生物样本 RNA 提取技术员岗位招聘考试试卷及答案

生物样本RNA提取技术员岗位招聘考试试卷及答案一、填空题（每题1分，共10分）1.RNA提取的核心挑战是防止____污染。2.常用的RNA变性剂是____。3.酚氯仿法中，氯仿的主要作用是抽提____。4.真核RNA电泳可见28S、18S和____三条清晰条带。5.检测RNA浓度的常用方法是____分光光度法。6.RNA完整性常用____值评估（Agilent技术）。7.实验用水需经____处理以灭活RNase。8.反转录反应的模板是____。9.RNA长期保存应置于____℃或液氮中。10.硅柱法提取RNA依赖____条件下的吸附作用。二、单项选择题（每题2分，共20分）1.以下能有效抑制RNase的试剂是？A.SDSB.异硫氰酸胍C.乙醇D.Tris2.RNA电泳中18S亮度高于28S，提示？A.RNA降解B.上样量不足C.电泳时间短D.胶浓度高3.纯RNA的A260/A280比值约为？A.1.5B.1.8-2.0C.2.5D.1.04.加入异丙醇的目的是？A.沉淀RNAB.抽提蛋白C.溶解RNAD.抑制RNase5.提取难度最大的样本是？A.新鲜组织B.冻存细胞C.FFPE样本D.新鲜血液6.DEPC处理水的作用是？A.稳定RNAB.灭活RNaseC.沉淀杂质D.溶解蛋白7.反转录引物不包括？A.OligodTB.RandomprimerC.GSPD.BamHI引物8.RNA保存应避免？A.低温B.反复冻融C.加RNase抑制剂D.避光9.硅柱法洗涤常用试剂是？A.75%乙醇B.异丙醇C.酚氯仿D.DEPC水10.导致RNA提取量低的原因是？A.样本充足B.裂解充分C.洗脱体积过大D.无RNase污染三、多项选择题（每题2分，共20分）1.防RNase污染的措施包括？A.戴手套B.DEPC处理试剂C.灭菌耗材D.避免交叉污染2.RNA提取常用方法有？A.酚氯仿法B.硅柱法C.CTAB法D.碱裂解法3.影响RNA完整性的因素是？A.RNase污染B.缓冲液陈旧C.上样量过多D.胶浓度不当4.RNA浓度检测方法有？A.NanodropB.QubitC.琼脂糖电泳D.Bradford法5.样本预处理注意事项是？A.新鲜样本快速处理B.冻存样本避免反复冻融C.组织充分研磨D.血液加抗凝剂6.影响RNA纯度的杂质是？A.蛋白B.DNAC.酚D.胍盐7.反转录前RNA处理包括？A.DNaseI去基因组DNAB.加热变性C.加RNase抑制剂D.浓缩RNA8.硅柱法步骤包括？A.样本裂解B.上柱吸附C.洗涤杂质D.洗脱RNA9.适合提取RNA的样本是？A.新鲜叶片B.冻存细胞沉淀C.FFPE切片D.甲醛固定样本10.RNA提取失败的常见原因是？A.RNase污染B.裂解不充分C.试剂过期D.洗脱不彻底四、判断题（每题2分，共20分）1.异硫氰酸胍仅抑制RNase活性。（×）2.琼脂糖电泳可同时检测RNA浓度和完整性。（√）3.A260/A230比值越低，RNA纯度越高。（×）4.冻存组织需液氮研磨提取RNA。（√）5.硅柱法比酚氯仿法纯度更高。（√）6.反转录必须用OligodT引物。（×）7.DEPC水可直接用于RNA提取。（√）8.血液提取RNA需先去除红细胞。（√）9.RNA在-20℃可长期保存。（×）10.异丙醇用于沉淀RNA。（√）五、简答题（每题5分，共20分）1.简述RNA提取防RNase污染的核心措施？答：①操作戴无菌手套，避免皮肤接触；②试剂/耗材经DEPC处理或灭菌；③实验区用RNase去除剂清洁；④新鲜样本30min内处理，冻存样本避免反复冻融；⑤裂解液含变性剂（如异硫氰酸胍）；⑥避免交叉污染，试剂专用；⑦电泳用无RNase缓冲液。2.硅柱法RNA提取的基本步骤？答：①样本裂解：加变性剂裂解，释放RNA并抑制RNase；②上柱吸附：高盐下RNA结合硅柱；③洗涤：用洗涤液去除蛋白、DNA等杂质；④干燥：离心除残留洗涤液；⑤洗脱：低盐DEPC水洗脱RNA，收集即得纯化产物。3.如何通过琼脂糖电泳判断RNA完整性？答：①观察条带：完整RNA可见清晰28S（亮度约为18S的2倍）、18S、5S；②若28S模糊/亮度<18S，提示降解；③若只有smear无条带，严重降解；④需用新鲜MOPS缓冲液、1%琼脂糖胶，电压5-8V/cm。4.RNA纯度检测的常用指标及意义？答：①A260/A280：1.8-2.0为纯RNA，<1.8提示蛋白/酚污染，>2.0提示DNA污染；②A260/A230：>1.8为纯，<1.8提示盐/小分子杂质；③浓度=A260×稀释倍数×40μg/mL，反映RNA含量。六、讨论题（每题5分，共10分）1.若RNAA260/A280=1.5，可能原因及解决方法？答：原因：蛋白残留（裂解不充分）、酚污染（抽提时触碰有机相）、RNase降解。解决：①重新抽提时充分研磨组织；②酚氯仿抽提后小心吸取上层水相；③若酚残留，再次氯仿抽提；④确认耗材/试剂无RNase，戴手套操作；⑤更换新鲜样本，避免反复冻融。2.不同样本RNA提取的注意事项差异？答：①新鲜组织：快速处理，液氮研磨或直接加裂解液；②冻存组织：液氮研磨，避免融化激活RNase；③血液：加EDTA抗凝，红细胞裂解液去除红细胞；④FFPE样本：二甲苯脱蜡，蛋白酶K消化，用专用试剂盒，注意脱蜡彻底。---答案部分一、填空题1.RNase2.异硫氰酸胍3.蛋白质4.5S5.Nanodrop（分光光度法）6.RIN7.DEPC8.RNA9.-8010.高盐二、单项选择题1.B2.A3.B4.A5.C6.B7.D8.B9.A10.C三