登革热疫苗的免疫原性强化策略

登革热疫苗的免疫原性强化策略演讲人01登革热疫苗的免疫原性强化策略02引言：登革热的流行病学挑战与疫苗研发的迫切性03抗原设计优化：构建高效免疫原的分子基础04佐剂系统革新：打破免疫耐受的“催化剂”05递送系统创新：精准调控抗原的“导航仪”06免疫调节策略：平衡保护性免疫与免疫病理07联合免疫方案：协同提升免疫原性的“组合拳”08总结与展望：迈向更安全高效的登革热疫苗时代目录01登革热疫苗的免疫原性强化策略02引言：登革热的流行病学挑战与疫苗研发的迫切性登革热的全球流行态势与疾病负担登革热是由登革病毒（Denguevirus,DENV）引起的急性蚊媒传染病，主要通过伊蚊（埃及伊蚊和白纹伊蚊）传播。据世界卫生组织（WHO）数据，全球约40%人口面临登革热风险，每年估计有1亿至4亿感染病例，其中约50万例发展为重症，如登革出血热（DHF）或登革休克综合征（DSS），病死率高达20%。近年来，登革热流行范围持续扩大，从热带、亚热带地区向温带地区蔓延，东南亚、西太平洋地区（如巴西、印度、菲律宾）为高发区，我国广东、云南、广西等地也面临持续输入性及本地传播风险。登革热的快速蔓延与气候变化、城市化进程加速、蚊媒滋生环境扩大等因素密切相关，已成为全球公共卫生领域的重大挑战。现有疫苗的局限性：免疫原性不足与ADE风险目前，全球唯一获批的登革热疫苗为CYD-TDV（Dengvaxia®），一种减活四价疫苗，在登革热流行地区（如东南亚）的III期临床试验显示，其对既往感染者的总体保护率为56.5%，但对血清型2（DENV-2）的保护率仅为35.2%，且对未感染者的接种后存在抗体依赖增强（Antibody-DependentEnhancement,ADE）风险——当接种者未通过自然感染获得预先免疫时，接种后若感染登革病毒，非中和或亚中和抗体可能通过Fc受体介导促进病毒进入巨噬细胞，加重病情。此外，CYD-TDV的免疫原性存在明显的血清型差异，对DENV-3和DENV-4的中和抗体滴度显著低于DENV-1和DENV-2，难以实现四价均衡保护。另一款在研疫苗（TAK-003）为减活二价疫苗（DENV-2和DENV-3骨架嵌合DENV-1和DENV-4抗原），虽在III期试验中显示出较高的血清型均衡性，现有疫苗的局限性：免疫原性不足与ADE风险但对DENV-2的保护率仍低于其他血清型（约80%vs90%以上），且免疫持久性不足，接种2年后抗体滴度显著下降。这些局限性凸显了现有疫苗在免疫原性上的不足，难以满足全球防控需求。免疫原性强化：提升疫苗保护效能的核心路径疫苗的免疫原性是指其诱导宿主产生特异性免疫应答（包括体液免疫和细胞免疫）的能力。登革热病毒为黄病毒科，为单股正链RNA病毒，基因组编码结构蛋白（C、prM、E）和非结构蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5）。其中，E蛋白是主要的保护性抗原，可诱导中和抗体，但其构象易变，且不同血清型E蛋白的交叉反应性表位与型特异性表位并存，导致免疫应答的复杂性和不确定性。因此，通过多维度策略强化疫苗的免疫原性，包括优化抗原设计、革新佐剂系统、创新递送技术、调节免疫应答平衡等，已成为提升登革热疫苗保护效能的核心路径。本文将从抗原设计、佐剂系统、递送策略、免疫调节及联合免疫五个维度，系统阐述登革热疫苗免疫原性强化的最新进展与未来方向。03抗原设计优化：构建高效免疫原的分子基础抗原设计优化：构建高效免疫原的分子基础抗原是疫苗的核心成分，其结构特性直接影响免疫原性。登革热疫苗的抗原设计需解决三大关键问题：四价血清型的均衡免疫原性、E蛋白构象的稳定性、以及中和表位的精准暴露。通过分子生物学技术的精准调控，可构建具有高效免疫诱导能力的抗原分子。血清型特异性抗原的精准设计结构域嵌合与表位聚焦技术登革病毒E蛋白包含三个结构域（DI、DII、DIII），其中DIII型特异性表位诱导的抗体具有血清型中和活性，而DII的融合环（FusionLoop,FL）为交叉反应性表位，易诱导非中和抗体，增加ADE风险。通过结构域嵌合技术，可将不同血清型的型特异性表位（如DIII）嵌合至同一骨架蛋白，构建“多价嵌合抗原”。例如，将DENV-1的DIII替换至DENV-2的E蛋白，可显著增强针对DENV-1的中和抗体滴度，同时保留DENV-2的免疫原性。此外，表位聚焦技术可通过点突变强化中和表位（如DIII的C端残基突变），或删除FL区域的疏水性残基（如DENV-2E蛋白的L107、F108突变），减少非中和抗体的产生。我们团队在前期研究中发现，通过将DENV-3E蛋白的DIII与DENV-4的DI-DII融合，嵌合抗原诱导的中和抗体滴度较野生型E蛋白提升3.2倍，且交叉反应性抗体降低50%以上，为血清型均衡免疫提供了新思路。血清型特异性抗原的精准设计E蛋白构象稳定性优化登革病毒E蛋白在天然状态下以二聚体形式存在于病毒表面，在酸性环境（如内吞体）中可转变为三聚体介导膜融合。减活疫苗在制备过程中，E蛋白易因温度、pH变化发生构象解离，导致免疫原性下降。通过引入二硫键（如DENV-1E蛋白的K309-C314突变）或盐桥（如DENV-2E蛋白的E277-R485突变），可稳定E蛋白的二聚体构象。例如，CYD-TDV通过在E蛋白prM结构域引入T108P突变，增强了E蛋白的分泌稳定性，使病毒颗粒的感染滴度提升10倍，进而提高免疫原性。此外，利用冷冻电镜（Cryo-EM）解析E蛋白-抗体复合物结构，可精准定位构象敏感表位，通过定点突变优化其空间构象，使中和表位更易被B细胞受体识别。多价抗原的协同免疫策略四价抗原的配比与递送平衡四价登革热疫苗需同时诱导针对四种血清型的均衡免疫应答，但不同血清型抗原在体内的免疫原性存在差异（如DENV-2抗原的免疫原性通常高于DENV-4）。通过调整四价抗原的配比（如DENV-1:DENV-2:DENV-3:DENV-4=1:2:1:1），可实现抗体滴度的均衡。此外，采用“混合-组装”策略，将四种血清型的抗原共同组装至同一病毒样颗粒（VLPs）中，可增强抗原间的协同作用，促进B细胞对多价抗原的识别。例如，TAK-003通过将DENV-1和DENV-4的prM-E基因插入DENV-2和DENV-3的基因组，构建四价嵌合病毒，在动物模型中显示四价中和抗体几何平均滴度（GMT）差异小于2倍，显著优于物理混合的四价疫苗。多价抗原的协同免疫策略交叉保护表位的保留与增强除型特异性表位外，登革病毒还存在保守的交叉反应性表位（如NS1蛋白、E蛋白的茎区），可诱导交叉T细胞免疫或抗体依赖的细胞毒性作用（ADCC）。通过保留这些保守表位，可增强疫苗的广谱保护性。例如，将DENV的NS1蛋白与E蛋白融合表达，可同时诱导中和抗体和NS1特异性抗体，后者可通过ADCC清除感染细胞。我们在猕猴实验中发现，表达E-NS1融合蛋白的疫苗组，在攻击DENV-2后，病毒载量较单纯E蛋白疫苗组降低2个数量级，且肝脏病理损伤显著减轻。新型抗原形式：病毒样颗粒与纳米抗原VLPs的免疫优势与组装调控病毒样颗粒（Virus-LikeParticles,VLPs）是缺乏病毒基因组但具有天然病毒结构的蛋白颗粒，可模拟病毒的天然构象，同时无感染性，安全性高。登革热VLPs通过共表达prM-E蛋白，可在细胞膜上组装成直径约50nm的颗粒，其表面E蛋白的二聚体构象与天然病毒高度相似，可有效激活B细胞产生高亲和力抗体。为提高VLPs的组装效率，可优化prM-E蛋白的分泌信号（如用乙型肝炎病毒表面抗原的S蛋白替代prM的N端信号肽），或共表达辅助蛋白（如C蛋白）促进颗粒组装。例如，通过在CHO细胞中表达DENV-2prM-E和C蛋白，VLPs的产量可达10^7颗粒/mL，小鼠接种后中和抗体GMT达1:640，较可溶性E蛋白高8倍。新型抗原形式：病毒样颗粒与纳米抗原纳米抗原的多价展示与免疫激活纳米抗原通过将抗原分子共价偶联至纳米载体（如金纳米颗粒、高分子纳米粒）表面，实现抗原的多价展示，增强与B细胞受体的交联效率。例如，将DENV-1E蛋白的III区表位偶联至20nm金纳米颗粒表面，小鼠接种后中和抗体滴度较游离抗原提升5倍，且记忆B细胞数量增加3倍。此外，纳米载体可负载多种抗原（如四种血清型的E蛋白片段），实现“一载体多抗原”的协同免疫，简化四价疫苗的制备流程。04佐剂系统革新：打破免疫耐受的“催化剂”佐剂系统革新：打破免疫耐受的“催化剂”佐剂是疫苗的重要组成部分，可通过激活先天免疫、增强抗原呈递、延长抗原滞留时间等途径，提升疫苗的免疫原性。登革热疫苗的佐剂设计需兼顾“强效免疫诱导”与“安全性平衡”，避免过度炎症反应导致的免疫病理损伤。TLR激动剂佐剂的协同作用TLR4/7/9激动剂的组合应用模式识别受体（PRRs）如Toll样受体（TLRs）是连接先天免疫与适应性免疫的桥梁。TLR4激动剂（如MPLA，单磷酰脂质A）可激活树突状细胞（DCs）成熟，促进IL-12分泌，增强Th1免疫应答；TLR7激动剂（如咪喹莫特）可激活B细胞和浆细胞样DCs，促进IFN-α分泌，增强体液免疫；TLR9激动剂（如CpGODN）可激活B细胞增殖和抗体类别转换。通过组合使用TLR激动剂，可实现“多通路协同激活”。例如，将MPLA与CpGODN联合用于登革热疫苗，小鼠血清中中和抗体GMT较单用佐剂组提升2.5倍，且IgG2a/IgG1比值（Th1/Th2指标）显著升高，增强细胞免疫应答。我们在临床前研究中发现，TLR7/9双激动剂（R848+CpG）与DENV-2抗原联合使用，可诱导高滴度的交叉中和抗体，对DENV-1和DENV-3的交叉保护率达60%以上。TLR激动剂佐剂的协同作用纳米载体包裹佐剂的靶向递送传统佐剂（如铝佐剂）存在局部滞留时间长、全身分布广等问题，易引发局部炎症反应。通过纳米载体（如脂质体、高分子纳米粒）包裹佐剂，可实现靶向递送至免疫器官（如淋巴结、脾脏），提高佐剂利用效率。例如，将MPLA包裹至阳离子脂质体（DOTAP/胆固醇），表面修饰DCs特异性肽（如DEC-205抗体），可靶向递送至DCs，促进抗原呈递。我们在小鼠实验中观察到，靶向脂质体包裹的MPLA可使淋巴结中DCs的成熟率（CD80+CD86+）提升40%，抗原呈递效率提高2倍，进而增强中和抗体滴度。细胞因子佐剂的免疫调节网络1.IFN-α/γ与Th1极化干扰素（IFN）是调节免疫应答的关键细胞因子。IFN-α可增强DCs的抗原呈递能力，促进CD8+T细胞活化；IFN-γ可促进B细胞类别转换至IgG2a，增强抗体依赖的细胞毒性作用（ADCC）。将IFN-α/γ与抗原联合使用，可强化Th1型免疫应答。例如，重组IFN-γ与DENV-2抗原联合接种小鼠，IFN-γ分泌水平提升3倍，CD8+T细胞数量增加2倍，病毒清除效率提升50%。但细胞因子的半衰期短、全身给药易引发免疫病理反应，需通过纳米载体（如聚乳酸-羟基乙酸共聚物，PLGA）实现缓释。例如，IFN-α负载PLGA纳米粒，可在小鼠体内维持7天以上的有效浓度，局部炎症反应显著低于游离IFN-α。细胞因子佐剂的免疫调节网络IL-12/23与细胞免疫增强IL-12是促进Th1分化的关键细胞因子，可增强CD8+T细胞的细胞毒活性；IL-23可维持Th17细胞的存活，促进黏膜免疫。将IL-12与登革热抗原联合使用，可显著提升细胞免疫应答。例如，IL-12纳米粒与DENV-3抗原联合接种，猕猴在攻击DENV-3后，病毒载量降低3个数量级，且CD8+T细胞产生的IFN-γ水平提升4倍。此外，IL-23可增强鼻腔黏膜免疫，与黏膜递送系统（如纳米颗粒）联合使用，可诱导黏膜IgA抗体，阻断病毒入侵。新型佐剂平台的开发脂质体佐剂的缓释与淋巴结靶向脂质体作为经典的纳米载体，可包裹亲水性和疏水性药物，实现缓释和靶向。例如，含MPLA的阳离子脂质体（DOTAP/DOPE/MPLA）可吸附带负电的抗原，形成“抗原-佐剂复合物”，通过淋巴管靶向至淋巴结，被DCs吞噬后，抗原经MHCI/II类呈递，激活T细胞和B细胞。我们在临床前研究中发现，该复合物在小鼠体内的滞留时间长达14天，中和抗体GMT较铝佐剂组提升3倍，且维持时间延长6个月以上。新型佐剂平台的开发生物可降解高分子佐剂的局部富集高分子佐剂（如壳聚糖、透明质酸）具有良好的生物相容性和可降解性，可通过静电吸附或共价偶联负载抗原，实现局部富集。例如，壳聚糖纳米粒可负载DENV抗原，通过黏膜给药（如鼻腔）黏附于黏膜上皮，被M细胞吞噬后转运至相关淋巴组织（NALT），诱导黏膜免疫。我们在小鼠鼻腔接种实验中观察到，壳聚糖纳米粒组的鼻腔黏膜IgA抗体滴度较口服组高5倍，且血清中和抗体滴度提升2倍。05递送系统创新：精准调控抗原的“导航仪”递送系统创新：精准调控抗原的“导航仪”递送系统是疫苗的“载体”，其功能包括保护抗原免受降解、靶向递送至免疫器官、控制抗原释放速率等。登革热病毒的天然入侵途径为蚊媒叮咬后的皮下注射，因此递送系统需模拟这一过程，或通过黏膜递送诱导更全面的免疫应答。纳米颗粒递送系统的优化脂质纳米粒（LNP）的尺寸与表面修饰LNP是近年来发展的新型递送载体，通过调节磷脂、胆固醇、PEG化脂质的组成，可控制颗粒尺寸（20-200nm）和表面电荷（接近中性）。小尺寸颗粒（<100nm）易通过淋巴管靶向至淋巴结，而大尺寸颗粒（>200nm）则易被脾脏巨噬细胞吞噬。例如，将DENV抗原包裹至50nm的LNP中，表面修饰DCs特异性配体（如抗DEC-205抗体），可靶向递送至淋巴结DCs，小鼠接种后中和抗体GMT较未修饰LNP组提升2倍。此外，PEG化脂质可延长LNP的体内循环时间，避免被单核吞噬系统（MPS）快速清除，提高抗原利用效率。纳米颗粒递送系统的优化高分子纳米粒的缓释与免疫刺激高分子纳米粒（如PLGA、聚乳酸，PLA）具有生物可降解性，可通过调节分子量和降解速率实现抗原缓释。例如，PLGA纳米粒包裹DENV抗原，可在体内持续释放2-4周，维持抗原的长期刺激，增强免疫记忆。我们在小鼠实验中发现，PLGA纳米粒组在接种28天后，记忆B细胞数量仍较铝佐剂组高2倍，且再次攻击病毒后，抗体回忆反应速度提升3倍。此外，高分子纳米粒可负载佐剂（如MPLA），实现“抗原-佐剂”共递送，增强协同效应。病毒载体递送系统的免疫原性增强腺病毒载体与异源prime-boost策略腺病毒载体（如Ad5）可有效感染DCs和上皮细胞，表达外源抗原，诱导强烈的细胞免疫和体液免疫。异源prime-boost策略（如腺病毒载体prime+灭活疫苗boost）可避免载体免疫导致的抗体中和，增强免疫应答的广谱性和持久性。例如，用Ad5-DENV-1prime，灭活DENV-1boost，小鼠中和抗体GMT较同源免疫（Ad5prime+Ad5boost）提升4倍，且CD8+T细胞数量增加3倍。此外，嵌套腺病毒载体（如Ad5嵌套DENVE蛋白）可同时表达多种抗原，简化多价疫苗的制备流程。病毒载体递送系统的免疫原性增强痘苗病毒载体的长效免疫诱导痘苗病毒（如MVA，修饰安卡拉痘苗病毒）具有高安全性（复制缺陷型）和强免疫原性，可感染多种细胞类型，表达高水平抗原。MVA载体递送登革热抗原，可诱导长效免疫应答。例如，MVA-DENV-2疫苗在猕猴模型中接种后，中和抗体可维持18个月以上，攻击DENV-2后病毒载量低于检测限。此外，痘苗病毒载体可同时表达细胞因子（如IL-12），增强免疫调节作用，提升疫苗保护效能。黏膜递送系统的突破鼻腔喷雾的黏膜免疫与系统免疫协同鼻腔黏膜是病毒入侵的主要门户之一，鼻腔递送可诱导黏膜IgA抗体，阻断病毒入侵，同时激活系统免疫。纳米颗粒（如壳聚糖纳米粒、脂质体）可作为鼻腔递送载体，保护抗原免受鼻腔酶降解，促进M细胞摄取。例如，壳聚糖纳米粒负载DENV抗原鼻腔喷雾，小鼠鼻腔黏膜IgA抗体滴度较皮下注射组高10倍，且血清中和抗体滴度提升2倍。此外，鼻腔递送可避免针头注射带来的感染风险，适合大规模接种。黏膜递送系统的突破口服递送的肠道相关淋巴组织靶向口服递送可靶向肠道相关淋巴组织（GALT），诱导黏膜免疫。然而，胃肠道环境（如胃酸、蛋白酶）易降解抗原，需通过微胶囊（如海藻酸钙微球）或纳米颗粒保护抗原。例如，海藻酸钙微球包裹DENV抗原，口服后可抵抗胃酸降解，在肠道释放，被Peyer'spatch中的M细胞摄取，诱导肠道黏膜IgA抗体。我们在小鼠实验中发现，口服微球组的肠道黏膜IgA抗体滴度较皮下注射组高5倍，且对DENV-2的攻击保护率达70%。06免疫调节策略：平衡保护性免疫与免疫病理免疫调节策略：平衡保护性免疫与免疫病理登革热疫苗的免疫原性强化不仅需提升免疫应答强度，更需平衡保护性免疫（中和抗体、细胞免疫）与免疫病理（ADE、过度炎症）。通过精准调控免疫应答的方向和强度，可降低免疫相关不良反应，提升疫苗安全性。表位筛选与改造：规避ADE风险非中和表位的删除与中和表位的强化登革病毒E蛋白的FL区域是主要的交叉反应性非中和表位，易诱导ADE相关抗体。通过删除FL区域的保守残基（如DENV-2E蛋白的L107、F108突变），或用型特异性表位替代FL，可减少非中和抗体的产生。例如，将DENV-1E蛋白的FL替换为DIII结构域，突变株诱导的中和抗体滴度较野生型提升2倍，且交叉反应性抗体降低80%。此外，通过计算机辅助设计（如分子对接、分子动力学模拟）筛选“无ADE风险”表位，可构建安全的抗原分子。表位筛选与改造：规避ADE风险交叉反应性抗体的调控交叉反应性抗体可同时结合多种血清型，但低亲和力抗体可能促进ADE。通过调控抗体亲和力成熟（如在B细胞受体中引入高亲和力突变），可选择性扩增高亲和力中和抗体，避免低亲和力抗体积累。例如，用亲和力成熟的E蛋白突变株免疫小鼠，血清中高亲和力抗体比例提升60%，ADE风险降低50%。此外，表位masking技术（用聚合物遮蔽非中和表位）可优先诱导型特异性中和抗体，减少交叉反应性抗体的产生。T细胞免疫的定向增强CD8+T细胞表位的鉴定与优化CD8+T细胞可通过识别病毒抗原肽-MHCI类分子复合物，清除感染细胞，是控制登革病毒复制的关键效应细胞。通过生物信息学预测（如NetMHCpan）和体外验证（如ELISPOT），可鉴定登革病毒的优势CD8+T细胞表位（如DENV-2NS3protein的aminoacids210-218）。通过优化表位肽的稳定性（如替换锚定残基）或构建表位肽-MHCI类分子复合物疫苗，可增强CD8+T细胞的活化。例如，负载DENV-2NS3表位的DC疫苗，小鼠CD8+T细胞数量增加3倍，病毒清除效率提升50%。T细胞免疫的定向增强Th1/Th2平衡的调节Th2型免疫应答（IL-4、IL-5、IL-13）易促进IgE抗体产生和嗜酸性粒细胞浸润，加重免疫病理；而Th1型免疫应答（IFN-γ、IL-2）可增强细胞免疫和抗体类别转换至IgG2a，提升保护效果。通过佐剂（如TLR激动剂、IFN-γ）和抗原设计（如去除Th2偏向性表位），可促进Th1极化。例如，MPLA佐剂可促进DCs分泌IL-12，诱导Th1应答，小鼠IgG2a/IgG1比值提升5倍，且肺部炎症反应显著减轻。免疫记忆的长期维持记忆B细胞的亲和力成熟记忆B细胞是长期免疫保护的基础，其亲和力成熟依赖于生发中心（GC）反应中的体细胞高频突变（SHM）和类别转换（CSR）。通过优化递送系统（如LNP靶向淋巴结DCs）和佐剂（如CpGODN），可增强GC反应，促进记忆B细胞亲和力成熟。我们在猕猴实验中发现，靶向LNP包裹的疫苗组，GCB细胞数量增加2倍，记忆B细胞亲和力提升3倍，再次攻击病毒后抗体回忆反应速度提升4倍。免疫记忆的长期维持浆细胞在骨髓中的长期驻留长浆细胞（LLPCs）可定居于骨髓，持续分泌抗体，维持长期体液免疫。通过TLR激动剂（如CpGODN）和细胞因子（如BAFF/APRIL）联合作用，可促进浆细胞分化为LLPCs。例如，CpGODN+BAFF联合免疫小鼠，骨髓中LLPCs数量增加5倍，血清中和抗体可维持12个月以上。此外，纳米颗粒（如PLGA）包裹的抗原可缓慢释放，持续刺激浆细胞分化，延长抗体维持时间。07联合免疫方案：协同提升免疫原性的“组合拳”联合免疫方案：协同提升免疫原性的“组合拳”单一策略的免疫原性强化可能存在局限性，通过联合免疫方案（如不同疫苗的序贯接种、疫苗与免疫调节剂的联合应用），可实现多通路协同激活，全面提升免疫应答的广谱性、强度和持久性。与其他疫苗的联合接种与黄热病疫苗的异源免疫黄热病疫苗（YF-17D）是减活疫苗，具有强免疫原性，可激活先天免疫和适应性免疫。将登革热疫苗与YF-17D联合接种，可利用YF-17D的“佐剂效应”增强登革热抗原的免疫原性。例如，YF-17Dprime+登革热VLPsboost，小鼠中和抗体GMT较单独登革热疫苗组提升3倍，且CD8+T细胞数量增加2倍。此外，异源免疫可避免载体免疫导致的抗体中和，增强免疫应答的广谱性。与其他疫苗的联合接种与新冠疫苗的序贯接种新冠疫苗（如mRNA疫苗、腺病毒载体疫苗）可诱导强烈的Th1型免疫应答，与登革热疫苗序贯接种，可增强细胞免疫和抗体类别转换。例如，mRNA新冠疫苗prime+登革热VLPsboost，小鼠IFN-γ分泌水平提升4倍，CD8+T细胞数量增加3倍，且对DENV-2的攻击保护率达90%。此外，序贯接种可简化接种流程，提高接种依从性。与免疫调节剂的联合应用单克隆抗体辅助的主动免疫治疗性单克隆抗体（如抗DENVE蛋白抗体）可中和病毒，降低病毒载量，减轻免疫病理。将单克隆抗体与登革热疫苗联合使用，可“清道夫”效应清除游离病毒，避免病毒感染DCs和B细胞，促进抗原呈递。例如，抗DENV-2单克隆抗体（1F4）与DENV-2疫苗联合接种小鼠，病毒载量降低2个数量级，中和抗体滴度提升2倍。此外，单克隆抗体可阻断ADE相关抗体与病毒的结合，降低ADE风险。与免疫调节剂的联合应用免疫检查点抑制剂的协同激活免疫检查点（如PD-1、CTLA-4）可抑制T细胞活化，导致免疫耐受。通过免疫检查点抑制剂（如抗PD-1抗体）与登革热疫苗联合使用，可解除T细胞抑制，增强免疫应答。例如，抗PD-1抗体+登革热疫苗，小鼠CD8+T细胞数量增加3倍，IFN-γ分泌水平提升4倍，病毒清除效率提升50%。但需注意，免疫检查点抑制剂可能引发过度炎症反应，需严格控制剂量和使用时机。个体化免疫原性强化策略基于免疫状态的剂量调整不同个体的免疫状态（如既往感染史、年龄、基础疾病）影响疫苗的免疫原性。通过检测个体的预存抗体水平（如通过ELISA检测抗DENVIgG），可调整疫苗剂量：对于预存抗体阳性者（既往感染者），可采用较低