原位PCR技术教学课件

原位PCR技术单击此处添加副标题有限公司汇报人：XX01原位PCR技术概述02原位PCR技术原理03原位PCR实验操作04原位PCR技术应用实例05原位PCR技术挑战与展望06原位PCR技术相关资源目录原位PCR技术概述01技术定义在组织或细胞内直接扩增靶基因，结合定位与高灵敏度检测核酸的技术原位PCR技术发展历程1969年原位杂交技术建立，1985年PCR技术诞生，1990年Hasse等首创原位PCR。技术起源从传统PCR到原位PCR，结合定位与扩增优势，推动分子细胞水平研究。技术演进应用领域用于HIV、HPV、HBV等病毒感染及病原体分布规律检查。病原体检测检测单基因病、重组基因、癌基因片段及遗传病基因。基因研究原位PCR技术原理02基本原理原位PCR结合PCR扩增与原位杂交定位，实现细胞内靶序列检测。PCR与定位结合01在细胞原位扩增，保持亚细胞结构，检测特定DNA或RNA序列。保持细胞结构02关键步骤用多聚甲醛固定组织，蛋白酶K消化处理增强细胞膜通透性组织固定与通透在组织内进行PCR扩增，结合原位杂交或荧光检测定位核酸原位扩增与检测技术优势01精确定位可确定核酸在细胞内的具体位置，实现亚细胞定位检测02高灵敏度能检测出单拷贝或低拷贝的核酸序列，灵敏度远超原位杂交03保持形态在扩增核酸的同时，保持细胞或组织的原有形态结构原位PCR实验操作03实验材料准备样本处理材料准备适合原位PCR的样本切片及固定液，确保样本完整性。试剂与仪器准备PCR试剂、引物、探针及原位PCR专用仪器，确保实验准确性。实验步骤详解选薄切片，固定后洗涤晾干，确保细胞形态完整样品制备与固定根据组织特性优化蛋白酶K浓度及消化时间，灭活酶活性蛋白酶消化处理加反应液扩增，洗涤后直接或间接法检测扩增产物PCR扩增与检测注意事项确保实验环境清洁无尘，温度湿度适宜，避免污染影响结果。实验环境控制严格按照说明书配制和使用试剂，避免交叉污染和浪费。试剂使用规范原位PCR技术应用实例04病理学研究原位PCR可检测基因突变，如Tokusashi等运用该技术区分鼠肝组织中正常与突变清蛋白基因。基因突变检测原位PCR可定位基因表达，如检测肿瘤基因表达细胞百分比，确定转移性肿瘤来源。基因表达定位原位PCR用于病毒感染检查，如HIV、HPV、HBV等，提高检出率并观察病原体体内分布。病毒感染检查细胞生物学研究原位PCR可确定目的基因在细胞内的具体位置，如HIV、HBV等病毒检测。基因定位研究协助确定感染特定病毒或具有肿瘤基因的细胞数量及百分比。细胞数量统计遗传学研究原位PCR可精准定位突变基因，如检测鼠肝组织中清蛋白基因突变。基因突变检测01用于检测染色体易位，如人鼠杂交瘤细胞中14及18号染色体易位。染色体易位分析02原位PCR技术挑战与展望05当前技术挑战操作复杂影响因素多，需特殊设备支持特异性不足易出现假阳性，需严格设计实验对照0102技术改进方向01提升特异性优化引物设计，减少错配，降低假阳性率02简化操作流程改进酶制剂，缩短实验时间，提升扩增效率未来应用前景随着设备优化，原位PCR有望在更多实验室普及，推动病理诊断发展技术普及01在肿瘤、遗传病、病毒检测等领域深化应用，助力精准医疗多领域拓展02原位PCR技术相关资源06学术论文资源牡蛎疱疹病毒间接原位杂交PCR检测方法，实现病毒在宿主组织中的精确定位。01病毒检测研究染色体R显带、双色荧光原位杂交及实时荧光定量PCR，提升急性早幼粒细胞性白血病诊断价值。02疾病诊断应用实验设备与试剂实验设备实验试剂01原位PCR仪、恒温培养箱、显微镜、离心机等是原位PCR实验的关键设备。02多聚甲醛、蛋白酶K、dNTP混合液、TaqDNA聚合酶等是原位PCR实验的常用试剂。培训与交流平台01ResearchGate平台研究者专属交流平