2025年艾梅乙技能操作考试试题及答案

2025年艾梅乙技能操作考试试题及答案一、操作题（共4题，每题20分，合计80分）（一）HIV快速检测试剂（免疫层析法）操作流程及质量控制要求：模拟对门诊患者血清样本进行HIV抗体快速检测，需完整演示从样本接收至结果判读的全流程，并说明关键质量控制环节。操作步骤及评分要点：1.样本接收与核对（2分）：核对样本标识（姓名、ID号、采集时间）与检测申请单一致，检查样本状态（无溶血、脂血、凝块，血清量≥0.3ml），记录样本接收时间。2.环境与试剂准备（3分）：检测环境温度控制在15-30℃（需现场确认温度计读数），湿度≤80%；检查试剂有效期（需展示试剂标签并口述有效期），平衡至室温（静置15分钟）；准备一次性手套、计时器、生物安全垃圾袋、消毒棉球（75%乙醇）。3.加样操作（5分）：戴手套，用移液器吸取50μl血清样本（需展示移液器量程调节至50μl并确认校准标识），垂直滴加于检测卡加样孔（每孔1滴，避免气泡），立即启动计时器。4.孵育与观察（5分）：静置15分钟（严格计时，中途不得移动检测卡），15-20分钟内判读结果（超过20分钟结果无效需重新检测）。观察检测线（T线）与质控线（C线）显色情况：C线未显色为无效试验（需复述原因：试剂失效或操作错误）；C线显色、T线未显色为阴性；C线显色、T线显色为阳性（需说明“阳性”为初筛结果，需进一步确证）。5.质量控制环节（5分）：每批次检测需同时做阳性对照（已知HIV抗体阳性血清）和阴性对照（已知HIV抗体阴性血清），对照结果需符合预期（阳性对照T/C线均显色，阴性对照仅C线显色）；记录检测时间、操作人员、试剂批号、对照结果；检测后废弃物按医疗废物处理（检测卡放入黄色医疗垃圾袋，移液器吸头放入利器盒，台面用1000mg/L含氯消毒液擦拭）。（二）梅毒螺旋体血清学检测（TPPA法）样本稀释与加样操作要求：使用患者血清（1:80稀释）进行TPPA检测，需正确完成样本稀释、微板加样及孵育步骤。操作步骤及评分要点：1.稀释液准备（2分）：取专用稀释液（含阻断剂），检查无浑浊、沉淀（需展示稀释液瓶身并口述“无异常”）。2.样本初稀释（4分）：用移液器吸取25μl患者血清（原倍）加入第1孔（标记为“1:2”），加25μl稀释液，吹吸3次混匀；取25μl至第2孔（1:4），重复稀释至第6孔（1:64）；第7孔加25μl稀释液（阴性对照），第8孔加25μl阳性对照血清（需口述“第1-6孔为患者样本倍比稀释，1:2至1:64”）。3.致敏粒子与未致敏粒子加样（6分）：第1-4孔加25μl未致敏粒子（NS粒子），第5-8孔加25μl致敏粒子（TS粒子）（需核对试剂瓶标签“NS”“TS”无误）；加样时移液器头距孔底2-3mm，避免交叉污染。4.孵育与判读准备（5分）：微板水平静置（避免振动），25℃孵育2小时（需设置计时器并展示）；孵育后轻拍微板侧面，观察粒子凝集状态（需说明“NS孔应无凝集，TS孔出现均匀凝集为阳性”）。5.关键注意事项（3分）：稀释过程中需更换吸头（每孔1个）；TS粒子使用前需摇匀（上下颠倒5次）；孵育温度偏离25℃±2℃时需延长或缩短孵育时间（如20℃需孵育2.5小时）。（三）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）ELISA检测洗板操作要求：完成包被有抗-HBs的96孔板洗板流程，需正确使用洗板机并处理异常情况。操作步骤及评分要点：1.洗板液配制（2分）：用去离子水稀释浓缩洗板液（10×）至1×（需计算：100ml浓缩液+900ml水），pH值7.2-7.4（用pH试纸检测并口述结果），无絮状物。2.洗板机参数设置（3分）：设置每孔加液量300μl，浸泡时间30秒，洗涤次数5次（需展示洗板机屏幕参数并确认“浸泡-抽吸”模式）。3.洗板操作（6分）：弃去孔内液体（扣于吸水纸上拍干，避免孔间交叉污染）；启动洗板机，观察加液是否均匀（无漏加、溢出现象）；每轮洗涤后拍干（最后一次拍干后倒置10秒，确认无残留液体）。4.异常情况处理（5分）：若某孔液体未吸净（可见残留），用单道移液器吸取残留液（需更换吸头）；若洗板机堵塞（某列无液体喷出），立即关闭机器，检查针头是否堵塞（用细针疏通），更换洗板液后重新洗涤该列。5.质量控制（4分）：每块板洗涤后需做空白对照（仅加显色液），OD值应≤0.1（需口述“空白孔OD值异常提示洗板不彻底”）；记录洗板机型号、洗板液批号、洗涤时间。（四）生物安全柜内样本处理操作（HIV阳性血清）要求：在Ⅱ级A2型生物安全柜内完成HIV阳性血清的分装（500μl/管），需符合生物安全规范。操作步骤及评分要点：1.安全柜准备（2分）：提前30分钟启动安全柜（需确认紫外线灯已关闭，风机运行正常，压差表显示-10Pa至-15Pa）；用75%乙醇擦拭台面（从里向外，从前到后），放置所需物品（移液器、吸头、离心管、标记笔，距前窗10cm，避免阻挡气流）。2.个人防护（3分）：穿戴一次性防护服（袖口扎紧）、双层手套（内层乳胶，外层丁腈，手套边缘覆盖防护服袖口）、N95口罩（做密合性测试：双手捂住口罩呼气，无漏气）、护目镜（无破损）。3.样本分装（6分）：打开血清管（倾斜45°，避免气溶胶），用移液器吸取500μl（调节量程至500μl，检查吸头密封性）；转移至离心管时，吸头深入管内1/3处缓慢释放（避免喷溅）；每分装1管更换吸头（丢弃至安全柜内利器盒）；分装后旋紧管盖（确认无液体附着管口）。4.台面清洁与废弃物处理（5分）：操作结束后，用1000mg/L含氯消毒液擦拭台面（作用15分钟）；阳性血清管放入防漏运输盒（内层防水袋，外层生物危害标识）；一次性物品放入安全柜内黄色医疗垃圾袋（鹅颈式封口），利器盒满3/4时封闭。5.安全柜关闭（4分）：取出所有物品，关闭风机前运行5分钟（净化内部空气）；填写使用记录（包括操作人员、操作时间、样本类型、异常情况）。二、简答题（共3题，每题10分，合计30分）1.简述乙肝病毒（HBV）血清学“大三阳”与“小三阳”的检测指标及临床意义。答案：大三阳指标为HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗-HBc（+），提示病毒复制活跃，传染性强；小三阳指标为HBsAg（+）、抗-HBe（+）、抗-HBc（+），通常提示病毒复制减弱或停止，传染性降低（部分患者可能存在HBVDNA阳性，需结合核酸检测判断）。2.梅毒非特异性抗体（RPR）与特异性抗体（TPPA）检测的联合应用原则是什么？答案：RPR用于初筛和疗效观察（滴度变化反映活动性），TPPA用于确证（阳性提示感染过梅毒，终身阳性）；初筛RPR阳性需用TPPA确证，避免生物学假阳性（如自身免疫病、妊娠）；治疗后RPR滴度应下降4倍以上（如从1:32降至1:8），TPPA仍阳性不提示复发。3.HIV快速检测出现“灰区”结果时应如何处理？答案：灰区指检测结果接近临界值（OD值在Cut-off值的0.9-1.1倍），需重新检测原样本（用同一试剂重复）；若重复结果仍为灰区，换用另一种原理快速试剂检测（如化学发光法）；两种试剂均灰区或不一致，需采集静脉血送确证实验室做WB试验或核酸检测（HIVRNA）；全程记录样本信息、检测时间、试剂批号及处理过程。三、案例分析题（共1题，40分）患者男性，35岁，因“术前筛查”就诊，检测结果如下：HIV抗体快速检测（胶体金法）阳性，梅毒RPR1:16阳性，TPPA阳性，HBsAg阳性（ELISA法S/CO=3.2），抗-HBc阳性，抗-HBs阴性，HBeAg阴性，抗-HBe阳性。问题1：请综合判读各检测结果的临床意义。（15分）答案：HIV抗体快速检测阳性为初筛结果，需进一步做确证试验（如WB或核酸检测）以确认感染状态；梅毒RPR1:16阳性、TPPA阳性提示现症梅毒感染（需结合病史判断是否为早期或晚期）；乙肝血清学结果为HBsAg（+）、抗-HBc（+）、抗-HBe（+）（小三阳），HBeAg（-）、抗-HBs（-），提示HBV感染，病毒复制可能处于低水平（需检测HBVDNA定量评估传染性）。问题2：针对该患者的样本处理，需重点注意哪些生物安全事项？（15分）答案：样本标识需标注“HIV初筛阳性”“梅毒阳性”“乙肝阳性”三重生物危害标识；样本运输需使用双层防漏容器（内层防水袋，外层硬质盒），填写《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输包装说明》；实验室检测时需在Ⅱ级生物安全柜内操作，避免气溶胶产生（如禁止反复吹打样本）；检测后废弃物分类处理（液体废弃物用10000mg/L含氯消毒液浸泡2小时，固体废弃物高压蒸汽灭菌（121℃，30分钟）后按医疗废物处理）；检测人员需穿戴符合要求的防护装备（防护服、双层手套、护目镜），操作后立即用肥皂流动水洗手（时间≥20秒）。问题3：若该患者HIV确证试验（WB）结果为gp160、gp120、p24条带阳性，应如何报告？后续需提供哪些医疗建议？（10分）答案：WB结果符合HIV感染确诊标准（至少2条env带（gp160/gp120）和1条p24带阳性），应报告“HIV抗体阳性”；后续建议：转介至定点医院进行CD4+T淋巴细