（正式版）DB12∕T 1359-2024 《水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类、酰胺醇类抗生素残留量的测定+液相色谱-质谱-质谱法-3》

水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、磺胺类酰胺醇类抗生素残留的测定液相色谱-质谱/质谱法Determinationofquinolones2025-01-01实施2025-01-01实施天津市市场监督管理委员会发布本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由天津市农业农村委提出并归口。本文件起草单位：天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心、山东省科学院海洋仪器仪表研本文件主要起草人：陈永平、成振华、王辉、韩现芹、时文博、史艳艳、高丽娜、王愿宁、高丽、李灏、曹建新、易伟、苏梦寒。工2的测定液相色谱-质谱/质谱法啉、磺胺异噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共17种抗生仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T20195动物饲料试样的制备5.1.1甲醇(CH₃OH,CAS号：67-56-1):色谱纯。5.1.2乙腈(CH₃CN,CAS号：75-05-8):色谱纯。5.1.3甲酸(HCOOH,CAS号：64-18-6):色谱纯。35.1.4二氯甲烷(CH₂Cl₂,CAS号：75-09-2):分析纯。5.1.5乙酸乙酯(C4H₈O₂,CAS号：141-78-6):分析纯。5.1.6氯化钠(NaCl,CAS号：7647-14-5):分析纯。5.1.7乙酸铵(CH₃COONH,CAS号：631-61-8):分析纯。5.2溶液配制5.2.1乙酸铵(2.0mmoL/L)-甲酸溶液(0.1%):称取0.077g无水乙酸铵，用0.1%甲酸水溶液溶解并稀释至500mL。5.2.2甲醇-水溶液(15+85,体积比):量取甲醇15mL加入85mL水中，混匀。5.2.3甲酸-乙腈(0.1+99.9,体积比):量取甲酸0.5mL,加乙腈稀释至500mL,混匀。5.3标准品霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各适量(相当于各活性成分10mg),精密称定，于各自容量瓶中，喹诺酮光-18℃以下保存，有效期1年。500μg/mL。取氘代磺胺邻二甲氧嘧啶、氘代磺胺间二甲氧嘧啶、氘代诺氟沙星、氘代环丙沙星、氘代恩诺沙星、氘代氯霉素内标各适量(相当于各活性成分5mg),精密称定，于各自容量瓶中，用甲醇溶解稀释定容至10mL。配制成浓度为500μg/mL同位素内标标准储备液，避光-18℃以下保存准确吸取各喹诺酮类和磺胺类标准储备液(5.4.1)适量，用甲醇稀释制成1.0μg/mL混合标准工准确吸取各酰胺醇类标准储备液(5.4.1)适量，用甲醇稀释制成氯霉素、氟苯尼考0.1μg/mL,甲砜霉素0.5μg/mL混合标准工作液，避光4℃冷准确吸取各磺胺类和喹诺酮类内标标准储备液(5.4.2)适量，用甲醇稀释制成10.0μg/mL混合准确吸取各酰胺醇类内标标准储备液(5.4.2)适量，用甲醇稀释制成1.0μg/mL混合内标标准工45.5材料通过式固相萃取柱，200mg/6mL,或性能相当者。6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾(ESI)离子源。6.2分析天平：感量0.01g、0.01mg。6.3高速离心机：转速大于10000r/min。6.4超声波震荡仪。6.5涡旋振荡器。6.6氮吹仪。6.7粉碎装置：如杵或研钵。6.8筛：筛孔为1mm金属网。7试样制备7.1试样制备7.1.1固态非规范药品按GB/T20195的规定制备试样，至少100g,粉碎使其全部通过1.0mm孔径的分析筛，装入密闭容器中备用。7.1.2液态非规范药品将样液过0.45μm滤膜，收集样液体积20mL,于密闭容器中保存。7.2试样保存将试样于4℃及以下条件下保存。8分析步骤8.1样品处理称取非规范药品0.1g(准确至0.01g),用水稀释至100mL,涡旋1min,超声波超声5min,取5mL置于50mL离心管中，加入50μL混合内标标准使用液(5.4.5、5.4.6),加入2.0gNaCl,再加入10mL酸化乙腈，涡旋1min,超声波超声5min,8000r/min离心3min,取上清液过固相萃取柱于20mL玻璃离心管中，再加入5mL酸化乙腈，重复上述操作，2mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于40℃条件下，氮气吹至近干，残留物加入甲醇溶液(5.2.2)1mL,充分涡旋混匀，转移至1.5mL离心管中，20000r/min离心5min,取上清液过0.2μm有机相滤膜后，取100μL滤液，用甲醇溶液(5.2.2)定容至10.0mL,上机测定。8.2测定8.2.1磺胺类与喹诺酮类58.2.1.1.2柱温：35℃。8.2.1.1.5流动相：甲醇-(乙酸铵-甲酸溶液，5.2.1);洗脱程序见表1。时间(min)1688.2.1.2.9离子源Gas8.2.1.2.10离子源Gas2:0.目标化合物V6恩诺沙星氧氟沙星培氟沙星洛美沙星嘧啶嘧啶分别准确移取标准工作液适量，甲醇溶液(5.2.1)定容至1mL,喹诺酮类与磺胺类稀释成质量浓8.2.2.1.1色谱柱：Ci色谱柱，1.7μm,100mm×2.1mm(内径),或性能相当。8.2.2.1.2柱温：35℃。8.2.2.1.3流动相：甲醇-水；流动相洗脱程序见表3。7时间(min)1688.2.2.2.2喷雾电压：8.2.2.2.8驻留时间8.2.2.2.9离子源Gasl:0.6MPa。8.2.2.2.10离子源Gas2:0.2MPa。8.2.2.2.11多反应监测母离子、子离子、解簇电压和碰撞能量见表4。目标化合物V甲砜霉素分别准确移取标准工作液适量，甲醇溶液(51.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL,甲砜霉素稀释至2.5ng/mL、5.0ng/mL、谱仪测定。8离子丰度比(%)允许相对偏差(%)试样中各药物残留量以质量分数w计，单位为毫克每千克(mgkg),按公式(1)或公式(2)计9P₁——标准工作液中被测物的质量浓度数值，单位为毫克每升(mg/L);A——试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；m——试样质量数值，单位为(g).计算结果以重复性条件下获得的2次独立测定结果的算术平均值表示，保留2位有效数字，含量超110正确度和精密度磺胺类、喹诺酮类、酰胺醇类测定回收率为70%～110%。本方法的批内相对标准偏差小于15%,批间相对标准偏差小于15%。本实验条件下非规范药品中喹诺酮类、磺胺类定量限为1.0mg/kg;氯霉素、氟苯尼考定量限为0.1(规范性)17种抗生素中英文对照索引药物中文名药物英文名123456789甲砜霉素(资料性)17种抗生素多反应监测(MRM)质量色谱图Max.1.0e6Max.1.5e6Max.1.2e6pairs):311.001/156.000DaID:linerjiayangMax.1.2e6■XICof+MRM(33pairs):279.000/1 ..Int…Int…MRM(33pairs):365.300/321.300DaID:Enrofloxacin-D5fromSample118(.….MRM(33pairs)340.300/3甲砜霉素