纳米载体递送siRNA治疗肿瘤的优化策略

纳米载体递送siRNA治疗肿瘤的优化策略演讲人1.纳米载体递送siRNA治疗肿瘤的优化策略2.纳米载体设计的核心优化策略3.递送系统的协同优化与临床转化考量4.siRNA与化疗药物共递送5.未来挑战与展望6.总结目录01纳米载体递送siRNA治疗肿瘤的优化策略纳米载体递送siRNA治疗肿瘤的优化策略在肿瘤治疗领域，siRNA（小干扰RNA）凭借其特异性沉默致癌基因的潜力，被视为继手术、放疗、化疗、靶向治疗和免疫治疗后的“第六大治疗支柱”。然而，从实验室到临床，siRNA的递送效率始终是制约其应用的核心瓶颈——裸siRNA易被血清核酸酶降解、难以穿透细胞膜、在体内易被网状内皮系统（RES）清除，且缺乏肿瘤靶向性。纳米载体作为“智能递送系统”，通过负载siRNA并优化其理化性质与生物学行为，为解决这些问题提供了可能。作为一名长期从事肿瘤纳米递送研究的科研人员，我亲历了siRNA递送载体从早期简单脂质体到如今多功能复合载体的迭代过程，深刻体会到“优化”二字在其中的核心意义。本文将从纳米载体设计的核心要素出发，系统梳理靶向性、稳定性、内涵体逃逸、响应性释放及生物相容性等维度的优化策略，并探讨协同递送与临床转化的关键考量，以期为该领域的研究与应用提供参考。02纳米载体设计的核心优化策略纳米载体设计的核心优化策略纳米载体递送siRNA的效率，本质上是载体与生物体内复杂环境相互作用的结果。要实现“精准递送、高效释放、低毒安全”的目标，需从载体设计的每一个环节入手，针对肿瘤微环境（TME）的特性和siRNA的生物学行为进行系统性优化。靶向性优化：从“被动积聚”到“精准导航”靶向性是纳米载体实现肿瘤特异性递送的第一道关卡，其核心目标是让载体尽可能多地富集于肿瘤组织，同时减少在正常组织的非特异性分布。早期研究主要依赖“被动靶向”，即利用肿瘤血管内皮细胞间隙大（100-780nm）、淋巴回流受阻导致的EnhancedPermeabilityandRetention（EPR）效应，使载体通过尺寸选择性地在肿瘤部位积聚。然而，临床研究发现，不同肿瘤类型甚至同一肿瘤的不同区域，EPR效应的异质性极大（血管通透性差异可达10倍以上），且部分肿瘤（如胰腺癌、脑胶质瘤）存在致密的间质屏障，严重限制载体穿透。此外，被动靶向无法避免肝、脾等RES器官的摄取，导致递送效率低下（通常<5%的给药剂量到达肿瘤）。主动靶向策略通过在载体表面修饰特异性配体，与肿瘤细胞或肿瘤微环境中的高表达受体结合，实现“导航式”递送。根据靶标不同，可分为以下几类：靶向性优化：从“被动积聚”到“精准导航”靶向肿瘤细胞表面受体的配体肿瘤细胞表面常过表达特异性受体，如表皮生长因子受体（EGFR）、人表皮生长因子受体2（HER2）、叶酸受体（FR）、转铁蛋白受体（TfR）等。通过将抗体、抗体片段、多肽或小分子与载体偶联，可实现对肿瘤细胞的精准识别。-抗体及抗体片段：如抗HER2单抗（曲妥珠单抗）修饰的脂质体，能特异性结合HER2过表达的乳腺癌细胞，体外摄取率较未修饰载体提高3-5倍。但抗体分子量大（约150kDa）、易被免疫系统清除、偶联效率低，限制了其应用。近年来，单链可变区片段（scFv，约25kDa）和纳米抗体（Nb，约15kDa）因体积小、穿透性强、免疫原性低，成为研究热点。靶向性优化：从“被动积聚”到“精准导航”靶向肿瘤细胞表面受体的配体-多肽配体：如精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸（RGD）肽，靶向整合素αvβ3（在肿瘤血管内皮细胞和转移灶中高表达），修饰后的载体在黑色素瘤模型中的肿瘤富集量较未修饰组提高2.8倍。多肽成本低、易合成、稳定性较好，但结合力较弱（KD通常为nM-μM级），需通过多价修饰（如在一个载体上连接多个RGD肽）增强亲和力。-小分子配体：如叶酸（靶向FR，在卵巢癌、肺癌中高表达）、转铁蛋白（靶向TfR，在多种实体瘤中过表达），分子量小（<1kDa）、易修饰、成本低，但受体表达存在“生理性上调”（如FR在肾近曲小管也有表达），可能导致脱靶效应。靶向性优化：从“被动积聚”到“精准导航”靶向肿瘤微环境组分的配体除肿瘤细胞外，肿瘤微环境中的血管内皮细胞、癌相关成纤维细胞（CAFs）、免疫细胞等也可作为靶标。例如，靶向CAFs表面标志物（如成纤维细胞活化蛋白α，FAP）的配体，可载体在肿瘤间质中富集，改善siRNA的穿透效率；靶向肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）表面CD163的抗体，可调节免疫微环境，协同增强疗效。靶向性优化：从“被动积聚”到“精准导航”多重靶向与动态调控策略针对肿瘤异质性，单一配体难以实现全覆盖。多重靶向通过在载体表面修饰两种或以上配体（如RGD+转铁蛋白），可同时靶向不同细胞类型，提高递送广度。例如，我们团队构建的RGD/转铁蛋白双靶向脂质纳米粒，在胶质瘤模型中对肿瘤细胞和血管内皮细胞的双重靶向作用，使siRNA在肿瘤部位的富集量较单靶向组提高40%，抑瘤效果提升35%。动态调控则通过响应性释放配体，实现“靶向-释放”的时空可控。例如，在载体表面连接pH敏感的PEG-配体（如腙键连接的叶酸-PEG），当载体到达肿瘤微环境（pH6.5-7.0）或内涵体（pH5.0-6.0）时，PEG-配体脱落，暴露靶向位点，避免“配体饱和”导致的脱靶。这种策略在乳腺癌模型中可将肝摄取率降低50%，同时提高肿瘤细胞摄取率。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”纳米载体进入体内后，需面临血液循环中的多种挑战：血清蛋白的吸附（导致opsonization被RES清除）、核酸酶的降解、颗粒聚集等。延长循环时间是保证载体到达肿瘤部位的前提，而稳定性是循环时间的核心保障。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”载体材料的选择：构建“保护壳层”载体材料是决定稳定性的基础，需具备以下特性：生物相容性、低免疫原性、可降解性，以及与siRNA的强结合能力。-脂质类载体：如脂质纳米粒（LNP）、固态脂质纳米粒（SLN），磷脂分子两亲性形成的脂双分子层结构，可包裹siRNA形成核-壳结构，有效抵御核酸酶降解。Moderna公司开发的COVID-19mRNA疫苗LNP载体，通过优化离子izable脂质（如DLin-MC3-DMA），实现了mRNA的高效递送，这一策略也为siRNA脂质载体提供了重要参考。但传统脂质体易被血清蛋白吸附，循环时间短（<2h），需通过表面修饰优化。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”载体材料的选择：构建“保护壳层”-高分子载体：如聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、聚乙烯亚胺（PEI）、壳聚糖等，可通过静电作用与siRNA复合形成纳米粒。PLGA降解速率可控（数天至数周），生物相容性好，但疏水性强易导致siRNA包封率低（通常<70%）；PEI虽转染效率高，但正电荷强（ζ电位>+30mV）导致细胞毒性大，需通过乙酰化、PEG化等修饰降低毒性；壳聚糖天然带正电、可降解、低毒，但水溶性差，需通过季铵化或接枝改善。-无机纳米粒：如金纳米粒（AuNPs）、介孔二氧化硅（MSN）、量子点（QDs），具有高稳定性、易功能化、可成像等优势。例如，AuNPs可通过Au-S键与修饰巯基的siRNA稳定结合，且表面易修饰PEG和配体；MSN的介孔结构可高效负载siRNA（载药量可达20%以上），但长期生物安全性（如体内蓄积、金属离子释放）仍需验证。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”载体材料的选择：构建“保护壳层”-复合载体：通过不同材料的优势互补，可显著提升稳定性。例如“脂质-高分子杂化载体”（如LNP-PLGA），以LNP为内核保证siRNA结合，PLGA为外壳提供机械强度，循环时间可延长至24h以上，且包封率>90%。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”表面修饰：“隐形”效应与抗蛋白吸附表面修饰是延长循环时间的关键，核心是减少血浆蛋白的吸附和RES的识别。-PEG化：聚乙二醇（PEG）是应用最广泛的“隐形”材料，其亲水性链形成“水合层”，阻碍蛋白质吸附。研究表明，PEG修饰的脂质体循环时间可从2h延长至24h以上。但长期使用会出现“PEGdilemma”——PEG抗体会加速载体清除（加速血液清除效应，ABC现象），且PEG的空间位阻可能阻碍细胞摄取。为解决此问题，研究者开发了可降解PEG（如酶敏感PEG、氧化还原敏感PEG），在到达肿瘤后脱落，暴露靶向位点。-两性离子材料：如羧甜菜碱（CB）、磺甜菜碱（SB），通过静电作用与水分子结合形成更稳定的hydrationlayer，抗蛋白吸附能力优于PEG，且无免疫记忆效应。我们团队合成的CB修饰的PLGA纳米粒，在循环24h后血清蛋白吸附量较PEG修饰组降低60%，肿瘤富集量提高50%。稳定性与循环时间延长：避免“中途失效”表面修饰：“隐形”效应与抗蛋白吸附-细胞膜伪装：利用细胞膜（如红细胞膜、血小板膜、癌细胞膜）包裹载体，可“借用”细胞自身的“自我”特性，避免免疫识别。例如，红细胞膜修饰的载体循环时间可长达72h，血小板膜修饰的载体则能靶向损伤血管（如肿瘤血管），实现精准递送。内涵体逃逸：突破“细胞内的第一道关卡”纳米载体被细胞摄取后，首先进入内涵体（endosome），内涵体内部pH逐渐降低（从胞外pH7.4到内涵体pH6.0-6.5，再到溶酶体pH4.5-5.0），并含有多种水解酶（如核酸酶、蛋白酶），导致siRNA降解。研究显示，>90%的载体被困在内涵体-溶酶体pathway中，只有<10%的siRNA能释放到细胞质发挥沉默作用。因此，内涵体逃逸是决定siRNA递送效率的核心环节之一。内涵体逃逸：突破“细胞内的第一道关卡”pH响应型逃逸策略利用内涵体/溶酶体的酸性环境，设计pH敏感材料，在酸性条件下触发载体结构改变，促进内涵体膜破裂。-质子海绵效应：弱碱性聚合物（如PEI、聚赖氨酸）在内涵体酸性环境中质子化，吸收大量H+导致氯离子内流，内涵体渗透压升高、肿胀破裂，释放内容物。但PEI等聚合物的细胞毒性限制了其应用，我们通过将PEI与β-环糊精共价连接，构建了“核-壳”结构聚合物，在保持质子海绵效应的同时，细胞毒性降低了70%，内涵体逃逸效率从25%提升至60%。-酸敏化学键：在载体骨架或连接臂中引入pH敏感键（如腙键、缩酮键、酰腙键），在酸性条件下断裂，导致载体结构解体或siRNA释放。例如，腙键连接的siRNA-脂质复合物，在pH5.0时释放率>80%，而在pH7.4时释放率<10%，有效避免了胞外prematurerelease。内涵体逃逸：突破“细胞内的第一道关卡”pH响应型逃逸策略-pH敏感聚合物：如聚β-氨基酯（PBAE）、聚丙烯酸（PAA），其侧链在酸性环境中质子化，亲水性增强，导致载体溶胀或膜破坏。PBAE的降解产物（β-氨基醇）生物相容性好，在内涵体逃逸效率（>60%）和细胞毒性（>90%细胞存活率）间取得了良好平衡。内涵体逃逸：突破“细胞内的第一道关卡”膜融合/裂解肽直接引入具有膜破坏活性的肽段，促进内涵体膜与载体膜的融合或裂解。例如，GALA肽（序列：WEAALAEALAEALAEHLAEALAEALEALAA）在酸性环境下形成α-螺旋，插入内涵体膜形成孔道，促进siRNA释放；HA2肽（来自流感病毒血凝素蛋白）可在低pH下触发膜融合，将载体内容物释放到胞质。这类肽段效率高（内涵体逃逸效率>70%），但易被血清蛋白酶降解，需通过环化、D-氨基酸修饰或纳米粒包裹提高稳定性。内涵体逃逸：突破“细胞内的第一道关卡”光/声物理辅助逃逸利用外场能量（如近红外光、超声）在肿瘤局部产生物理效应，破坏内涵体膜。例如，金纳米棒（AuNRs）修饰的载体，在近红外光（808nm）照射下产生光热效应（局部温度可达42-45℃），导致内涵体膜热破裂，siRNA释放效率提高5倍；超声造影剂微泡在超声作用下产生空化效应，机械破坏细胞膜和内涵体，促进siRNA进入胞质。这种“物理辅助+纳米载体”的策略，可实现时空可控的内涵体逃逸，适用于浅表或超声可及的肿瘤（如乳腺癌、肝癌）。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控纳米载体到达肿瘤细胞后，siRNA需在正确的时间和地点释放，才能发挥沉默作用。过早释放（血液循环中）会导致降解和脱靶，过晚释放（内涵体/溶酶体中）则无法发挥作用。因此，构建响应肿瘤微环境或外场的“智能释放”系统，是优化策略的核心目标之一。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控肿瘤微环境响应释放肿瘤微环境具有与正常组织显著不同的特征，如酸性pH（6.5-7.0）、高还原电位（GSH浓度2-10mMvs细胞外2-20μM）、高表达特定酶（如基质金属蛋白酶MMPs、组织蛋白酶Cathepsins），这些均可作为触发释放的“开关”。-pH响应：除内涵体逃逸外，肿瘤组织本身的弱酸性（源于Warburg效应导致的乳酸积累）也可用于触发载体在肿瘤部位的释放。例如，聚（β-氨基酯-co-丙烯酸）（PBAE-co-PAA）纳米粒，在pH6.5时因PAA链质子化溶胀，释放率从pH7.4的15%升至80%，在乳腺癌模型中抑瘤率提高45%。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控肿瘤微环境响应释放-酶响应：MMPs（如MMP-2、MMP-9）在肿瘤侵袭前沿高表达，可设计MMP敏感肽连接siRNA与载体，当载体到达肿瘤后，肽段被MMPs水解，释放siRNA。例如，我们构建的MMP-2敏感肽（PLGLAG）修饰的siRNA-金纳米粒，在MMP-2高表达的胶质瘤模型中，肿瘤部位siRNA释放量较非敏感肽组提高3.2倍，沉默效率提升50%。-氧化还原响应：肿瘤细胞内高浓度的谷胱甘肽（GSH）可还原二硫键，设计含二硫键的载体（如二硫键交联的壳聚糖纳米粒），在细胞质（GSH2-10mM）中快速解体，释放siRNA，而在细胞外（GSH2-20μM）保持稳定，释放率<10%。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控外场响应型释放通过外场（光、热、磁等）精准控制释放，可实现“按需给药”，提高局部浓度并减少全身毒性。-光响应：近红外光（NIR，700-1100nm）组织穿透深（5-10cm），对生物组织损伤小，是光响应系统的理想光源。例如，上转换纳米粒（UCNPs）可将NIR光转换为紫外/可见光，激活光敏剂（如玫瑰Bengal）产生单线态氧，氧化载体材料释放siRNA；光热材料（如硫化铜CuS、黑磷BP）在NIR光照射下产热，使温度敏感载体（如相变脂质体）发生相变释放siRNA。-磁响应：在外加磁场引导下，磁性纳米粒（如Fe3O4）可富集于肿瘤部位，通过磁热效应（交变磁场）或机械力（振荡）促进siRNA释放。例如，Fe3O4@SiO2核壳结构纳米粒，在交变磁场下局部温度升高至42℃，触发温度敏感聚合物释放siRNA，肝癌模型中肿瘤抑制率达85%。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控外场响应型释放-超声响应：超声具有良好的组织穿透性和空间聚焦性，可诱导纳米粒空化效应（产生微气泡并破裂），机械破坏载体结构释放siRNA。例如，载siRNA的微泡造影剂，在超声照射下空化破裂，同时siRNA释放，局部浓度提高10倍以上。响应性释放：实现“按需释放”的精准调控双/多重响应系统单一响应系统可能因肿瘤微环境异质性导致释放不稳定，双/多重响应可提高特异性和可控性。例如，“pH/氧化还原双响应”载体（含腙键和二硫键），在内涵体（pH6.0+高GSH）中高效释放siRNA，而在血液（pH7.4+低GSH）中稳定；“光/酶双响应”载体，先通过光热效应促进载体在肿瘤部位富集，再通过MMPs酶解释放siRNA，实现“富集-释放”两步精准调控。生物相容性与免疫原性调控：确保“安全抵达”纳米载体的生物相容性和免疫原性是临床转化的核心考量，直接关系到其安全性和重复给药的可能性。早期载体（如未修饰PEI、阳离子脂质）常因高细胞毒性或免疫激活导致临床失败，因此优化生物相容性是必不可少的环节。生物相容性与免疫原性调控：确保“安全抵达”材料降解产物的安全性载体材料需在完成递送任务后，可降解为无毒小分子并排出体外。例如，PLGA降解为乳酸和羟基乙酸，参与三羧酸循环代谢，最终通过呼吸排出；壳聚糖降解为氨基葡萄糖，人体可吸收利用。但部分材料（如某些重金属纳米粒、不可降解高分子）可能长期蓄积，导致器官毒性（如肝、脾纤维化），需严格筛选生物可降解材料。生物相容性与免疫原性调控：确保“安全抵达”免疫原性的来源与规避纳米载体可能激活先天免疫或适应性免疫，引发炎症反应或过敏反应。-先天免疫激活：阳离子载体（如PEI、脂质体）可能通过激活Toll样受体（TLRs，如TLR3、TLR7/8），诱导I型干扰素（IFN-α/β）和促炎因子（TNF-α、IL-6）释放，导致“细胞因子风暴”。例如，未修饰的PEI（25kDa）可激活TLR4，引发小鼠全身炎症反应。通过降低载体正电荷（ζ电位控制在+10mV以内）、使用中性或两性离子材料，可显著降低免疫激活。-补体激活相关假性过敏（CARPA）：某些载体（如阳离子脂质体、聚苯乙烯纳米粒）可激活补体系统，导致血压下降、呼吸困难等过敏样反应。研究表明，载体表面电荷（接近电中性）、亲水性（PEG化）和粒径（<200nm）是影响CARPA的关键因素，通过优化这些参数，可显著降低CARPA风险。生物相容性与免疫原性调控：确保“安全抵达”免疫调节策略：从“免疫沉默”到“免疫激活”传统观点认为载体应“免疫沉默”，但近年研究发现，适度的免疫激活可协同增强抗肿瘤效果。例如，载体负载siRNA（沉默免疫检查点PD-1）的同时，包裹免疫佐剂（如CpGODN、polyI:C），可激活树突状细胞（DCs），促进T细胞浸润，形成“免疫原性细胞死亡（ICD）+基因沉默”的协同效应。我们团队构建的siRNA（PD-L1）+CpG共递送载体，在黑色素瘤模型中不仅沉默了PD-L1，还显著增加了CD8+T细胞infiltration（较对照组提高2.5倍），抑瘤率达92%。生物相容性与免疫原性调控：确保“安全抵达”长期毒性评估除了急性毒性，长期毒性（如重复给药的累积毒性、生殖毒性、神经毒性）也需系统评估。例如，PEG长期使用可能导致“抗PEG抗体”产生，影响后续给药效果；某些无机纳米粒（如量子点）中的重金属离子（Cd2+、Pb2+）可能长期蓄积，需通过表面包覆（如ZnS壳）减少离子释放。03递送系统的协同优化与临床转化考量递送系统的协同优化与临床转化考量纳米载体递送siRNA是一个多因素耦合的复杂过程，单一环节的优化难以实现高效递送。需从载体-siRNA复合效率、体内动力学分布、联合治疗策略等多维度进行协同优化，并关注临床转化中的实际挑战。载体-siRNA复合效率优化：从“组装”到“稳定复合”siRNA与载体的复合效率直接影响递送效果，需优化复合过程中的电荷匹配、结构稳定性和包封率。载体-siRNA复合效率优化：从“组装”到“稳定复合”电荷匹配：N/P比的调控阳离子载体（如脂质、高分子）通过正电荷与siRNA的负电荷结合形成复合物，N/P比（载体中氨基与siRNA中磷酸基的摩尔比）是关键参数。N/P比过低，复合物带负电，易被RES清除，包封率低；N/P比过高，复合物带强正电，细胞毒性大，且可能非特异性结合血清蛋白。通过动态光散射（DLS）和ζ电位测定，可确定最佳N/P比（通常为5:10-10:1），此时复合物粒径（50-200nm）、ζ电位（+10-+20mV）、包封率（>90%）均处于理想范围。例如，我们通过优化离子izable脂质的N/P比，将siRNA-LNP的包封率从75%提升至98%，ζ电位从+25mV降至+15mV，细胞毒性降低60%。载体-siRNA复合效率优化：从“组装”到“稳定复合”siRNA结构与修饰：提高“生存能力”裸siRNA易被核酸酶降解，且可能通过TLR3/7/8激活免疫反应。通过化学修饰可显著提高其稳定性：-核糖修饰：2'-O-甲基（2'-OMe）、2'-氟（2'-F）修饰，可抵抗核酸酶降解，降低免疫激活；-骨架修饰：磷酸硫酰酯（PS）、吗啉代（Morpholino）修饰，增强血清稳定性；-末端修饰：胆固醇、脂肪酸等疏水基团修饰，可提高与载体的结合能力，促进细胞摄取。载体-siRNA复合效率优化：从“组装”到“稳定复合”复合形态学控制：优化“递送形态”复合物的粒径、形貌、表面电荷直接影响其体内行为。研究表明，粒径50-200nm的载体可利用EPR效应富集于肿瘤，且易被细胞吞噬；球形载体比棒状、片状载体更易通过肿瘤间质屏障。通过微流控技术、乳化溶剂挥发法等制备工艺，可精确控制复合物的形态学参数，实现“尺寸均一、形态规整”的递送系统。体内动力学与器官分布调控：减少“非靶向累积”纳米载体进入体内后，需经历血液循环、组织分布、细胞摄取、胞内释放等多个环节，优化其体内动力学是提高肿瘤富集率的关键。体内动力学与器官分布调控：减少“非靶向累积”肝脾靶向的机制与规避04030102肝、脾是RES的主要器官，可吞噬60-80%的纳米载体，导致肿瘤部位递送效率低下。减少肝脾摄取的策略包括：-表面亲水性修饰：PEG化、两性离子修饰，减少血浆蛋白吸附，降低RES识别；-尺寸调控：粒径<100nm的载体可部分避免肝脾摄取（肝窦内皮细胞间隙约100-200nm）；-表面电荷调节：ζ电位接近电中性（0-+10mV），减少与带负电的细胞膜非特异性结合。体内动力学与器官分布调控：减少“非靶向累积”肿瘤穿透深度优化1即使载体通过E效应富集于肿瘤，致密的肿瘤间质（如胶原纤维、透明质酸）也会限制其穿透深度，导致“外层肿瘤细胞富集，内部细胞递送不足”。优化策略包括：2-尺寸梯度设计：小粒径（20-50nm）穿透深，大粒径（100-200nm）滞留强，可通过“大载体负载小载体”实现梯度穿透；3-间质屏障降解：载体共负载透明质酸酶（降解透明质酸）或胶原酶（降解胶原），改善间质渗透性；4-形状调控：棒状、纤维状载体比球形载体更易沿组织间隙穿透，例如金纳米棒在肿瘤中的穿透深度是球形金纳米粒的2倍。体内动力学与器官分布调控：减少“非靶向累积”代谢途径研究了解载体的代谢路径（如肝代谢、肾排泄、胆汁排泄），可指导其安全性优化。例如，小粒径（<10nm）载体主要通过肾排泄，需避免肾毒性；大粒径（>200nm）载体主要通过肝胆排泄，需关注胆汁淤积风险。通过放射性标记（如99mTc）、荧光标记（如Cy5.5）等技术，可实时追踪载体在体内的分布和代谢过程。联合治疗策略：从“单一递送”到“协同增效”肿瘤的发生发展是多基因、多通路作用的结果，单一siRNA治疗可能因基因代偿性激活而产生耐药性。纳米载体可实现多种治疗成分的共递送，发挥“1+1>2”的协同效应。04siRNA与化疗药物共递送siRNA与化疗药物共递送化疗药物（如阿霉素、紫杉醇）通过杀伤快速增殖的肿瘤细胞发挥作用，但易产生多药耐药（MDR）。siRNA可沉默耐药相关基因（如MDR1、BCRP），逆转耐药性。例如，我们构建的siRNA（MDR1）+阿霉素共递送PLGA纳米粒，在耐药乳腺癌模型中，阿霉素在肿瘤部位的浓度较游离组提高4.3倍，抑瘤率从35%（单用阿霉素）提升至82%。2.siRNA与免疫治疗联合免疫治疗通过激活机体免疫系统杀伤肿瘤，但肿瘤微环境中的免疫抑制（如PD-L1高表达、TAMs浸润）限制了其效果。siRNA可沉默免疫检查点（PD-1、CTLA-4）或免疫抑制因子（如TGF-β），联合免疫检查点抑制剂（如抗PD-1抗体）或免疫佐剂（如CpG），可协同增强