帕布昔利布的研究进展

帕布昔利布的研究进展摘要帕布昔利布是治疗乳腺癌的一种口服的靶向性CDK4/6抑制剂。临床上一般将其与来曲唑合用于治疗绝经后妇女的晚期乳腺癌。本文对帕布昔利布的有关物质检测方法和结果，含量测定方法及结果，以及帕布昔利布在各国的专利发展路线进行综述并进行展望。关键词：帕布昔利布；有关物质；含量测定；专利发展路线

ResearchprogressofPalbociclibAbstractPalbociclibisanoraltargetedCDK4/6inhibitorforbreastcancer.Clinically,itiscommonlyusedincombinationwithletrozoleinthetreatmentofadvancedbreastcancerinpostmenopausalwomen.Thispaperreviews,themethodsforthedeterminationofrelatedsubstances,themethodsandresultsforthedeterminationofcontent,andthepatentdevelopmentrouteofPalbociclibinvariouscountriesisreviewedandprospected.Keywords:Palbociclib;relatedsubstances;contentdetermination;Patentdevelopmentroute

前言癌症现在成为了我国死亡率最高的三大疾病之一，而乳腺癌则为女性现在最为常见的恶性肿瘤之一，其发病率极高已经成为仅次于子宫癌的存在，也成为威胁女性健康的头号病因[1-3]。全世界在过去的几十年间，乳腺癌的发病率逐年增长。预计到2020年，每年的乳腺癌新发病例将超过170万，而发展中国家的乳腺癌病例的增长速率则略高于发达国家。中国作为发展中国家每年的乳腺癌患者也在快速增长中，而帕布昔利布（Palbociclib）作为治疗乳腺癌新药，对治疗绝经后乳腺癌有显著效果，因此各国都对其展开了研究[4-6]。帕布昔利布为全球首个口服的，以细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）4/6抑制剂上市的药物，其通过抑制CDK4/6的活性来阻止细胞进入到S期而显著增强了乳腺癌细胞在G1期的百分比，如此便抑制DNA复制,以此减少癌症细胞的增殖[7-9]。合成帕布昔利布为乳腺癌患者的治疗提供了新方案，虽然其在治疗过程中也有许多不良反应，如中性粒细胞减少、白细胞减少、疲劳和贫血等，但其与其他药物相比不仅提高了疗效，而且使患者的毒性负担减少，患者对帕布昔利布有良好的耐受性[10-12]。其为晚期乳腺癌患者的治疗提供了新的方案，因此帕布昔利布的研制在中国乳腺癌新药的开发中前景广阔[13]。

1帕布昔利布简介1.1概述帕布昔利布，化学名为6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-2-(5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基)-8H-吡啶并[2，3-d]嘧啶-7-酮，是美国辉瑞制药有限公司（Pfizer）研发的用于治疗晚期乳腺癌的药物[14]。商品名为Ibrance,于2015年2月3日FDA对该药给予认可，并在美国批准上市。帕布昔利布为可逆的，选择性小的细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和细胞周期蛋白依赖性激酶6（CDK6）的可逆性拮抗剂[15]，其通过抑制细胞生长和阻断肿瘤细胞的增殖[16]，显著改善了患者的进展生存期。在临床上，帕布昔利布与来曲唑联合用于治疗以内分泌治疗为基础的-线疗法用于治疗未曾接受过系统治疗的雌激素受体阳性(ER+)、人表皮生长因子受体2(HER2)的绝经期女性的后晚期乳腺癌治疗[17]。1.2用法用量及给药方法每日一次，每次75～100mg，最大剂量为每次125mg。帕布昔利布应每日一次与食物共同服用21后停药7天。如果出现呕吐或忘服药物，也无须再多服用。对于个体差异性及耐受性应中断或减量给药。本品应直接整粒服用不应损害胶囊。1.3药物相互作用帕布昔利布通过CYP3A和SULT2A1代谢，因此当患者服用了CYP3A抑制剂时会使其血药浓度提高而导致中毒。因此，应避免帕布昔利布与强CYP3A抑制剂或强中度的CYP3A诱导剂同时使用，如必须使用则应适当减少帕布昔利布剂量。而对于治疗窗窄的CYP3A底物在与帕布昔利布同时使用时，帕布昔利布的剂量也应适量降低。帕布昔利布与来曲唑合用时无相互作用安全指数高，可以用于治疗乳腺癌[18]。1.4药动学帕布昔利布口服给药后吸收速率较慢，达峰时间（tmax）约为6～12h，半衰期为29h。口服帕布昔利布125mg的绝对生物利用度为46%。在25～225mg范围内，帕布昔利布的血药峰浓度（cmax）和AUC0→∞随剂量增加而增加。在连续给药8个小时后，达到稳态血药浓度。在体外，帕布昔利布与人体血药蛋白的结合率约为85%。帕布昔利布的代谢缓慢，主要通过经肝脏的CYP3A酶和磺基转移酶A1代谢，以粪排泄为主要排泄途径。与食物同服可减少帕布昔利布的个体差异性，与空腹相比吸收率高[5]。2有关物质测定2.1测定方法及评价有关物质是指在药品在生产过程中带入起始原料、中间体、聚合物、副反应产物，以及贮藏过程中的降解产物等。有关物质危害人体的健康，影响药物的稳定性，它的含量是药品纯度及其降解情况的直接指标，因此控制有关物质含量成为了药品质量控制的关键项目。在近10年来关于帕布昔利布有关物质的研究多以检测方法的研究为主，而有关物质分析一般采用高效液相色谱法。袁铎等[19]用高效液相色谱法对帕布昔利布的原料药中分离出的8-环戊基-5-甲基-2-(5哌嗪-1-基-吡啶-2-基-氨基)-8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶7-酮、8-环戊基-5-甲基-6-乙烯基-2-（5-哌嗪-1-基-吡啶-2-基氨基）8H-吡啶并[2,3-d]嘧啶-7-酮、4-[6-(6-乙酰基-8-环戊基-5-甲基-7-氧代-7，8二氢吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基)-吡啶-3-基]-哌嗪-1-羧酸叔丁酯进行了分析。色谱柱为PhenomenexGeminiC18(250mm×4.6mm，5μm)，检测波长为220nm，柱温为40℃，流速为1.0mL·min-1，流动相为乙腈-0.2%KH2PO4溶液，发现在这个条件下杂质与帕布昔利布的主峰可以很好分离，证明其合成的杂质为其原料药中主要杂质的归属，解决了杂质研究所需对照品问题，为帕布昔利布的治量研究和杂质控制提供了帮助。乔壮飞等[10]用高效液相色谱法对帕布昔利布的原料药及深圳市恒丰万达医药科技有限公司提供的6个杂质进行了分析，色谱柱使用DikmaInspireSB-C18(4.6mm×250mm，5μm，检测波长为260nm，柱温改为30℃，流速为1.0mL·min-1，进样量为10μL，流动相换成了0.1%三氟乙酸乙腈溶液-0.1%三氟乙酸水溶液，稀释剂为流动相A(0.1%三氟乙酸乙腈溶液)∶流动相B（0.1%三氟乙酸水溶液）=50∶50。本方法流动相使用了梯度洗脱程序：0～5min，流动相A为l5→35，流动相B为85→65；5～15min，流动相A为25，流动相B为75；15～35min，流动相A为25→80，流动相B为75→20；35～45min，流动相A为80，流动相B为20；45～46min，流动相A为80→15，流动相B为20→85。在这个方法中使用耐酸柱子可以使帕布昔利布在9min左右出峰，提高其分离度，而加入三氟乙酸则可以使样品的峰型变好。使用该方法测定有关物质使准确性也提高，专属性强，重现性也比较好，对于有关物质的控制有很好的效果。徐海群等[20]同样也使用了高效液相色谱法进行检查了自制帕布昔利布胶囊中原料药合成过程中对反应中间体及其5种杂质进行检测。该方法中使用了InertSustainC18柱(4.6mm×250mm，5μm)，检测波长为225nm，柱温为25℃，流速为1.0mL·min-1，进样量为10μL，流动相为pH5.7的乙酸铵缓冲液（A）-乙腈（B）。该方法同样也使用了梯度洗脱程序：0～25min，流动相A为80→25，流动相B为20→75；25～30min，流动相A为25，流动相B为75；30～31min，流动相A为25→80，流动相B为75→20；31～40min，流动相A为80，流动相B为20；该实验表明由于三氟乙酸的酸性太强对色谱柱的损害比较严重，而且加入会使运行时基线漂移严重，灵敏度不高，耐用性不强，因此选用酸性较弱的乙酸铵。但是由于帕布昔利布的原料药，中间体及其杂质在酸性溶液中溶解性较好，因此加入乙酸铵调至pH5.7，并且使用该梯度进行洗脱时，专属性高，灵敏度高，耐用性强，其回收率好，所以可以使用该方法检测帕布昔利布的有关物质分析方法。3含量测定3.1测定方法及评价帕布昔利布多采用反向高效液相色谱法来对其进行含量测定。多数的研究者[18-21]使用甲醇或乙腈作为有机相，纯水为水相来检测，其中有机相的用量一般在55％～85％之间，而检测波长选用234nm，柱温控制在40～45℃之间，色谱柱选择以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。而为了使主峰和杂质峰可以更好分离，解决拖尾问题一般向其中加入0.1%～2%的三乙胺来进行调节，由于帕布昔利布溶于酸性溶液故一般将pH调至3.0～4.0之间。史晓东等[21]对帕布昔利布进行含量检测时采用安捷伦公司的AgilentHC-C18柱进行检测可以使主成分及杂质良好分离，由于帕布昔利布易溶于酸性溶液，故加入三氟乙酸来提高分离度，调整峰型；采用甲醇-水（二者体积比为45:55，含0.1%三氟乙酸）为流动相时，其出峰较早，且杂质分离度不够。而当换成乙腈-水（二者体积比为3:7，含0.1%三氟乙酸）时主峰与杂质的分离度良好，理论塔板数也较高。该结果表明在对帕布昔利布进行含量测定时，由于流动相酸性强因而要选择耐酸性色谱柱而使其测定有了一定的局限性，但是此方法也简单准确，可以用于控制帕布昔利布原料药的质量。4专利技术发展路线4.1相关专利发展路线自2003年原始专利WO2003062236首次公开帕布昔利布之后，人们开始为围绕该药物做了一系列研究，其包括化合物的新晶型，有关物质检测方法，化合物及中间体的制备方法，衍生物，药物组合物，联合用药等几个方面，并形成了完整的专利保护链，并且在欧洲、日本、美国、中国等国家和地区取得了化合物结构的专利。帕布昔利布的化合物专利最初为Warner-Lambert公司(现被美国辉瑞公司收购)在2003年01月10日申请专利，以及该化合物的通式化合物、药物组合物及其的制备治疗细胞周期蛋白激酶介导疾病药物中的用途。于2015年2月3日作为乳腺癌治疗药物在美国上市。美国专利US6936612中公开了结构及其化合物的合成制备方法[14]。4.2晶型及化合物研究印度的SunPharmaceuticalIND公司在WO2016024249中公开了帕布昔利布的FromⅠ、FromⅡ、FromⅢ、FromⅣ、FromⅤ、FromⅤ-A、FromⅥ、FromⅦ以及FromⅧ９种晶型。欧洲的SANDOZAG公司在国际专利申请WO2016066420中公开了一种帕布昔利布的单盐酸盐晶体。郑州泰基鸿诺药物科技有限公司在CN104447739中公开了四种氘代帕布昔利布衍生物，该发明通过对选择性氘代，改善了药物的药代性质，提高其安全性，耐受性及其药物的疗效[14]。4.3原料药及中间体制备方法研究山东裕欣药业有限公司在CN107722004中公布了一种帕布昔利布的制备方法。其将帕布昔利布的粗品加入叔丁醇与二乙醇二甲醚，通过控温及加入200目硅胶形成帕布昔利布晶种，控温养晶用少量甲叔醚洗涤，干燥得到帕布昔利布精品。该方法解决了现有技术的方法繁琐及副反应多，收率低的缺点，得到了一种操作方法简单，产品纯度可达到99.96%以上，易于工业化生产的方法。但是此方法对温度及时间控制严格还需继续优化其工艺[22]。上海星泰医药科技有限公司在CN106831759中公布了帕布昔利布及其中间体的制备方法。由4-{6-[(6-(1-丁氧基-乙烯基)-8-环戊基-5-甲基-7-氧基-7,8-二氢吡啶并[2,3-d]嘧啶-2-基)氨基]-3-吡啶基}-1-哌嗪羧酸叔丁酯化合物2，使其在酸性条件下选择性将烯醚基团转化为羰基，得到中间体1，将化合物1进一步重结晶得到纯化产物将其在酸性条件下脱除叔丁基羰基即得到帕布昔利布。其发明该方法的优点是可有效控制杂质含量，使其成品中两种杂质含量都小于0.1%，使其纯度提高。其反应步骤少，原料易得，操作简单可大批量生产[23]。由于帕布昔利布在辉瑞公司最早发布的国际专利WO2008032157中涉及了8步反应，路线较长，总收率比较低，且帕布昔利布的原料成本也比较高，使用了对环境有强腐蚀性的溴素试剂，工业化生产路线很难实现，因此改进帕布昔利布的合成路线只为减少反应步骤，使原料药廉价易得，适合工业化生产。因此中国集中对其制备工艺及制备其中间体进行了专利申请，如上海百奇医药科技有限公司，山东罗欣药业集团股份有限公司以及新发药业有限公司等都对帕布昔利布的合成路线做出了优化。4.4有关物质检测方法研究合肥远志医药科技开发有限公司于CN106018655中公布了帕布昔利布原料有关物质的检测方法。采用HPLC法对帕布昔利布原料药中的一种或多种有关物质进行分析，使用氟苯基键合硅胶或苯基键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相A为0.05%的高氯酸水溶液；流动相B为甲醇；稀释剂为水：乙腈：高氯酸=60：40：0.05：流速0.4mL·min-1；波长为220nm；柱温为55℃。该检测方法操作简单，主峰保留时间为11分钟，主峰与杂质可以很好分离，且分离度大于1.5，测定方法专属性强，灵敏度高，检测结果准确可信，可以用于帕布昔利布的有关物质分析[24]。重庆华邦盛凯制药有限公司在CN107543871中公布了分离测定帕布昔利布中间体Z1及其有关物质。该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以水和乙腈的混合液作为流动相进行洗脱，该方法的优点可以将帕布昔利布中间体Z1及其有关物质完全分离，分离度大于1.5，且本方法专属性强，灵敏度高，稳定性好，并对其中间体Z1的质量及其安全性有很好的保证性[25]。在工艺发展的大局势下与之相应的有关物质方析方法也在被人们开发出来，更多的公司完善了有关物质的检测方法，为主峰与杂质的分离做出专属性强、灵敏度高的方法而做出努力，相信以后操作方便，产率高，分离度高的有关物质检测方法一定会尽快研发出来的。5展望虽然帕布昔利布在未来十几年还一直处于专利保护期，但其功效也吸引人们围绕其进行开发，新合成方法、新衍生物、开发更多的新剂型，找出其新的适应症及药物联用法，简化其工艺等也成了未来技术发展的方向。目前国外原研公司辉瑞公司已经对帕布昔利布的化合物名称，药物组合物以及治疗CDK介导疾病的用途做了完整的专利保护链，且相关核心专利技术也还未公布，而国外很多企业也对更稳定的晶型进行研发有了很好的成效。目前国内的企业则集中于对制备方法的开发与优化以及对合成路线的研究，国内企业也应当学习和借鉴国外成熟的研发和专利保护，拓宽研发思路，多对已有结构进行改造获得疗效更显著的新药，也应开发新型药物制剂提高生物利用度等。如今帕布昔利布作为最典型的CDK4/6抑制剂，在未来治疗癌症领域尤其乳腺癌治疗领域一定会有很好的市场前景，而以中国现在对帕布昔利布原研药及中间体的研发，更多高效、绿色经济、产量高的制备方法一定会在不久的将来研发出来，更便宜有效的帕布昔利布将被中国癌症患者使用，而帕布昔利布也一定会在未来的市场竞争中占得一席之地。参考文献[1]RoccaA,FarolfiA,BravacciniS,etal.Palbociclib(PD0332991):targetingthecellcyclemachineryinbreastcancer[J].ExpertOpinPharmacother,2014,15(3):407-402[2]赵爽,陈双双,于正洪.ESR１基因改变在乳腺癌内分泌治疗耐药中的研究进展[J].临床肿瘤学杂志,2016,21(10):947-951[3]徐磊,封宇飞.CDK(4/6)抑制剂帕波克利的药理作用与临床评价[J].中国新药与临床杂志,2016,1(35):31-34[4]刘恕,徐军,崔毅,等.抗乳腺癌新药Palbociclib[J].药学进展,2015,39(8):634-640[5]王树森,余鸿雁.Palbociclib联合来曲唑一线治疗ER阳性、HER2阴性进展期乳腺癌能显著提高无进展生存期[J].循证医学,2015,15(3):146-148[6]康建磊,王彦明.首个CDK4/CDK6抑制剂新药——Palbociclib[J].临床药物治疗杂志,2016,14(4):85-88[7]FraDW,HarveyPJ,etal.Specificinhibitionofcyclin-dependentkinase4/6byPD0332991andassociatedantitumoractivityinhumantumorxenografts[J].Molcancerther,2004,3(11):1427-1438[8]宁澄清,黄健升,余聂芳.“突破性进展”药物帕布昔利布[J].肿瘤药学,2015,5(2):81-82[9]崔艳丽,金玉洁,田苗,等.周期蛋白依赖性激酶4/6抑制剂PalboCiclib[J].现代药物与临床,2014,29(10):1178-1182[10]乔壮飞,王彩红,张洁,等.高效液相色谱法测定帕博西林的有关物质[J].中国药品标准,2018,19(4):303-308[11]BaselgaJ,CamponeM,PiccartM,etal.EverolimusinpostenopausalHormone-receptor-positiveadvancedbreastcancer[J].NEnglJMed,2012,366(6):520[12]Akinieye,AvvaruP,FurqanM,etal.Phosphatidylinositol3-kinase(PI3K)inhibitorsascancertherapeutics[J].JHematolOncol,2013,6(1):88[13]国家药品监督管理局进口药品注册标准.哌柏西利胶囊[S].2018-07-31[14]蒋薇薇.CDK4/6抑制剂palbociclib专利技术分析[M].药学研究,2019,38（10）.608-614[15]Trre