2025年卫生高级职称考试(预防疾控微生物检验技术)历年参考题库附答案

2025年卫生高级职称考试(预防疾控微生物检验技术)历年参考题库附答案一、单项选择题（共15题，每题2分，共30分）1.革兰染色中最关键的步骤是（）A.结晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脱色D.沙黄复染答案：C解析：乙醇脱色是区分革兰阳性菌（G+）与革兰阴性菌（G）的关键步骤。G+菌细胞壁肽聚糖层厚，脱色后保留结晶紫碘复合物呈紫色；G菌肽聚糖层薄、脂质含量高，脱色后复合物被洗脱，复染后呈红色。2.分离培养流感病毒最常用的细胞是（）A.Vero细胞B.MDCK细胞C.HeLa细胞D.人胚肾细胞答案：B解析：MDCK（狗肾传代细胞）对流感病毒敏感，是分离培养流感病毒的首选细胞系。3.结核分枝杆菌的经典染色方法是（）A.革兰染色B.抗酸染色C.墨汁负染D.鞭毛染色答案：B解析：结核分枝杆菌细胞壁含大量分枝菌酸，普通染色法不易着色，需用抗酸染色（齐尼染色），染后呈红色，非抗酸菌呈蓝色。4.高压蒸汽灭菌法杀灭芽胞的标准条件是（）A.100℃，30分钟B.121℃，1520分钟C.132℃，35分钟D.62℃，30分钟答案：B解析：高压蒸汽灭菌的标准参数为103.4kPa（1.05kg/cm²）、121℃，维持1520分钟，可杀灭包括芽胞在内的所有微生物。5.检测霍乱弧菌的“O1群多价诊断血清”主要针对的抗原是（）A.鞭毛（H）抗原B.菌体（O）抗原C.荚膜（K）抗原D.菌毛抗原答案：B解析：霍乱弧菌的O抗原是群和型的分类依据，O1群包括古典生物型和埃尔托生物型，诊断血清通过检测O抗原进行分型。6.用于检测细菌产酶能力的β内酰胺酶试验，常用底物是（）A.头孢硝噻吩B.苯唑西林C.亚胺培南D.阿莫西林答案：A解析：头孢硝噻吩是β内酰胺酶的显色底物，被酶水解后由黄色变为红色，可快速检测β内酰胺酶活性。7.血平板上“卫星现象”提示可能为（）A.流感嗜血杆菌B.肺炎链球菌C.金黄色葡萄球菌D.大肠埃希菌答案：A解析：流感嗜血杆菌生长需要V因子（NAD）和X因子（血红素），当与金黄色葡萄球菌共同培养时，葡萄球菌合成V因子，使流感嗜血杆菌在其周围形成小菌落，称为“卫星现象”。8.病毒中和试验的原理是（）A.病毒与抗体结合后失去感染性B.病毒被抗体直接裂解C.抗体激活补体溶解病毒D.抗体促进吞噬细胞清除病毒答案：A解析：中和试验利用特异性抗体与病毒结合，阻断病毒与宿主细胞受体的结合，使病毒失去感染性，通过观察细胞病变抑制情况判断抗体效价。9.结核菌素试验（PPD）的原理是（）A.Ⅰ型超敏反应B.Ⅱ型超敏反应C.Ⅲ型超敏反应D.Ⅳ型超敏反应答案：D解析：PPD试验是迟发型超敏反应（Ⅳ型），基于致敏T细胞再次接触结核分枝杆菌抗原后释放淋巴因子，引起局部炎症反应。10.检测食品中沙门菌时，前增菌常用培养基是（）A.亚硒酸盐胱氨酸肉汤B.四硫磺酸钠肉汤C.缓冲蛋白胨水D.营养肉汤答案：C解析：沙门菌前增菌使用缓冲蛋白胨水（BPW），可恢复受损细菌的活性；选择性增菌使用亚硒酸盐胱氨酸肉汤或四硫磺酸钠肉汤。11.用于区分肠杆菌科细菌与非发酵菌的主要试验是（）A.氧化酶试验B.触酶试验C.吲哚试验D.葡萄糖发酵试验答案：D解析：肠杆菌科细菌多为发酵型（分解葡萄糖产酸产气），非发酵菌（如铜绿假单胞菌）多为氧化型或不分解葡萄糖，葡萄糖发酵试验是关键鉴别点。12.新型冠状病毒（SARSCoV2）的主要检测靶标基因是（）A.E基因、N基因B.HA基因、NA基因C.OmpA基因D.16SrRNA基因答案：A解析：SARSCoV2核酸检测通常选择保守的E（包膜蛋白）基因和N（核衣壳蛋白）基因作为靶标，部分试剂同时检测ORF1ab基因。13.实验室生物安全二级（BSL2）的核心要求是（）A.全排式生物安全柜B.压差控制（50Pa）C.人员需穿正压防护服D.禁止非工作人员进入答案：D解析：BSL2实验室要求禁止非授权人员进入，操作可能产生气溶胶时使用生物安全柜，配备高压灭菌器等；全排式安全柜和压差控制是BSL3的要求。14.鉴定金黄色葡萄球菌的关键试验是（）A.凝固酶试验B.触酶试验C.氧化酶试验D.乳糖发酵试验答案：A解析：凝固酶试验是鉴别致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌）与非致病性葡萄球菌（表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌）的关键，致病性菌株多为凝固酶阳性。15.检测支原体时，培养基中需添加的关键成分是（）A.胆固醇B.葡萄糖C.血液D.青霉素答案：A解析：支原体无细胞壁，细胞膜含固醇类物质，培养基需添加胆固醇或血清以提供固醇，促进其生长。二、多项选择题（共10题，每题3分，共30分，多选、错选、漏选均不得分）1.关于PCR技术的质量控制，正确的有（）A.需设置阳性对照、阴性对照、空白对照B.引物设计需避免发夹结构和二聚体C.扩增产物电泳时需使用DNA分子量标准D.实验区域需严格分区（试剂准备区、标本处理区、扩增区、产物分析区）答案：ABCD解析：PCR质量控制包括对照设置、引物设计（避免二级结构）、产物验证（分子量标准）及区域分区（防止交叉污染）。2.可引起食物中毒的细菌包括（）A.金黄色葡萄球菌B.沙门菌C.副溶血性弧菌D.蜡样芽胞杆菌答案：ABCD解析：金黄色葡萄球菌（肠毒素）、沙门菌（内毒素）、副溶血性弧菌（耐热肠毒素）、蜡样芽胞杆菌（腹泻毒素/呕吐毒素）均可引起食物中毒。3.关于结核分枝杆菌的特性，正确的有（）A.耐干燥，在痰液中可存活68个月B.对乙醇敏感，75%乙醇5分钟可杀灭C.对紫外线敏感，直接日光照射27小时可杀灭D.营养要求高，需含蛋黄、甘油、马铃薯的罗氏培养基答案：ABCD解析：结核分枝杆菌耐干燥、耐酸碱，但对乙醇、紫外线敏感；罗氏培养基含蛋黄（提供脂质）、甘油（碳源）、马铃薯（营养）等，是其常用培养基。4.实验室检测HIV的常用方法包括（）A.抗体检测（ELISA）B.抗原检测（p24抗原）C.核酸检测（HIVRNA）D.病毒分离培养答案：ABC解析：HIV检测以抗体检测（初筛）、抗原抗体联合检测（缩短窗口期）、核酸检测（早期诊断）为主；病毒分离培养因技术复杂、耗时，仅用于科研。5.关于细菌L型，正确的描述是（）A.细胞壁缺陷型B.可回复为原菌C.在高渗培养基中生长D.革兰染色多为阴性答案：ABCD解析：细菌L型因细胞壁缺失，需高渗环境维持形态；革兰染色常呈阴性；去除诱导因素后可回复为原菌。6.用于检测病毒感染的血清学试验包括（）A.中和试验B.血凝抑制试验C.补体结合试验D.肥达试验答案：ABC解析：肥达试验用于检测伤寒/副伤寒沙门菌抗体，属于细菌血清学试验；中和、血凝抑制、补体结合试验均为病毒血清学检测方法。7.实验室生物安全防护的“一级屏障”包括（）A.生物安全柜B.个人防护装备（PPE）C.实验室建筑结构D.高压灭菌器答案：AB解析：一级屏障是保护操作者和实验室环境的措施（生物安全柜、PPE）；二级屏障是实验室建筑和设施（如压差、通风系统）。8.大肠埃希菌的毒力因子包括（）A.肠毒素（ST/LT）B.志贺样毒素（SLT）C.黏附素（如CFA）D.荚膜答案：ABC解析：肠产毒型大肠埃希菌（ETEC）产生ST/LT肠毒素；肠出血型（EHEC）产生SLT；肠致病型（EPEC）通过黏附素定植；大肠埃希菌一般无荚膜（部分菌株有微荚膜）。9.关于真菌的培养特性，正确的有（）A.多数真菌为需氧生长B.浅部真菌培养基需添加放线菌酮抑制细菌C.深部真菌常用沙保弱培养基（SDA）D.培养温度多为2528℃（丝状真菌）或3537℃（酵母型真菌）答案：ABD解析：沙保弱培养基（SDA）是真菌通用培养基，深部真菌（如隐球菌）也可在此培养；放线菌酮抑制腐生真菌，用于分离浅部致病真菌；丝状真菌（如皮肤癣菌）2528℃培养，酵母型（如白假丝酵母菌）3537℃培养。10.关于消毒与灭菌的区别，正确的有（）A.消毒仅杀灭病原微生物，灭菌杀灭所有微生物B.消毒不能杀灭芽胞，灭菌可杀灭芽胞C.化学消毒剂均可达到灭菌效果D.紫外线属于消毒方法，不能完全灭菌答案：ABD解析：灭菌要求杀灭所有微生物（包括芽胞），消毒仅杀灭病原微生物（不一定杀灭芽胞）；多数化学消毒剂为消毒水平，仅高效消毒剂（如戊二醛）可达到灭菌；紫外线穿透力弱，属于消毒方法。三、填空题（共10题，每空1分，共10分）1.细菌的基本结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质和__________。答案：核质（拟核）2.病毒的测量单位是__________，需用电子显微镜观察。答案：纳米（nm）3.检测梅毒螺旋体的特异性试验是__________（举1例）。答案：梅毒螺旋体颗粒凝集试验（TPPA）/荧光密螺旋体抗体吸收试验（FTAABS）4.血培养的最佳采集时间是__________（发热初期/高热期/退热期）。答案：发热初期（或寒战期）5.支原体与细菌的主要区别是__________。答案：无细胞壁6.流感病毒分型的依据是__________抗原（HA/NA/核蛋白）。答案：核蛋白（NP）和基质蛋白（M）7.志贺菌的主要致病物质是__________，可引起脓血便。答案：内毒素（或志贺毒素）8.实验室常用__________试验检测细菌的动力（举1例）。答案：半固体穿刺培养/悬滴法9.新型隐球菌的经典染色方法是__________。答案：墨汁负染10.消毒牛奶的常用方法是__________，条件为62℃30分钟或71.7℃15秒。答案：巴氏消毒法四、简答题（共5题，第12题各6分，第35题各8分，共32分）1.（封闭型）简述ELISA双抗体夹心法的基本原理及主要步骤。答案：原理：用已知抗体包被固相载体，加入待测样本（含抗原），抗原与固相抗体结合；洗去未结合物质后，加入酶标记的特异性抗体（二抗），形成“固相抗体抗原酶标抗体”复合物；加入底物，酶催化底物显色，颜色深浅与待测抗原量成正比。步骤：①包被（抗体固定于固相）；②封闭（阻断非特异性结合）；③加待测样本（抗原结合）；④加酶标二抗；⑤加底物显色；⑥终止反应并测吸光度值。2.（封闭型）简述结核分枝杆菌的致病物质及所致疾病。答案：致病物质：①脂质（索状因子、蜡质D、分枝菌酸）：抑制吞噬细胞活化，引起慢性肉芽肿；②蛋白质（结核菌素）：与脂质结合引发迟发型超敏反应；③多糖：参与免疫应答。所致疾病：①肺结核（原发感染、继发感染）；②肺外结核（淋巴结结核、结核性脑膜炎、骨结核等）。3.（开放型）某实验室检测疑似登革热患者血清，IgM抗体阴性、IgG抗体阳性，可能的解释有哪些？需补充哪些检测？答案：可能解释：①患者处于感染后期（IgG持续时间长，IgM已转阴）；②既往感染过登革病毒（IgG为回忆性应答）；③本次感染为二次感染（IgG快速升高，IgM可能被抑制）；④检测试剂敏感性不足（假阴性）。需补充检测：①登革病毒核酸（RTPCR）检测急性期血清，确认是否存在病毒血症；②间隔1014天采集恢复期血清，检测IgG抗体滴度（4倍以上升高支持近期感染）；③抗原检测（NS1抗原），用于早期诊断（感染后17天阳性）。4.（开放型）简述实验室处理疑似霍乱样本的生物安全要求及检测流程。答案：生物安全要求：①样本运输需符合UN3373标准（B类感染性物质），使用三层包装；②实验室需在BSL2及以上级别操作，处理可能产生气溶胶的步骤（如接种、匀浆）需在生物安全柜中进行；③人员穿戴防护服、手套、护目镜，操作后彻底消毒（75%乙醇或含氯消毒剂）。检测流程：①样本处理（粪便/肛拭子接种TCBS琼脂、碱性蛋白胨水增菌）；②形态学检查（革兰染色为G弧菌，悬滴法观察“鱼群样”动力）；③生化鉴定（氧化酶阳性，发酵蔗糖产酸，霍乱红反应阳性）；④血清学试验（O1/O139群诊断血清凝集试验）；⑤毒力基因检测（ctxA基因PCR）。5.（开放型）分析实验室进行细菌药敏试验时，结果出现“中介（I）”的可能原因及处理原则。答案：可能原因：①细菌接种量不准确（过多或过少）；②培养基质量问题（pH、琼脂厚度不符合CLSI标准）；③药物纸片失效（保存不当导致效价降低）；④细菌本身存在异质性耐药（部分亚群耐药）；⑤检测方法局限性（如Etest与纸片扩散法结果差异）。处理原则：①复核试验条件（接种量、培养基、纸片有效期）；②重复试验确认结果；③若为临床关键菌株（如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌），建议使用微量肉汤稀释法（金标准）重新检测；④结合临床情况（感染部位、药物浓度）判断是否调整治疗方案（中介结果提示需提高药物剂量或选择其他药物）。五、应用题（共1题，18分）案例：某社区暴发急性胃肠炎，10例患者出现腹痛、腹泻（水样便）、呕吐，无发热。采集患者粪便样本，镜检未见白细胞，革兰染色见G短小杆菌。实验室检测结果：TCBS琼脂