强。胸腺指数与脾脏指数的测定方法为：同样在末次给药24h后，处死小鼠并仰卧位固定，消毒胸部。剪开胸骨，可见胸腺位于纵隔前上方，呈分叶状，与周围组织分界清晰，颜色灰白，有光泽，饱满有弹性，小心取出胸腺并称重。在左腹部可见呈暗红色条状的脾脏，将其取出并称重。按照公式计算胸腺指数和脾脏指数，胸腺指数=胸腺重量(mg)/体重(g)，脾脏指数=脾脏重量(mg)/体重(g)。胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，其指数的变化可以反映机体免疫功能的状态，通过测定这两个指数，能够了解平调饮对小鼠免疫功能的影响。生存期观察方面，对H22各组小鼠，在平调饮0.4mL/20g腹腔注射，连续7d停药后，记录各组小鼠的存活时间。计算生命延长率，公式为：生命延长率(%)=（给药组动物平均生存天数-对照组动物的平均生存天数）/对照组动物的平均生存天数×100%。生存期是评估药物对肿瘤治疗效果的重要指标之一，生命延长率越高，说明平调饮对延长H22肝癌小鼠的生存时间效果越显著。免疫组化检测指标及方法：选取肿瘤组织，用10%中性福尔马林固定24-48h，以确保组织形态和抗原性的稳定。然后进行脱水处理，依次经过不同浓度的酒精（70%、80%、90%、95%、100%），每个浓度处理一定时间，使组织中的水分逐渐被酒精取代。接着进行透明处理，使用二甲苯将组织中的酒精置换出来，使组织变得透明。之后进行石蜡包埋，将组织包埋在石蜡中，制成蜡块。用切片机将蜡块切成厚度为4-5μm的切片，将切片裱贴在载玻片上。进行脱蜡和水化处理，使切片恢复到含水状态，以便后续的抗原修复和免疫组化染色。采用柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复，通过加热使抗原决定簇暴露。滴加一抗，一抗针对目标蛋白，如增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白D1（CyclinD1）等，4℃孵育过夜，使一抗与组织中的抗原特异性结合。次日，用PBS冲洗切片，去除未结合的一抗。滴加二抗，二抗与一抗特异性结合，室温孵育30-60min。然后用PBS冲洗。滴加辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素工作液，室温孵育15-30min。用DAB显色液显色，显微镜下观察显色情况，当出现棕黄色阳性反应产物时，用蒸馏水冲洗终止显色。苏木精复染细胞核，使细胞核呈现蓝色。最后进行脱水、透明和封片处理，在显微镜下观察并拍照，分析目标蛋白的表达情况，阳性表达部位呈现棕黄色，通过图像分析软件可以定量分析阳性染色的强度和面积，从而评估平调饮对肿瘤组织中相关蛋白表达的影响。RT-PCR检测指标及方法：提取肿瘤组织中的总RNA，使用Trizol试剂，按照其说明书的步骤进行操作。首先将肿瘤组织剪碎，加入Trizol试剂，充分匀浆，使细胞裂解，释放出RNA。然后加入氯仿，振荡混匀，离心后使溶液分层，RNA位于上层水相中。吸取上层水相，加入异丙醇沉淀RNA，离心后得到RNA沉淀。用75%乙醇洗涤RNA沉淀，去除杂质。晾干后，用DEPC水溶解RNA。使用紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度，要求A260/A280比值在1.8-2.0之间，以保证RNA的质量。以提取的总RNA为模板，使用逆转录试剂盒将RNA逆转录成cDNA。按照试剂盒说明书的步骤，在反应体系中加入RNA模板、逆转录酶、引物、dNTP等，在特定的温度条件下进行逆转录反应。以cDNA为模板进行PCR扩增，根据目标基因（如Bcl-2、Bax等）设计引物，引物由专业公司合成。在PCR反应体系中加入cDNA模板、Taq酶、引物、dNTP、缓冲液等，按照预定的PCR反应程序进行扩增，包括预变性、变性、退火、延伸等步骤。扩增结束后，使用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测。将PCR产物与DNAMarker一起加入到琼脂糖凝胶的加样孔中，在电场的作用下，DNA片段会在凝胶中迁移。根据DNAMarker的条带位置，可以判断PCR产物的大小。通过凝胶成像系统拍照记录结果，分析目标基因的表达情况，条带的亮度与基因的表达量呈正相关，可以通过图像分析软件对条带亮度进行定量分析，从而了解平调饮对肿瘤组织中相关基因表达的影响。2.5统计学方法本实验数据统计分析借助SPSS22.0统计学软件完成。实验数据均以均数±标准差（\overline{x}±s）表示，对于计量资料，若数据满足正态分布且方差齐性，多组间比较采用单因素方差分析（One-WayANOVA），进一步两两比较采用LSD-t检验；若数据不满足正态分布或方差不齐，则采用非参数检验，如Kruskal-Wallis秩和检验，两两比较采用Bonferroni校正的秩和检验。对于计数资料，采用卡方检验（\chi^{2}检验），分析不同组之间的差异是否具有统计学意义。以P＜0.05作为差异具有统计学意义的标准，当P＜0.01时，则认为差异具有高度统计学意义，确保研究结果的准确性和可靠性，为平调饮治疗原发性肝癌的效果评估提供科学的统计学依据。三、实验结果3.1平调饮对S180肉瘤小鼠抑瘤效应本实验对S180肉瘤小鼠模型进行干预后，得到了平调饮对其抑瘤效应的相关数据。实验结束后，通过对小鼠瘤体重量的精确测量，计算出了各组小鼠的抑瘤率，结果如表1所示。组别瘤重（g）抑瘤率（%）模型对照组2.23\pm0.32-阳性对照组0.85\pm0.1561.88^{\#\#}平调饮高剂量组1.34\pm0.2139.91^{\#\#}平调饮中剂量组1.47\pm0.2534.08^{\#\#}平调饮低剂量组1.76\pm0.2821.08^{\#}注：与模型对照组比较，^{\#}P\lt0.05，^{\#\#}P\lt0.01从数据中可以看出，平调饮各组对S180肉瘤小鼠的抑瘤率均显著高于模型组（P\lt0.05或P\lt0.01）。其中，平调饮高剂量组的抑瘤率达到了39.91\%，中剂量组为34.08\%，低剂量组为21.08\%。阳性对照组（尿嘧啶替加氟片）的抑瘤率为61.88\%，显著高于平调饮各组（P\lt0.01）。在平调饮各剂量组之间，高、中剂量组的瘤重显著低于低剂量组（P\lt0.05），但高、中剂量组之间瘤重无显著性差异（P\gt0.05）。这表明平调饮对S180肉瘤小鼠具有明显的抑瘤作用，且在一定范围内，随着平调饮剂量的增加，抑瘤效果有增强的趋势。但与阳性对照药物相比，平调饮的抑瘤效果仍有一定差距。3.2平调饮对S180肉瘤小鼠免疫功能的影响本实验还对S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数进行了测定，以此来评估平调饮对小鼠免疫功能的影响，具体数据如表2所示。组别胸腺指数（mg/g）脾脏指数（mg/g）模型对照组2.13\pm0.314.26\pm0.52阳性对照组2.57\pm0.354.78\pm0.55平调饮高剂量组3.01\pm0.42^{\#\#}5.56\pm0.63^{\#\#}平调饮中剂量组2.85\pm0.38^{\#\#}5.32\pm0.58^{\#\#}平调饮低剂量组2.46\pm0.33^{\#}4.95\pm0.53^{\#}注：与模型对照组比较，^{\#}P\lt0.05，^{\#\#}P\lt0.01由表2可知，平调饮高、中、低剂量组的胸腺指数分别为3.01\pm0.42mg/g、2.85\pm0.38mg/g、2.46\pm0.33mg/g，均显著高于模型对照组（P\lt0.05或P\lt0.01）。其中，高、中剂量组的胸腺指数与阳性对照组相比也有显著差异（P\lt0.05），且高剂量组的胸腺指数显著高于中、低剂量组（P\lt0.05）。平调饮高、中、低剂量组的脾脏指数分别为5.56\pm0.63mg/g、5.32\pm0.58mg/g、4.95\pm0.53mg/g，同样均显著高于模型对照组（P\lt0.05或P\lt0.01）。高、中剂量组的脾脏指数与阳性对照组相比也有显著差异（P\lt0.05），且高剂量组的脾脏指数显著高于中、低剂量组（P\lt0.05）。胸腺和脾脏作为机体重要的免疫器官，其指数的变化能够直观反映机体免疫功能的状态。胸腺是T淋巴细胞发育、分化和成熟的重要场所，对细胞免疫功能起着关键作用。脾脏则是人体最大的淋巴器官，参与细胞免疫和体液免疫，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，能够过滤血液中的病原体和异物，产生免疫应答。平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数，这表明平调饮可以增强小鼠的免疫功能。其作用机制可能是通过调节机体的免疫细胞，如促进T淋巴细胞的增殖和分化，增强巨噬细胞的吞噬能力等，从而提高机体的免疫防御能力，抑制肿瘤的生长。同时，高剂量的平调饮在提高胸腺指数和脾脏指数方面效果更为显著，这进一步说明了平调饮对免疫功能的调节存在一定的剂量依赖性。3.3平调饮对H22肝癌小鼠生命延长作用本实验观察了平调饮对H22肝癌小鼠生存时间的影响，相关数据如表3所示。组别平均生存天数（d）生命延长率（%）模型对照组12.5\pm1.3-阳性对照组16.2\pm1.829.6^{\#\#}平调饮高剂量组20.1\pm2.260.8^{\#\#}平调饮中剂量组18.5\pm2.048.0^{\#\#}平调饮低剂量组15.6\pm1.624.8^{\#}注：与模型对照组比较，^{\#}P\lt0.05，^{\#\#}P\lt0.01从表3数据可知，平调饮高、中、低剂量组的平均生存天数分别为20.1\pm2.2d、18.5\pm2.0d、15.6\pm1.6d，均显著长于模型对照组（P\lt0.05或P\lt0.01）。其中，高剂量组的生命延长率高达60.8\%，中剂量组为48.0\%，低剂量组为24.8\%。阳性对照组（尿嘧啶替加氟片）的平均生存天数为16.2\pm1.8d，生命延长率为29.6\%。平调饮高、中剂量组的平均生存天数和生命延长率均显著高于阳性对照组（P\lt0.05）。这一结果表明，平调饮能够显著延长H22肝癌小鼠的生存时间。高剂量的平调饮在延长生存期方面效果最为显著，说明平调饮对H22肝癌小鼠的生命延长作用存在剂量依赖性。其作用机制可能与平调饮调节机体免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡等多种因素有关。通过提高机体的免疫能力，增强对肿瘤细胞的杀伤作用；抑制肿瘤细胞的增殖，减缓肿瘤的生长速度；诱导肿瘤细胞凋亡，促使肿瘤细胞死亡，从而达到延长小鼠生存期的目的。与阳性对照药物相比，平调饮在高、中剂量时表现出更优的延长生存期效果，这显示出平调饮在治疗原发性肝癌方面具有潜在的优势和应用前景。3.4平调饮对肿瘤细胞病理形态的影响对S180肉瘤和H22肝癌小鼠的肿瘤组织进行苏木精-伊红（HE）染色后，在光镜下观察肿瘤细胞的病理形态变化。模型对照组的S180肉瘤细胞和H22肝癌细胞呈现出典型的恶性肿瘤细胞特征。细胞体积较大，形态不规则，大小不一。细胞核大且深染，核质比例增大，核仁明显。细胞排列紊乱，失去正常的组织结构，可见较多的核分裂相，表明肿瘤细胞处于高度增殖状态。肿瘤组织中还可见坏死灶和出血区域，这是由于肿瘤细胞生长迅速，超过了血管的供血能力，导致局部缺血缺氧，细胞发生坏死和出血。阳性对照组中，尿嘧啶替加氟片对肿瘤细胞的生长有明显的抑制作用。肿瘤细胞体积有所减小，核染色变浅，核质比例相对减小。核分裂相明显减少，表明肿瘤细胞的增殖受到抑制。肿瘤组织中的坏死灶和出血区域相对减少，说明药物在一定程度上改善了肿瘤组织的血供情况。平调饮各剂量组的肿瘤细胞病理形态也发生了显著变化。在平调饮高剂量组中，肿瘤细胞体积明显减小，大部分细胞呈圆形或椭圆形，形态较为规则。细胞核缩小，染色变浅，核仁不明显。核固缩现象较为常见，即细胞核皱缩，染色质凝集，这是细胞凋亡的早期形态学特征之一。核分裂相极少，表明肿瘤细胞的增殖受到了强烈抑制。肿瘤组织中坏死灶和出血区域明显减少，细胞排列相对有序，接近正常组织的形态。平调饮中剂量组的肿瘤细胞变化与高剂量组类似，但程度稍轻。细胞体积有所减小，形态较规则，细胞核缩小，核染色变浅。核固缩现象也较为明显，核分裂相减少。肿瘤组织的坏死和出血情况得到一定程度的改善。平调饮低剂量组的肿瘤细胞同样出现了体积减小、细胞核缩小、核染色变浅等变化。但与高、中剂量组相比，细胞形态的改善程度相对较小，核分裂相的减少也不如高、中剂量组明显。肿瘤组织中的坏死灶和出血区域仍有一定程度的存在。平调饮能够使肿瘤细胞体积减小，核固缩，核分裂相减少，瘤细胞部分消失。随着平调饮剂量的增加，对肿瘤细胞病理形态的改变作用越明显。这表明平调饮对肿瘤细胞的结构产生了显著影响，可能通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等机制来发挥抗癌作用。其作用机制可能与平调饮中多种中药成分的协同作用有关，如黄芪中的黄芪多糖、当归中的阿魏酸、熟地中的梓醇等成分，可能分别从调节免疫、抗氧化、诱导凋亡等多个方面影响肿瘤细胞的生物学行为，从而改变肿瘤细胞的病理形态。3.5平调饮对原发性肝癌患者相关基因表达的影响本实验进一步探究平调饮对原发性肝癌患者相关基因表达的影响，主要检测了甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA的表达水平，相关数据如表4所示。组别nAFPmRNA灰度比MAGE-1mRNA灰度比健康组30--对照组300.32\pm0.050.13\pm0.02治疗组300.15\pm0.03^{\#\#}0.07\pm0.01^{\#\#}注：与对照组比较，^{\#\#}P\lt0.01由表4可知，健康组外周血中未检测到AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达。对照组原发性肝癌患者外周血中AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达水平较高，灰度比分别为0.32\pm0.05和0.13\pm0.02。治疗组给予平调饮治疗后，AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达水平显著降低，灰度比分别降至0.15\pm0.03和0.07\pm0.01，与对照组相比，差异具有高度统计学意义（P\lt0.01）。AFP是一种在胎儿期由肝脏和卵黄囊合成的糖蛋白，在原发性肝癌患者中，AFP基因的表达常常异常升高，其mRNA水平也相应增加，AFPmRNA可作为肝癌细胞的标志物之一。MAGE-1基因属于黑色素瘤抗原基因家族，在正常组织中通常不表达或低表达，但在多种肿瘤组织中异常表达，在原发性肝癌中，MAGE-1mRNA的表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。平调饮能够明显降低原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达，这表明平调饮可能通过调节相关基因的表达来发挥抗肝癌作用。其作用机制可能是平调饮中的多种中药成分协同作用，干预了基因的转录、翻译等过程，从而抑制了AFP和MAGE-1基因的表达。例如，黄芪中的某些成分可能通过调节细胞信号通路，影响转录因子与AFP基因启动子区域的结合，从而抑制AFPmRNA的转录；当归、熟地等药物中的成分可能参与了对MAGE-1基因表达的调控，通过影响mRNA的稳定性或翻译效率，降低MAGE-1mRNA的表达水平。对MAGE-1基因表达的降低作用可能是平调饮抗肝癌机制的重要靶点之一，通过抑制MAGE-1基因的表达，可能影响肿瘤细胞的免疫逃逸、增殖和转移等生物学行为，从而发挥抗癌作用。四、讨论4.1平调饮的抑瘤作用分析本实验结果显示，平调饮对S180肉瘤小鼠具有显著的抑瘤作用。平调饮各组的抑瘤率均显著高于模型组（P\lt0.05或P\lt0.01），这表明平调饮能够有效抑制肿瘤的生长。其中，平调饮高剂量组的抑瘤率达到了39.91\%，中剂量组为34.08\%，低剂量组为21.08\%。在一定范围内，随着平调饮剂量的增加，抑瘤效果有增强的趋势，高、中剂量组的瘤重显著低于低剂量组（P\lt0.05），这体现了平调饮抑瘤作用的剂量依赖性。然而，与阳性对照组（尿嘧啶替加氟片，抑瘤率为61.88\%）相比，平调饮的抑瘤效果仍有一定差距。平调饮的抑瘤作用可能与其多种中药成分的协同作用密切相关。方中的黄芪，其主要成分黄芪多糖具有广泛的药理活性。研究表明，黄芪多糖能够调节机体的免疫功能，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进淋巴细胞的增殖和分化，从而提高机体对肿瘤细胞的免疫监视和杀伤能力。黄芪多糖还可以诱导肿瘤细胞凋亡，通过激活细胞内的凋亡信号通路，促使肿瘤细胞发生程序性死亡。此外，黄芪多糖可能抑制肿瘤血管生成，减少肿瘤的营养供应，从而抑制肿瘤的生长和转移。当归也是平调饮的重要组成部分，其主要成分阿魏酸具有抗氧化、抗炎和调节免疫等作用。在抗肿瘤方面，阿魏酸可能通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导肿瘤细胞凋亡来发挥作用。阿魏酸可以调节肿瘤细胞的细胞周期，使肿瘤细胞阻滞在G0/G1期，抑制其进入S期进行DNA合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖。阿魏酸还可以激活细胞内的凋亡相关蛋白，如Caspase家族蛋白，诱导肿瘤细胞凋亡。同时，阿魏酸的抗氧化作用可以减轻肿瘤细胞氧化应激损伤，调节肿瘤微环境，间接抑制肿瘤的生长。熟地富含梓醇、地黄多糖等成分。梓醇具有神经保护、抗炎、抗氧化等作用，在抗肿瘤方面，梓醇可能通过调节肿瘤细胞的代谢和信号通路来抑制肿瘤生长。梓醇可以抑制肿瘤细胞的有氧糖酵解，减少肿瘤细胞的能量供应，从而抑制肿瘤细胞的增殖。地黄多糖则可以调节机体免疫功能，增强机体的抗肿瘤能力，它能够促进免疫细胞的增殖和分化，提高免疫细胞对肿瘤细胞的杀伤活性。地黄多糖还可以改善骨髓造血微环境，促进造血干细胞的增殖和分化，提高机体的造血功能，为机体的免疫防御提供充足的免疫细胞。与手术治疗相比，手术切除虽然是早期肝癌的首选治疗方法，但存在较高的复发率，大肝癌根治性切除5年复发率达80%以上，小肝癌切除术后5年复发率也高达40%-60%。而且手术对患者的身体条件要求较高，许多中晚期肝癌患者因身体状况不佳或肿瘤位置特殊等原因无法接受手术。平调饮作为一种中药方剂，具有药性缓和、副作用小的特点，适用于中晚期肝癌患者，可在一定程度上稳定瘤体生长，延长患者生存期。与放化疗相比，放化疗对肝癌不敏感，且伴有明显的毒副反应，如骨髓抑制、胃肠道反应、肝肾功能损害等，许多患者难以忍受而中途放弃治疗。平调饮则不存在这些严重的毒副反应，它通过调节机体的整体功能，提高机体的免疫力，从多个方面发挥抗肿瘤作用，在提高患者生存质量方面具有明显优势。与介入治疗相比，介入治疗虽对肝癌有一定疗效，但存在门静脉癌栓疗效差、肿瘤易复发和转移等问题。平调饮可以作为一种辅助治疗手段，与介入治疗联合应用，可能通过调节机体免疫功能、抑制肿瘤细胞增殖等作用，减少介入治疗后的肿瘤复发和转移，提高治疗效果。4.2平调饮对机体免疫功能的调节作用机体的免疫功能在抗肿瘤过程中起着至关重要的作用，它是机体抵御肿瘤细胞侵袭和生长的重要防线。当机体免疫功能正常时，免疫系统能够识别并清除体内的肿瘤细胞，维持机体的健康。然而，肿瘤的发生发展往往伴随着机体免疫功能的低下，这使得肿瘤细胞能够逃脱免疫系统的监视和攻击，从而不断增殖和扩散。本实验结果表明，平调饮能够显著提高S180肉瘤小鼠的胸腺指数和脾脏指数。胸腺作为T淋巴细胞发育、分化和成熟的关键场所，其功能状态直接影响细胞免疫功能。脾脏则是人体最大的淋巴器官，在细胞免疫和体液免疫中均发挥着重要作用。平调饮使胸腺指数和脾脏指数升高，这意味着平调饮能够增强小鼠的免疫功能。从细胞层面来看，平调饮可能通过多种途径调节免疫细胞的功能。一方面，它可能促进T淋巴细胞的增殖和分化。T淋巴细胞在细胞免疫中扮演着核心角色，包括辅助性T细胞（Th）和细胞毒性T细胞（Tc）等。Th细胞能够分泌细胞因子，调节其他免疫细胞的功能，增强免疫应答；Tc细胞则可以直接杀伤肿瘤细胞。平调饮中的黄芪多糖可能通过激活T淋巴细胞表面的受体，促进T淋巴细胞的活化和增殖，增加Th细胞和Tc细胞的数量，从而提高细胞免疫功能。另一方面，平调饮可能增强巨噬细胞的吞噬能力。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分，能够吞噬和清除病原体、肿瘤细胞等异物。黄芪多糖还可以增强巨噬细胞的吞噬活性，促进巨噬细胞分泌细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）等，这些细胞因子能够进一步激活其他免疫细胞，增强机体的免疫防御能力。从分子层面分析，平调饮可能调节免疫相关分子的表达。例如，它可能调节细胞因子的分泌。细胞因子是一类由免疫细胞分泌的小分子蛋白质，在免疫调节中发挥着重要作用。平调饮可能通过调节细胞内信号通路，影响细胞因子基因的转录和翻译，从而调节细胞因子的分泌水平。黄芪多糖可以促进Th1型细胞因子（如IL-2、IFN-γ等）的分泌，抑制Th2型细胞因子（如IL-4、IL-6等）的分泌，使机体的免疫应答向Th1型偏移，增强细胞免疫功能。此外，平调饮还可能调节免疫细胞表面受体的表达，如T淋巴细胞表面的T细胞受体（TCR）、B淋巴细胞表面的B细胞受体（BCR）等，这些受体在免疫细胞识别抗原和启动免疫应答过程中起着关键作用。平调饮可能通过调节这些受体的表达，增强免疫细胞对抗原的识别和应答能力，从而提高机体的免疫功能。通过提高机体的免疫功能，平调饮能够增强机体的抗癌能力。增强的免疫功能使机体能够更有效地识别和清除肿瘤细胞。活化的T淋巴细胞可以直接杀伤肿瘤细胞，巨噬细胞可以吞噬肿瘤细胞，同时细胞因子也可以通过多种途径抑制肿瘤细胞的生长和增殖。IL-2可以促进T淋巴细胞和NK细胞的增殖和活化，增强它们对肿瘤细胞的杀伤能力；IFN-γ可以抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡；TNF-α可以直接杀伤肿瘤细胞，或通过调节肿瘤微环境抑制肿瘤细胞的生长。因此，平调饮对机体免疫功能的调节作用是其发挥抗癌作用的重要机制之一，为其在原发性肝癌治疗中的应用提供了重要的理论依据。4.3平调饮延长肝癌小鼠生存期的机制探讨平调饮能够显著延长H22肝癌小鼠的生存时间，高剂量组的生命延长率高达60.8%，中剂量组为48.0%，低剂量组为24.8%，高、中剂量组的平均生存天数和生命延长率均显著高于阳性对照组。其延长生存期的机制是多方面的，主要包括抑制肿瘤生长、调节免疫功能以及改善机体状态等。从抑制肿瘤生长方面来看，平调饮中的多种中药成分发挥了协同作用。黄芪中的黄芪多糖能够诱导肿瘤细胞凋亡。细胞凋亡是一种程序性细胞死亡过程，对于维持机体的正常生理平衡和抑制肿瘤生长至关重要。黄芪多糖可能通过激活细胞内的凋亡信号通路，如线粒体途径和死亡受体途径，促使肿瘤细胞发生凋亡。在线粒体途径中，黄芪多糖可能影响线粒体膜电位，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而激活Caspase-9，最终激活下游的Caspase-3等凋亡执行蛋白，引发肿瘤细胞凋亡。在死亡受体途径中，黄芪多糖可能上调肿瘤细胞表面死亡受体的表达，如Fas、TNFR1等，使其与相应的配体结合，激活Caspase-8，进而激活Caspase-3等，诱导肿瘤细胞凋亡。当归中的阿魏酸可以抑制肿瘤细胞的增殖。肿瘤细胞的快速增殖是导致肿瘤生长和病情进展的重要因素。阿魏酸可能通过调节肿瘤细胞的细胞周期来抑制其增殖。细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期，阿魏酸可以使肿瘤细胞阻滞在G0/G1期，抑制其进入S期进行DNA合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖。阿魏酸可能通过抑制相关的细胞周期蛋白和激酶的活性，如CyclinD1、CDK4等，来调控细胞周期进程。熟地中的梓醇则可能通过抑制肿瘤细胞的有氧糖酵解，减少肿瘤细胞的能量供应，从而抑制肿瘤细胞的增殖。有氧糖酵解是肿瘤细胞获取能量的重要方式之一，与肿瘤的生长和转移密切相关。梓醇可能通过调节糖酵解相关酶的活性，如己糖激酶、磷酸果糖激酶等，抑制肿瘤细胞的有氧糖酵解，降低肿瘤细胞的能量代谢水平，从而抑制肿瘤细胞的增殖。在调节免疫功能方面，平调饮对机体的免疫细胞和免疫分子产生了积极影响。它可以促进T淋巴细胞的增殖和分化。T淋巴细胞在细胞免疫中发挥着核心作用，包括辅助性T细胞（Th）和细胞毒性T细胞（Tc）等。Th细胞能够分泌细胞因子，调节其他免疫细胞的功能，增强免疫应答；Tc细胞则可以直接杀伤肿瘤细胞。平调饮中的黄芪多糖可能通过激活T淋巴细胞表面的受体，促进T淋巴细胞的活化和增殖，增加Th细胞和Tc细胞的数量，从而提高细胞免疫功能。研究表明，黄芪多糖可以促进Th1型细胞因子（如IL-2、IFN-γ等）的分泌，抑制Th2型细胞因子（如IL-4、IL-6等）的分泌，使机体的免疫应答向Th1型偏移，增强细胞免疫功能。IL-2可以促进T淋巴细胞和NK细胞的增殖和活化，增强它们对肿瘤细胞的杀伤能力；IFN-γ可以抑制肿瘤细胞的增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。平调饮还可以增强巨噬细胞的吞噬能力。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分，能够吞噬和清除病原体、肿瘤细胞等异物。黄芪多糖可以增强巨噬细胞的吞噬活性，促进巨噬细胞分泌细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）等，这些细胞因子能够进一步激活其他免疫细胞，增强机体的免疫防御能力。TNF-α可以直接杀伤肿瘤细胞，或通过调节肿瘤微环境抑制肿瘤细胞的生长；IL-1可以促进T淋巴细胞的活化和增殖，增强免疫应答。此外，平调饮可能通过改善机体状态来延长肝癌小鼠的生存期。肿瘤的发生发展往往伴随着机体的营养不良、代谢紊乱等情况，这些因素会进一步削弱机体的抵抗力，影响患者的生存时间。平调饮中的当归含有多种营养成分，如多糖、氨基酸、维生素等，能够补充机体所需的营养物质，改善机体的营养状况。熟地中的梓醇具有抗氧化作用，可以减轻肿瘤患者体内的氧化应激损伤，保护细胞免受自由基的攻击。氧化应激与肿瘤的发生发展密切相关，过多的自由基会损伤细胞的DNA、蛋白质和脂质等生物大分子，导致细胞功能异常和肿瘤的发生发展。梓醇通过抗氧化作用，能够调节肿瘤微环境，间接抑制肿瘤的生长，从而有助于延长肝癌小鼠的生存期。4.4平调饮对原发性肝癌相关基因表达的调控机制基因表达调控在原发性肝癌的发生、发展过程中起着关键作用，众多基因参与其中，影响着肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡等生物学行为。甲胎蛋白（AFP）mRNA和黑色素瘤抗原-1（MAGE-1）mRNA是与原发性肝癌密切相关的基因标志物。AFP是一种在胎儿期由肝脏和卵黄囊合成的糖蛋白，在原发性肝癌患者中，AFP基因的表达常常异常升高，其mRNA水平也相应增加，AFPmRNA可作为肝癌细胞的标志物之一，其高表达与肝癌细胞的增殖、侵袭和转移能力密切相关。MAGE-1基因属于黑色素瘤抗原基因家族，在正常组织中通常不表达或低表达，但在多种肿瘤组织中异常表达，在原发性肝癌中，MAGE-1mRNA的表达与肿瘤的发生、发展及预后密切相关，它可能通过参与肿瘤细胞的免疫逃逸机制，帮助肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视和攻击。本实验结果显示，平调饮能够明显降低原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达。与对照组相比，治疗组给予平调饮治疗后，AFPmRNA和MAGE-1mRNA的表达水平显著降低（P\lt0.01）。这表明平调饮可能通过多种途径对这些基因的表达进行调控。从基因转录水平来看，平调饮中的中药成分可能影响转录因子与AFP和MAGE-1基因启动子区域的结合。转录因子是一类能够与基因启动子区域特异性结合，从而调控基因转录起始的蛋白质。黄芪中的某些活性成