病理科特殊染色诊断诊疗指南与技术操作规范

病理科特殊染色诊断诊疗指南与技术操作规范一、引言病理科特殊染色是在常规苏木精伊红（HE）染色基础上发展起来的一系列染色方法。这些染色方法利用组织、细胞内某些化学成分与特定染料之间的特异反应，使病变组织和细胞内的化学成分、代谢产物等呈现不同的颜色，从而辅助疾病的诊断、鉴别诊断、预后评估等。本诊疗指南与技术操作规范旨在为病理科医生和技术人员提供全面、准确的特殊染色诊断和操作指导。二、特殊染色的分类及应用（一）用于显示糖类的染色1.过碘酸雪夫（PAS）染色原理：过碘酸能将组织内的多糖（如糖原、黏多糖等）氧化成醛基，醛基与雪夫试剂结合形成紫红色产物。应用：常用于诊断含糖原的肿瘤，如透明细胞糖原瘤；鉴别黏液的类型，中性黏液呈阳性，酸性黏液呈阴性；还可用于显示基底膜、网状纤维等结构。操作步骤切片脱蜡至水。用0.5%过碘酸溶液氧化510分钟。蒸馏水洗2次，每次3分钟。浸入雪夫试剂中1530分钟。流水冲洗510分钟。苏木精复染细胞核12分钟。盐酸酒精分化，流水冲洗返蓝。脱水、透明、封片。结果判断：糖原、中性黏液等呈紫红色，细胞核呈蓝色。2.阿尔辛蓝（AB）染色原理：阿尔辛蓝是一种阳离子染料，在不同pH值条件下可与组织内的酸性黏液物质结合。在pH2.5时，能显示多种酸性黏液物质；在pH1.0时，主要显示硫酸化黏液。应用：主要用于鉴别肿瘤的来源和类型，如胃肠道腺癌产生的酸性黏液呈阳性；还可用于诊断某些先天性黏液代谢异常疾病。操作步骤切片脱蜡至水。用pH2.5或pH1.0的阿尔辛蓝溶液染色30分钟。蒸馏水洗2次，每次3分钟。苏木精复染细胞核12分钟。盐酸酒精分化，流水冲洗返蓝。脱水、透明、封片。结果判断：酸性黏液呈蓝色，细胞核呈蓝色。（二）用于显示脂肪的染色1.苏丹Ⅲ染色原理：苏丹Ⅲ是一种脂溶性染料，可溶解于组织内的脂肪中，使脂肪呈现橘红色。应用：主要用于诊断脂肪瘤、脂肪肉瘤等含脂肪的肿瘤；鉴别组织内的脂肪变性。操作步骤冰冻切片或甲醛固定的组织切片脱蜡至水。用70%酒精稍洗。浸入苏丹Ⅲ染液中染色1015分钟。用70%酒精分化至背景清晰。蒸馏水洗。苏木精复染细胞核12分钟。流水冲洗返蓝。甘油明胶封片。结果判断：脂肪呈橘红色，细胞核呈蓝色。2.油红O染色原理：油红O也是一种脂溶性染料，对脂肪有高度亲和力，可使脂肪染成红色。应用：与苏丹Ⅲ染色类似，常用于脂肪的检测和鉴别。操作步骤冰冻切片或甲醛固定的组织切片脱蜡至水。用60%异丙醇稍洗。浸入油红O染液中染色1015分钟。用60%异丙醇分化至背景清晰。蒸馏水洗。苏木精复染细胞核12分钟。流水冲洗返蓝。甘油明胶封片。结果判断：脂肪呈红色，细胞核呈蓝色。（三）用于显示蛋白质的染色1.Masson三色染色原理：组织经酸性复红染色后，再用磷钼酸和苯胺蓝处理，胶原纤维被苯胺蓝染成蓝色，肌纤维、红细胞等被酸性复红染成红色，细胞核被苏木精染成蓝色。应用：常用于鉴别肿瘤组织中的纤维成分和肌成分，如鉴别平滑肌瘤和纤维瘤；观察组织的纤维化程度，在肝纤维化、肺纤维化等疾病的诊断和研究中具有重要价值。操作步骤切片脱蜡至水。苏木精染细胞核510分钟。盐酸酒精分化，流水冲洗返蓝。浸入酸性复红染液中染色510分钟。用磷钼酸溶液处理510分钟。直接浸入苯胺蓝染液中染色510分钟。用0.2%冰醋酸溶液分化23分钟。脱水、透明、封片。结果判断：胶原纤维呈蓝色，肌纤维、红细胞等呈红色，细胞核呈蓝色。2.天狼星红染色原理：天狼星红是一种酸性染料，可与胶原纤维结合，在偏振光下呈现不同颜色，Ⅰ型胶原纤维呈红色，Ⅲ型胶原纤维呈绿色。应用：主要用于研究不同类型胶原纤维在组织中的分布和含量变化，在肝纤维化、心肌纤维化等疾病的研究中应用广泛。操作步骤切片脱蜡至水。浸入0.1%天狼星红饱和苦味酸溶液中染色12小时。用0.01N盐酸溶液快速分化。蒸馏水洗。脱水、透明、封片。结果判断：在普通光线下，胶原纤维呈红色；在偏振光下，Ⅰ型胶原纤维呈红色，Ⅲ型胶原纤维呈绿色。（四）用于显示核酸的染色1.甲基绿派洛宁染色原理：甲基绿对DNA有较强的亲和力，可将DNA染成绿色；派洛宁对RNA有亲和力，可将RNA染成红色。应用：用于判断细胞内DNA和RNA的分布和含量变化，在病毒感染性疾病的诊断中，可显示病毒核酸的存在；还可用于研究细胞的增殖和分化状态。操作步骤切片脱蜡至水。浸入甲基绿派洛宁染液中染色3060分钟。用丙酮快速分化。再用丙酮二甲苯（1:1）混合液处理。二甲苯透明，封片。结果判断：细胞核内的DNA呈绿色，细胞质和核仁内的RNA呈红色。（五）用于显示色素的染色1.普鲁士蓝染色原理：组织内的三价铁离子在酸性条件下与亚铁氰化钾反应，生成蓝色的普鲁士蓝沉淀。应用：用于检测组织内的含铁血黄素，在诊断贫血、铁代谢紊乱性疾病以及某些肿瘤（如含铁血黄素沉着性纤维瘤）中具有重要意义。操作步骤切片脱蜡至水。浸入等量混合的2%亚铁氰化钾溶液和2%盐酸溶液中染色1530分钟。蒸馏水洗。苏木精复染细胞核12分钟。流水冲洗返蓝。脱水、透明、封片。结果判断：含铁血黄素呈蓝色，细胞核呈蓝色。三、特殊染色的质量控制（一）标准切片的选择应选择已知染色结果的标准切片，如用于PAS染色的含糖原的肝脏组织切片，用于苏丹Ⅲ染色的含脂肪的肾上腺组织切片等。标准切片应定期更新，以确保其质量稳定。（二）试剂的配制和保存1.试剂的配制：严格按照配方准确配制试剂，使用高质量的化学试剂，蒸馏水应符合相关标准。例如，过碘酸溶液应现配现用，以免氧化失效。2.试剂的保存：不同的试剂有不同的保存条件，如苏丹Ⅲ染液应避光保存，存放于阴凉处；雪夫试剂应密封保存于冰箱中。定期检查试剂的有效期，过期试剂应及时更换。（三）染色过程的监控在染色过程中，应设置阳性对照和阴性对照。阳性对照应使用已知染色结果为阳性的组织切片，阴性对照可使用不含目标物质的组织切片或用阻断剂处理后的组织切片。同时，应严格控制染色时间、温度等条件，确保染色结果的一致性和准确性。四、特殊染色的诊断报告（一）报告内容1.一般信息：包括患者的姓名、性别、年龄、标本来源、送检科室等。2.染色方法：详细记录所采用的特殊染色方法，如PAS染色、Masson三色染色等。3.染色结果：客观描述染色后的形态特征和染色强度，如“肿瘤细胞内可见大量PAS阳性的糖原颗粒”“胶原纤维呈Masson三色染色阳性，呈蓝色”等。必要时，可使用+、++、+++等符号表示染色强度。4.诊断意见：结合临床资料、HE染色结果和特殊染色结果，做出明确的诊断或鉴别诊断意见。例如，“结合PAS染色和HE染色结果，考虑为透明细胞糖原瘤”。（二）报告规范性诊断报告应语言准确、简洁，避免使用模糊不清的词汇。报告应由具有相应资质的病理医生审核签发，签字并注明日期。五、特殊染色的安全注意事项（一）化学试剂的安全使用1.许多特殊染色试剂具有毒性、腐蚀性或刺激性，如过碘酸、甲醛、苯胺蓝等。在使用这些试剂时，应佩戴手套、口罩和护目镜等防护用品，避免试剂接触皮肤和眼睛。2.试剂应在通风良好的环境中使用，如在通风橱内进行操作，以减少有害气体的吸入。3.废弃的试剂应按照相关规定进行处理，避免污染环境。例如，含重金属的试剂应集中收集，交由专业的废弃物处理机构处理。（二）仪器设备的安全操作1.使用烤箱、显微镜等仪器设备时，应严格按照操作规程进行操作。烤箱的温度应设置在安全范围内，避免发生火灾。2.定期对仪器设备进行维护和保养，确保其正常运行。如显微镜的镜头应定期清洁，电器设备应检查接地是否良好。六、特殊染色的培训与持续教育（一）专业培训新入职的病理科技术人员应接受系统的特殊染色技术培训，内容包括染色原理、试剂配制、操作步骤、质量控制等方面。培训可采用理论授课、实际操作演示和案例分析等相结合的方式，确保技术人员掌握特殊染色技术的要点。（二）持续教育病理科医生和技术人员应定期参加学术会议、培训班等，了解特殊染色技术的最新进展和应用。同时，应鼓励技术人员开展科研工作，探索新的染色方法和应用领域，不断提高特殊染色的诊断水平。七、特殊染色的新技术与发展趋势（一）自动化染色技术随着科技的发展，自动化染色设备逐渐应用于病理科。自动化染色设备具有操作简便、染色结果稳定等优点，可大大提高工作效率和染色质量。例如，一些全自动特殊染色仪可实现从切片脱蜡到封片的全过程自动化操作。（二）分子病理与特殊染色的结合分子病理技术的发展为