抗体药物纯化柱再生调试技师（初级）考试试卷及答案

抗体药物纯化柱再生调试技师（初级）考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.抗体纯化常用的亲和层析柱多为______柱。2.柱再生时，高盐溶液常用的试剂是______。3.纯化柱再生前需评估的关键参数包括柱压、回收率和______。4.再生常用强碱NaOH的常用浓度为______（单位：M）。5.去除残留抗体的洗脱液pH通常调至______（范围）。6.纯化柱保存温度一般控制在______℃（范围）。7.再生后需用______缓冲液冲洗至流出液pH中性。8.柱再生过程中，流速一般不超过______cm/h（常见值）。9.废弃再生试剂需按______类危废处理（含强碱）。10.再生后需记录的核心参数包括柱压、回收率和______。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.抗体纯化柱再生最常用的强碱是（）A.NaOHB.HClC.TrisD.NaCl2.柱再生前评估的核心指标不包括（）A.回收率B.柱压C.流速D.抗体浓度3.再生后平衡的主要目的是（）A.去除再生试剂B.提高柱压C.破坏填料D.加速降解4.初级技师操作时，柱压上限一般不超过（）A.0.3MPaB.1MPaC.2MPaD.5MPa5.下列哪种情况无需立即再生柱（）A.回收率下降15%B.柱压升高25%C.流速正常D.峰形变宽6.柱保存液中常添加的抑菌剂是（）A.NaN3B.EDTAC.SDSD.尿素7.再生过程中，冲洗体积的常用单位是（）A.mLB.CV（柱体积）C.LD.cm³8.去除残留蛋白的常用试剂是（）A.0.1MNaOHB.1MHClC.5MNaClD.纯水9.柱再生后需检测的关键指标是（）A.抗体纯度B.回收率C.缓冲液浓度D.试剂有效期10.操作纯化柱时，错误的做法是（）A.流速稳定B.避免气泡C.柱干柱D.记录参数三、多项选择题（每题2分，共20分）1.柱再生前需确认的事项包括（）A.柱型号及规格B.再生试剂有效期C.缓冲液pH值D.操作温度2.再生过程中需实时监测的参数有（）A.柱压B.流出液pHC.流速D.试剂浓度3.抗体纯化柱常见再生步骤包括（）A.低pH洗脱B.强碱冲洗C.去脂处理D.平衡缓冲液冲洗4.再生后需执行的操作有（）A.检测回收率B.充满保存液C.贴新标签D.丢弃旧柱5.影响再生效果的因素包括（）A.再生试剂浓度B.冲洗体积C.操作温度D.缓冲液pH6.纯化柱保存的正确做法是（）A.2-8℃冷藏B.充满保存液C.定期检查D.室温存放7.再生时安全防护需佩戴（）A.耐酸碱手套B.护目镜C.口罩D.工作服8.废弃再生试剂的处理要求是（）A.分类存放B.中和后排放C.直接丢弃D.记录处理量9.柱性能下降的常见表现是（）A.回收率降低B.柱压升高C.峰形变宽D.流速加快10.再生后平衡的合格标准是（）A.流出液pH中性B.电导稳定C.柱压正常D.流速达标四、判断题（每题2分，共20分）1.纯化柱再生时，NaOH浓度越高再生效果越好（）2.柱保存时需充满保存液，避免干柱（）3.再生后无需检测回收率即可直接使用（）4.流速过快会导致柱压升高（）5.所有抗体柱再生步骤完全相同（）6.再生试剂有效期过期仍可使用（）7.操作时避免柱内产生气泡（）8.保存液失效不影响后续再生效果（）9.初级技师可独立操作所有型号纯化柱（）10.再生后需记录再生日期及参数（）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述抗体纯化柱再生的基本步骤。2.简述纯化柱再生时的安全注意事项。3.简述柱保存不当的常见后果。4.简述再生后回收率检测的简单方法。六、讨论题（每题5分，共10分）1.若再生后柱回收率仍低于70%，分析可能原因及解决方法。2.讨论如何判断纯化柱是否需要再生。---答案一、填空题答案1.ProteinA/G2.NaCl3.峰形（或流速衰减）.5-3.06.2-87.平衡（或PBS/Tris）8.150（或100-200）9.腐蚀10.峰形（或冲洗体积）二、单项选择题答案1.A2.D3.A4.A5.C6.A7.B8.A9.B10.C三、多项选择题答案1.ABCD2.ABC3.ABD4.AB5.ABCD6.ABC7.ABCD8.ABD9.ABC10.ABCD四、判断题答案1.×2.√3.×4.√5.×6.×7.√8.×9.×10.√五、简答题答案1.①评估柱性能（回收率、柱压、峰形）；②用低pH洗脱液（pH2.5-3.0柠檬酸缓冲液）冲洗1-2CV去除残留抗体；③用0.1MNaOH冲洗1-2CV去蛋白；④用平衡缓冲液冲洗至流出液pH中性；⑤用含NaN3的保存液充满柱体；⑥记录再生参数及结果。2.①佩戴耐酸碱手套、护目镜、口罩；②NaOH稀释时缓慢加碱并搅拌，避免飞溅；③操作保持通风，防止试剂挥发；④废弃试剂分类存放，中和后处理；⑤操作后清洁台面，洗手。3.①温度过高导致填料降解，柱压升高；②未充满保存液导致干柱，填料收缩；③保存液失效导致微生物污染，再生难度增加；④回收率持续下降，影响后续纯化。4.①取标准抗体溶液上样；②按常规方法纯化；③收集洗脱峰，测定蛋白浓度；④计算回收率=（洗脱峰蛋白量/上样蛋白量）×100%；⑤与再生前回收率对比判断效果。六、讨论题答案1.可能原因：①再生试剂浓度不足（如NaOH<0.1M）；②冲洗体积不够（<2CV）；③柱内有不可逆污染（如蛋白交联）；④缓冲液pH错误（如低pH洗脱液pH>3.0）。解决方法：①调整NaOH浓度至0.2M；②增加冲洗体积至3CV；③更换新柱（不可逆污染）