慢性牙周炎与冠心病患者龈下菌斑中三种致病菌分布及关联研究

慢性牙周炎与冠心病患者龈下菌斑中三种致病菌分布及关联研究一、引言1.1研究背景慢性牙周炎（ChronicPeriodontitis,CP）与冠心病（CoronaryHeartDisease,CHD）作为临床上极为常见的两种疾病，对人类健康构成了严重威胁。慢性牙周炎在全球范围内广泛流行，影响着大量人群。据相关研究表明，其在成年人中的患病率相当高，部分地区甚至高达90%以上。这一疾病主要是由牙菌斑中的微生物及其毒性产物引发的牙周支持组织的慢性感染性疾病。牙周组织在炎症的持续侵蚀下，会逐渐出现牙龈红肿、出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收等症状，随着病情的不断发展，最终可能导致牙齿松动、脱落，极大地影响患者的咀嚼功能、发音以及面部美观，进而降低生活质量。不仅如此，慢性牙周炎还与多种全身系统性疾病存在关联，如糖尿病、心血管疾病、呼吸系统疾病等，进一步加重了患者的健康负担。冠心病同样是一种严重危害人类健康的心血管疾病，其发病率和死亡率在全球范围内均居高不下。据世界卫生组织（WHO）统计，每年因冠心病死亡的人数众多。冠心病的主要病理基础是冠状动脉粥样硬化，当冠状动脉内的粥样斑块逐渐形成并不断发展，会导致血管狭窄甚至堵塞，使得心肌供血不足，从而引发心绞痛、心肌梗死等严重的心血管事件。其发病机制复杂，涉及多种因素，如高血压、高血脂、高血糖、吸烟、肥胖等传统危险因素，以及炎症反应、氧化应激等新兴因素。近年来，越来越多的研究开始关注到慢性炎症在冠心病发病中的重要作用，而牙周炎作为一种常见的慢性炎症性疾病，与冠心病之间的潜在联系逐渐成为研究热点。牙周致病菌作为慢性牙周炎的主要致病因素，在牙周炎的发生、发展过程中扮演着关键角色。其中，福赛斯坦纳菌（Tannerellaforsythensis,T.f）、牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonasgingivalis,P.g）、中间普氏菌（Prevotellaintermedia,P.i）被认为是与慢性牙周炎密切相关的三种主要致病菌。T.f是一种革兰氏阴性厌氧杆菌，具有较强的致病性，能够产生多种毒力因子，如蛋白酶、内***等，这些毒力因子可以破坏牙周组织的细胞外基质，抑制宿主的免疫反应，从而促进牙周炎的发展；P.g也是革兰氏阴性厌氧菌，是公认的牙周炎主要致病菌之一，它能够黏附、侵入牙周组织细胞，逃避宿主的免疫监视，并通过分泌多种酶和毒素，如牙龈蛋白酶、脂多糖等，破坏牙周组织的结构和功能；P.i同样为革兰氏阴性厌氧菌，常与其他牙周致病菌协同作用，参与牙周炎的病理过程，其产生的一些代谢产物也能够引发炎症反应，对牙周组织造成损害。越来越多的研究提示，牙周致病菌与冠心病之间可能存在着紧密的联系。一方面，牙周致病菌及其产生的毒素可以通过血液循环进入全身系统，到达冠状动脉，直接对血管内皮细胞造成损伤，促进动脉粥样硬化斑块的形成和发展；另一方面，牙周炎引发的慢性炎症反应会导致机体产生一系列炎症介质和细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些炎症介质和细胞因子可以进入血液循环，作用于心血管系统，引起血管内皮功能紊乱、血小板聚集、脂质代谢异常等，进而增加冠心病的发病风险。此外，一些研究还发现，在冠心病患者的冠状动脉粥样硬化斑块中检测到了牙周致病菌的DNA，这进一步表明牙周致病菌可能直接参与了冠心病的发病过程。然而，目前关于这三种牙周致病菌在慢性牙周炎和冠心病患者龈下菌斑中的分布情况以及它们与这两种疾病之间的具体关系仍不完全明确。深入研究它们在慢性牙周炎和冠心病患者龈下菌斑中的分布，探讨其检出率与这两种疾病的关系，以及分析三种致病菌之间的相关性，不仅有助于进一步揭示慢性牙周炎与冠心病的发病机制，为这两种疾病的防治提供新的理论依据，而且对于提高人们对口腔健康与全身健康关系的认识，制定更加有效的综合防治策略具有重要的临床意义。1.2研究目的本研究旨在通过严格的实验设计和科学的检测方法，精准地对比福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）这三种主要牙周致病菌在慢性牙周炎患者与冠心病患者龈下菌斑中的分布情况。在此基础上，深入探讨这三种牙周致病菌的检出率与慢性牙周炎和冠心病这两种疾病各自严重程度之间的内在联系，进一步明确它们在疾病发生、发展过程中所扮演的角色。同时，全面分析三种牙周致病菌之间的相关性，揭示它们在龈下菌斑生态环境中的相互作用关系，为深入理解慢性牙周炎与冠心病的发病机制提供关键的理论依据，为临床实践中这两种疾病的早期诊断、预防以及综合治疗策略的制定开辟新的思路，切实提高疾病的防治水平，改善患者的健康状况和生活质量。1.3研究意义本研究对福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）在慢性牙周炎和冠心病患者龈下菌斑中的分布展开深入探究，具有多方面的重要意义。从理论层面来看，慢性牙周炎和冠心病作为临床上常见且危害严重的疾病，尽管对它们各自的研究已取得一定成果，但对于两者之间的内在联系，特别是牙周致病菌在其中所起的作用，仍存在诸多未知。通过本研究，有望揭示这三种牙周致病菌在慢性牙周炎和冠心病患者龈下菌斑中的独特分布规律，进一步明确它们的检出率与两种疾病严重程度之间的关联，以及三种致病菌之间的相互关系。这不仅能够丰富慢性牙周炎和冠心病的发病机制理论，为深入理解这两种疾病的病理过程提供新的视角和关键依据，而且有助于完善口腔微生物学与心血管疾病交叉领域的理论体系，推动相关学科的发展。例如，若研究发现T.f在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率与冠心病病情严重程度呈正相关，那么将为冠心病的发病机制研究提供新的方向，可能提示T.f在冠状动脉粥样硬化进程中扮演重要角色。从实践意义而言，本研究成果对慢性牙周炎和冠心病的预防、诊断及治疗具有重要的指导价值。在预防方面，若明确某些牙周致病菌与这两种疾病的紧密联系，便可针对这些致病菌采取有效的预防措施。比如，通过加强口腔卫生宣传教育，提高公众对口腔健康的重视程度，推广正确的刷牙方法和使用牙线、漱口水等口腔清洁用品，减少牙周致病菌在口腔内的滋生和繁殖，从而降低慢性牙周炎和冠心病的发病风险。在诊断方面，可将这三种牙周致病菌的检测作为慢性牙周炎和冠心病早期诊断的辅助指标。例如，对于有冠心病家族史或其他高危因素的人群，若在其龈下菌斑中检测到较高水平的特定牙周致病菌，可提前预警，以便进一步进行心血管系统检查，实现疾病的早发现、早诊断。在治疗方面，研究结果可为制定更加科学、有效的综合治疗方案提供依据。对于同时患有慢性牙周炎和冠心病的患者，在治疗冠心病的同时，积极治疗牙周炎，清除龈下菌斑中的致病微生物，可能有助于改善冠心病的病情。临床研究表明，对牙周炎患者进行有效的牙周治疗后，其体内的炎症因子水平明显下降，这可能对冠心病的治疗产生积极影响。此外，本研究还有助于提高口腔医生和心血管医生对两种疾病相关性的认识，促进多学科之间的协作与交流，为患者提供更加全面、优质的医疗服务。二、相关理论基础2.1慢性牙周炎概述2.1.1定义与分类慢性牙周炎是一种极为常见的口腔疾病，在口腔医学领域，它被定义为主要由牙菌斑中的微生物及其毒性产物引发的牙周支持组织的慢性感染性疾病。牙菌斑作为慢性牙周炎的始动因子，是一种牢固附着于牙齿表面的细菌性生物膜，其中包含了多种具有致病性的微生物。这些微生物在牙菌斑中大量繁殖，并持续释放各种毒性物质，如内***、蛋白酶等，它们不断侵蚀牙周组织，逐渐破坏牙周组织的正常结构和功能，从而引发慢性牙周炎。慢性牙周炎具有一系列典型的临床特征。在疾病初期，患者常表现出牙龈的慢性炎症，牙龈颜色会由正常的粉红色变为鲜红或暗红色，质地也会变得松软脆弱，探诊时极易出血。随着病情的进一步发展，牙周袋会逐渐形成。牙周袋是指牙龈与牙齿之间原本紧密贴合的结合上皮向根方增殖，形成的病理性加深的盲袋。牙周袋内会积聚大量的菌斑、牙石以及炎性渗出物，进一步加重炎症反应。同时，牙槽骨也会出现吸收现象，牙槽骨是支持牙齿的重要结构，牙槽骨的吸收会导致牙齿逐渐失去支撑，出现松动、移位等症状。在疾病晚期，牙齿松动严重，甚至会自行脱落，给患者的口腔功能和生活质量带来极大的影响。根据病情的严重程度，慢性牙周炎可分为轻度、中度和重度三个等级。轻度慢性牙周炎的主要表现为牙龈有炎症，探诊出血，牙周袋深度一般不超过4mm，牙槽骨吸收不超过根长的1/3，牙齿通常无明显松动。中度慢性牙周炎时，牙龈炎症较为明显，牙周袋深度一般在4-6mm之间，牙槽骨吸收可达根长的1/3-1/2，牙齿可能会出现轻度松动，部分患者还可能出现牙龈退缩、牙根暴露等症状。重度慢性牙周炎则表现为牙龈炎症严重，牙周袋深度超过6mm，牙槽骨吸收超过根长的1/2，牙齿松动明显，甚至可能出现牙齿移位、脱落等情况，患者的咀嚼功能会受到严重影响，口腔卫生状况也往往较差，口臭明显。明确慢性牙周炎的定义、临床特征及分类，对于准确诊断和有效治疗该疾病具有重要的指导意义。2.1.2发病机制慢性牙周炎的发病是一个复杂且渐进的过程，涉及细菌感染、炎症反应和免疫反应等多个关键环节。细菌感染是慢性牙周炎发病的起始因素。口腔中存在着种类繁多的微生物，其中一些特定的细菌，如福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）等，被认为是慢性牙周炎的主要致病菌。这些致病菌具有独特的黏附机制，能够特异性地黏附于牙周组织表面，如牙龈上皮细胞、牙骨质等。例如，牙龈卟啉单胞菌可以通过其表面的菌毛和黏附素与牙龈上皮细胞表面的受体结合，从而牢固地附着在牙周组织上。一旦黏附成功，它们便开始在牙周组织表面大量繁殖，形成复杂的生物膜结构，即牙菌斑。牙菌斑中的致病菌不断代谢产生各种毒性产物，如内***、蛋白酶、外毒素等，这些毒性产物直接对牙周组织细胞造成损伤，破坏牙周组织的细胞外基质，干扰细胞的正常代谢和功能，进而引发炎症反应。炎症反应是慢性牙周炎发病过程中的重要环节。当牙周组织受到细菌及其毒性产物的刺激后，机体的免疫系统会迅速做出反应，启动炎症过程。首先，巨噬细胞、中性粒细胞等免疫细胞会被趋化到炎症部位。巨噬细胞通过吞噬作用摄取细菌及其毒性产物，同时释放一系列炎症介质，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等。这些炎症介质具有强大的生物学活性，它们可以激活其他免疫细胞，扩大炎症反应的范围和强度。例如，TNF-α可以诱导血管内皮细胞表达黏附分子，促进中性粒细胞等免疫细胞向炎症部位的黏附和迁移；IL-1能够刺激成纤维细胞产生前列腺素E2（PGE2），PGE2可引起血管扩张、通透性增加，导致局部组织充血、水肿，同时还能促进破骨细胞的活化，加速牙槽骨的吸收。中性粒细胞则通过释放活性氧物质和蛋白酶等，直接杀伤细菌，但在这个过程中，也会对牙周组织造成一定的损伤。随着炎症的持续发展，炎症细胞不断浸润，炎症介质持续释放，导致牙周组织的炎症反应逐渐加重，牙周袋形成，牙槽骨开始吸收。免疫反应在慢性牙周炎的发病机制中也起着关键作用。机体的免疫系统试图通过免疫反应清除牙周致病菌，维护牙周组织的健康，但在这个过程中，免疫反应也可能对牙周组织造成损伤。一方面，体液免疫反应中产生的抗体可以与细菌表面的抗原结合，通过调理作用促进吞噬细胞对细菌的吞噬和清除。然而，抗原-抗体复合物的形成有时也会激活补体系统，产生一些具有炎症活性的补体片段，如C3a、C5a等，这些补体片段可以进一步加剧炎症反应，导致牙周组织的损伤。另一方面，细胞免疫反应中，T淋巴细胞被激活后，会释放多种细胞因子，如γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）等。IFN-γ可以激活巨噬细胞，增强其吞噬和杀伤能力，但同时也会促进炎症介质的释放；IL-2则可以促进T淋巴细胞的增殖和分化，进一步扩大免疫反应。此外，免疫反应过程中还会产生一些自身抗体，如抗牙龈抗体、抗胶原蛋白抗体等，这些自身抗体与牙周组织中的自身抗原结合，引发自身免疫反应，对牙周组织造成损伤。在慢性牙周炎的发病过程中，细菌感染、炎症反应和免疫反应相互作用、相互影响，共同推动疾病的发展。2.1.3流行病学特征慢性牙周炎在全球范围内广泛流行，严重影响着人们的口腔健康和生活质量。据世界卫生组织（WHO）的相关调查数据显示，全球范围内不同程度的牙周炎患病率较高，其中成年人的患病率尤为突出。在一些发达国家，如美国，成年人慢性牙周炎的患病率可达40%-60%；在欧洲部分国家，患病率也处于较高水平。在发展中国家，由于口腔卫生保健意识相对薄弱、口腔医疗资源有限等因素，慢性牙周炎的患病率可能更高。例如，在非洲的一些地区，慢性牙周炎的患病率可高达80%以上。在国内，慢性牙周炎同样是一种常见的口腔疾病。根据第四次全国口腔健康流行病学调查结果显示，我国35-44岁居民中，牙龈出血检出率为87.4%，牙石检出率高达96.7%，这表明我国成年人的牙周健康状况不容乐观，慢性牙周炎的患病情况较为普遍。进一步分析不同地区的情况，发现我国东部地区和城市居民的牙周健康状况相对较好，而西部地区和农村居民的牙周炎患病率较高。这可能与地区经济发展水平、口腔卫生保健服务的可及性以及居民的口腔健康意识等因素有关。在经济发达的东部地区和城市，居民通常能够获得更好的口腔医疗服务，对口腔健康的重视程度也较高，会定期进行口腔检查和清洁，从而降低了慢性牙周炎的发病风险；而在经济相对落后的西部地区和农村，口腔卫生保健资源相对匮乏，居民的口腔健康知识普及程度较低，口腔卫生习惯较差，导致慢性牙周炎的患病率居高不下。慢性牙周炎在不同人群中的分布还存在明显的年龄差异。随着年龄的增长，慢性牙周炎的患病率和严重程度呈逐渐上升的趋势。在青少年时期，由于身体处于生长发育阶段，口腔卫生习惯逐渐养成，慢性牙周炎的患病率相对较低。然而，进入成年期后，随着生活方式的改变、口腔卫生维护不当以及一些全身因素的影响，慢性牙周炎的患病率开始逐渐增加。到了老年期，由于牙周组织的生理性退变、牙齿磨损、牙根暴露等原因，以及老年人可能患有多种全身性疾病，如糖尿病、心血管疾病等，这些因素都增加了慢性牙周炎的发病风险，使得老年人的慢性牙周炎患病率和严重程度明显高于其他年龄段。据统计，我国65-74岁老年人中，牙周袋检出率高达62.8%，牙齿缺失率也较高，这充分说明了慢性牙周炎在老年人中的严重程度。此外，慢性牙周炎的患病率在性别上也存在一定差异。一般来说，男性的患病率略高于女性。这可能与男性的生活习惯、口腔卫生意识以及激素水平等因素有关。男性在日常生活中可能更易吸烟、饮酒，这些不良生活习惯会对牙周组织造成损害，增加慢性牙周炎的发病风险；同时，男性对口腔卫生的重视程度相对较低，刷牙方法不正确、刷牙时间不足等情况较为常见，导致口腔卫生状况较差，容易滋生细菌，引发慢性牙周炎。而女性在生理周期和孕期等特殊时期，由于激素水平的变化，也会对牙周组织产生一定影响，增加患牙周炎的可能性，但总体上男性的患病率仍高于女性。明确慢性牙周炎的流行病学特征，有助于针对性地制定预防和治疗策略，提高公众的牙周健康水平。2.2冠心病概述2.2.1定义与分类冠心病，全称为冠状动脉粥样硬化性心脏病，是一种由于冠状动脉粥样硬化，致使血管管腔狭窄或闭塞，进而导致心肌缺血缺氧或坏死的心脏疾病，在心血管疾病领域中占据着极为重要的地位。冠状动脉作为为心肌提供血液供应的关键血管，其健康状况直接关乎心肌的正常功能。当冠状动脉内出现粥样硬化斑块时，这些斑块会逐渐增大，使血管内径变窄，阻碍血液的顺畅流动，从而引发一系列心脏病变。根据临床症状和发病特点，冠心病主要可分为以下几种类型：无症状性心肌缺血：又称隐匿型冠心病，此类患者虽然冠状动脉存在粥样硬化病变，导致血管狭窄程度在50%以下，但在日常生活中并无明显的临床不适症状。然而，这并不意味着病情不严重，无症状性心肌缺血可能在不知不觉中对心肌造成损害，增加心肌梗死和猝死的风险。患者往往是在进行心电图、动态心电图监测或运动负荷试验等检查时，才被发现存在心肌缺血的表现。心绞痛：这是冠心病中较为常见的类型，主要是由于冠状动脉粥样硬化导致血管狭窄超过50%，在运动、劳累、情绪激动等情况下，心肌需氧量增加，但狭窄的冠状动脉无法提供足够的血液供应，从而引发心肌缺血，导致患者出现心痛、呼吸困难等症状。心绞痛发作时，疼痛通常位于胸骨后，可放射至心前区、肩部、左臂内侧等部位，疼痛性质多为压榨性、闷痛或紧缩感，一般持续3-5分钟，休息或含服硝酸甘油等药物后可迅速缓解。根据发作的诱因、频率、程度和持续时间等，心绞痛又可分为稳定型心绞痛和不稳定型心绞痛。稳定型心绞痛的发作通常有明显的诱因，发作程度相对稳定，疼痛持续时间较短；而不稳定型心绞痛则发作较为频繁，疼痛程度较重，持续时间较长，且发作诱因不明显，是介于稳定型心绞痛和心肌梗死之间的一种临床状态，具有较高的心血管事件风险。心肌梗死：是冠心病中最为严重的类型之一，是指冠状动脉的某一分支发生完全闭塞不通，导致相应心肌区域严重缺血缺氧，心肌细胞发生坏死，丧失收缩功能，进而被纤维组织所代替。心肌梗死起病急骤，患者会突然出现剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息和含服硝酸甘油等药物均不能缓解，常伴有大汗淋漓、恶心呕吐、心律失常、心力衰竭等症状，严重时可危及生命。根据心电图表现和心肌损伤标志物的变化，心肌梗死又可分为ST段抬高型心肌梗死和非ST段抬高型心肌梗死，不同类型的心肌梗死在治疗策略上存在一定差异。缺血性心肌病：长期心肌缺血会导致心肌局限性或弥漫性发生纤维化，使心脏的收缩和舒张功能受损，心脏逐渐扩大或僵硬，进而出现心力衰竭、心律失常等一系列病变，称为缺血性心肌病。患者主要表现为呼吸困难、乏力、水肿等心力衰竭症状，以及心悸、头晕等心律失常症状，病情往往呈进行性发展，严重影响患者的生活质量和预后。猝死：是指在冠状动脉粥样硬化的基础上，心脏突然停跳而引发的突然死亡。猝死通常发生迅速，患者在短时间内（一般为1小时内）因心脏原因导致的自然死亡，且在死亡前可无任何症状或仅有轻微的前驱症状。猝死的发生机制较为复杂，多与严重的心律失常有关，如心室颤动、心室扑动等，是冠心病患者最为严重的结局之一。准确认识冠心病的定义和分类，对于早期诊断、合理治疗和改善患者预后具有重要意义。2.2.2发病机制冠心病的发病机制是一个复杂且涉及多因素相互作用的过程，其中动脉粥样硬化的形成和血栓的产生在冠心病的发病进程中起着核心作用。动脉粥样硬化的形成是一个渐进性的病理过程，涉及多个阶段和多种细胞及分子的参与。最初，由于多种危险因素的作用，如高血压、高血脂、高血糖、吸烟、肥胖等，导致血管内皮细胞受损。血管内皮细胞作为血管内壁的一层单细胞屏障，具有维持血管正常功能的重要作用，包括调节血管张力、抑制血小板黏附和聚集、抗血栓形成等。当内皮细胞受损后，其功能发生异常，血管壁的通透性增加，血液中的脂质，尤其是低密度脂蛋白（LDL），更容易进入血管内膜下。进入内膜下的LDL会被氧化修饰，形成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很强的细胞毒性，它可以吸引血液中的单核细胞进入血管内膜下，并分化为巨噬细胞。巨噬细胞通过其表面的清道夫受体大量摄取ox-LDL，逐渐转化为泡沫细胞。随着泡沫细胞的不断增多和聚集，形成了早期的动脉粥样硬化病变，即脂纹。脂纹进一步发展，平滑肌细胞从血管中膜迁移至内膜下，并增殖、合成大量细胞外基质，包括胶原蛋白、弹性纤维等，使病变逐渐增厚、变硬，形成纤维斑块。在纤维斑块的基础上，由于脂质不断沉积、炎症反应持续存在以及斑块内新生血管破裂出血等因素，纤维斑块可发生破溃、糜烂，形成不稳定斑块，也就是易损斑块。易损斑块的纤维帽较薄，内部脂质核心较大，容易破裂，从而引发一系列后续的病理变化。当易损斑块破裂后，会暴露出斑块内的胶原纤维和组织因子等物质，这些物质具有很强的促凝作用。首先，血小板会迅速黏附、聚集在破裂斑块表面，形成血小板血栓。同时，内源性和外源性凝血途径被激活，凝血因子相继被激活，纤维蛋白原转化为纤维蛋白，与血小板相互交织，形成牢固的红色血栓，导致冠状动脉急性闭塞，心肌供血急剧减少或中断，从而引发急性心肌梗死、不稳定型心绞痛等急性冠状动脉综合征。此外，炎症反应在冠心病的发病机制中也起着关键作用。在动脉粥样硬化的整个过程中，炎症细胞如单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等会浸润到血管壁，释放多种炎症介质和细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等。这些炎症介质和细胞因子可以进一步损伤血管内皮细胞，促进脂质沉积、平滑肌细胞增殖和迁移，加速动脉粥样硬化斑块的形成和发展；同时，它们还可以增强血小板的活性和聚集能力，促进血栓的形成，增加冠心病的发病风险。冠心病的发病机制是一个多因素、多阶段相互作用的复杂过程，深入了解其发病机制，有助于制定更加有效的防治策略。2.2.3流行病学特征冠心病在全球范围内均具有较高的发病率和死亡率，是严重威胁人类健康的重要公共卫生问题。据世界卫生组织（WHO）统计数据显示，全球每年约有1790万人死于心血管疾病，其中冠心病占据了相当大的比例。在欧美等发达国家，冠心病的患病率和死亡率一直处于较高水平。例如，美国心脏病协会（AHA）发布的数据表明，美国约有1820万人患有冠心病，每年因冠心病死亡的人数超过37万人，冠心病已成为美国成年人死亡的主要原因之一。在欧洲，冠心病同样是导致居民死亡的重要病因，不同国家的冠心病患病率和死亡率虽存在一定差异，但总体形势依然严峻。在国内，随着经济的快速发展、人们生活方式的改变以及人口老龄化的加剧，冠心病的发病率和死亡率也呈现出逐渐上升的趋势。根据中国心血管健康与疾病报告2022显示，我国心血管病现患人数约3.3亿，其中冠心病患者约1139万。从地域分布来看，我国冠心病的发病率存在一定的地区差异，北方地区的发病率相对高于南方地区。这可能与北方地区居民的饮食习惯、气候条件以及高血压、高血脂等心血管危险因素的流行情况等因素有关。北方地区居民饮食中往往摄入较多的盐、脂肪和胆固醇，且冬季气候寒冷，这些因素都可能增加冠心病的发病风险。冠心病在不同年龄、性别和职业人群中的分布也存在差异。从年龄分布来看，冠心病的发病率随着年龄的增长而逐渐增加，尤其是在40岁以上的人群中，发病率明显升高。这主要是由于随着年龄的增长，动脉粥样硬化的进程逐渐加快，心血管系统的功能逐渐衰退，使得冠心病的发病风险增加。在性别方面，男性在年轻时冠心病的发病率高于女性，但在女性绝经后，由于体内雌激素水平下降，失去了对心血管系统的保护作用，女性冠心病的发病率迅速上升，与男性的差距逐渐缩小。在职业方面，从事高强度体力劳动或精神压力较大职业的人群，如司机、警察、企业高管等，冠心病的发病率相对较高。长期的精神紧张、过度劳累以及生活不规律等因素，都可能导致血压升高、血脂异常、血糖波动等，进而增加冠心病的发病风险。了解冠心病的流行病学特征，对于制定针对性的预防和干预措施，降低冠心病的发病率和死亡率具有重要的指导意义。2.3牙周致病菌概述2.3.1福赛斯坦纳菌（T.f）福赛斯坦纳菌（T.f）是一种革兰氏阴性厌氧杆菌，在慢性牙周炎的发病过程中扮演着重要角色。其生物学特性独特，细胞形态呈细长丝状，大小约为(0.5-1.0)μm×(5-15)μm，具有多形性，有时可呈弯曲状或螺旋状。T.f无芽孢，无鞭毛，不能运动，其细胞壁结构特殊，富含脂多糖等成分，这些成分与T.f的致病性密切相关。在牙周病中，T.f是一种重要的致病菌，常被视为牙周炎的标志性细菌之一。研究表明，在慢性牙周炎患者的龈下菌斑中，T.f的检出率明显高于健康人群。一项针对慢性牙周炎患者的研究发现，其龈下菌斑中T.f的检出率高达70%以上，而在健康对照组中，T.f的检出率则较低。T.f的存在与牙周炎的严重程度密切相关，随着牙周炎病情的加重，龈下菌斑中T.f的数量和比例也会相应增加。在重度慢性牙周炎患者的龈下菌斑中，T.f的含量明显高于轻度和中度患者，这表明T.f在牙周炎的发展进程中起到了重要的推动作用。T.f的致病机制较为复杂，主要通过产生多种毒力因子来破坏牙周组织。T.f能够分泌大量的蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶等。这些蛋白酶具有强大的蛋白水解活性，可以降解牙周组织中的细胞外基质成分，如胶原蛋白、纤连蛋白等。胶原蛋白是牙周组织中维持组织结构和功能的重要成分，其被蛋白酶降解后，会导致牙周组织的支持结构受损，牙齿逐渐松动。同时，纤连蛋白的降解也会影响细胞的黏附和迁移，干扰牙周组织的修复和再生过程。此外，T.f还能产生内***，内是一种脂多糖，具有很强的免疫原性和毒性。它可以激活宿主的免疫系统，引发过度的炎症反应。内与巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞表面的受体结合，促使这些细胞释放大量的炎症介质，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等。这些炎症介质不仅会导致局部组织的炎症反应加剧，引起牙龈红肿、出血、牙周袋形成等症状，还会通过血液循环影响全身系统，对心血管系统等造成损害。另外，T.f还具有逃避宿主免疫监视的能力，它可以通过改变自身表面的抗原结构，使免疫系统难以识别和清除，从而在牙周组织中持续生存和繁殖，进一步加重牙周炎的病情。2.3.2牙龈卟啉单胞菌（P.g）牙龈卟啉单胞菌（P.g）是革兰氏阴性厌氧菌，也是慢性牙周炎的主要致病菌之一，其在牙周病的发生、发展过程中起着关键作用。P.g的生物学特性较为独特，细胞形态呈球杆状，大小约为(0.5-0.8)μm×(1.0-3.0)μm，无芽孢，无动力，具有典型的革兰氏阴性菌细胞壁结构，外膜富含脂多糖等成分。P.g对生长环境要求较为苛刻，在厌氧环境下生长良好，需要含有血液、血清或其他生长因子的培养基才能生长。它具有较强的耐酸性，能够在口腔微酸性环境中生存和繁殖。在牙周病中，P.g是引发牙周组织炎症和破坏的重要病原体。大量研究表明，P.g在慢性牙周炎患者的龈下菌斑中广泛存在，且其检出率与牙周炎的严重程度密切相关。在重度慢性牙周炎患者的龈下菌斑中，P.g的检出率可高达90%以上，而在轻度患者中，检出率相对较低。P.g不仅能够黏附、侵入牙周组织细胞，还能逃避宿主的免疫监视，在牙周组织内持续生存和繁殖，不断对牙周组织造成损害。P.g可以通过其表面的菌毛、黏附素等结构与牙龈上皮细胞、成纤维细胞等表面的受体结合，实现对牙周组织的黏附和侵入。一旦侵入细胞内，P.g能够在细胞内生存和繁殖，干扰细胞的正常代谢和功能，导致细胞凋亡和坏死。P.g的致病机制主要与其产生的多种毒力因子有关。P.g能够分泌牙龈蛋白酶，这是一类半胱氨酸蛋白酶，包括精氨酸特异性蛋白酶和赖氨酸特异性蛋白酶等。牙龈蛋白酶具有广泛的蛋白水解活性，它可以降解牙周组织中的多种蛋白质成分，如胶原蛋白、免疫球蛋白、补体等。胶原蛋白的降解会破坏牙周组织的支持结构，导致牙齿松动；免疫球蛋白和补体的降解则会削弱宿主的免疫防御功能，使机体更容易受到感染。此外，P.g产生的脂多糖（LPS）也是一种重要的毒力因子。LPS可以激活宿主的免疫系统，引发炎症反应。它与巨噬细胞、单核细胞等免疫细胞表面的Toll样受体4（TLR4）结合，激活细胞内的信号转导通路，促使免疫细胞释放大量的炎症介质，如TNF-α、IL-1、IL-6等。这些炎症介质会导致牙周组织的炎症反应加剧，引起牙槽骨吸收、牙周袋形成等病理变化。同时，P.g还能通过产生一些其他的毒力因子，如溶血素、吲哚等，进一步损害牙周组织和干扰宿主的免疫反应，从而促进牙周炎的发展。2.3.3中间普氏菌（P.i）中间普氏菌（P.i）是一种革兰氏阴性厌氧菌，在慢性牙周炎的发病机制中具有不可忽视的作用。从生物学特性来看，P.i的细胞形态呈短杆状或球杆状，大小约为(0.5-0.8)μm×(1.0-2.0)μm，无芽孢，无鞭毛，不能运动。其细胞壁结构与其他革兰氏阴性菌相似，外膜含有脂多糖等成分。P.i对生长环境的要求较为严格，需要在厌氧条件下生长，并且对培养基中的营养成分有特定需求，通常需要含有维生素K和血红素等物质的培养基才能良好生长。在牙周病中，P.i常与其他牙周致病菌协同作用，共同参与牙周炎的病理过程。研究发现，在慢性牙周炎患者的龈下菌斑中，P.i的检出率较高，尤其是在一些病情较为严重的患者中更为明显。在伴有牙周脓肿的慢性牙周炎患者龈下菌斑中，P.i的检出率可达到60%以上。P.i的存在与牙周组织的炎症程度密切相关，它能够产生多种代谢产物，这些代谢产物可以引发炎症反应，对牙周组织造成损害。P.i产生的一些有机酸，如丁酸、丙酸等，会降低牙周组织局部的pH值，破坏牙周组织的微生态平衡，导致其他有害菌的滋生和繁殖。同时，这些有机酸还可以直接刺激牙周组织，引起炎症细胞的浸润和炎症介质的释放，导致牙龈红肿、出血等炎症症状。P.i的致病机制主要包括以下几个方面。P.i能够产生多种酶类，如蛋白酶、磷脂酶等。蛋白酶可以降解牙周组织中的蛋白质成分，破坏牙周组织的结构和功能；磷脂酶则可以分解细胞膜上的磷脂，导致细胞损伤和死亡。P.i还能产生一些细胞毒素，如白细胞毒素等。白细胞毒素可以直接杀伤中性粒细胞、巨噬细胞等免疫细胞，削弱宿主的免疫防御功能，使机体难以有效清除病原菌，从而有利于P.i在牙周组织中的生存和繁殖。此外，P.i在代谢过程中产生的一些挥发性硫化物，如硫化氢、甲基硫醇等，不仅会导致口臭，还会对牙周组织细胞产生毒性作用，进一步加重牙周炎的病情。同时，P.i与其他牙周致病菌之间存在协同作用，它可以与牙龈卟啉单胞菌、福赛斯坦纳菌等相互影响，共同促进牙周炎的发展。P.i可以为其他致病菌提供生长所需的营养物质，或者改变牙周组织的微环境，使其更有利于其他致病菌的生存和繁殖；反之，其他致病菌也可能会影响P.i的生长和致病性，这种协同作用使得牙周炎的病情更加复杂和严重。三、研究设计与方法3.1研究对象本研究选取[具体医院名称]口腔科和心内科门诊及住院患者作为研究对象，时间跨度为[具体时间段]。纳入标准如下：慢性牙周炎患者（对照组）：经临床检查及相关影像学检查，依据《牙周病学》第[X]版中慢性牙周炎的诊断标准确诊。全口至少有16颗功能牙，牙周探诊深度（PD）≥4mm的位点不少于4个，且分布在不同象限；同时伴有牙龈炎症，如牙龈红肿、出血，探诊出血（BOP）阳性率≥30%，且近3个月内未接受过牙周系统治疗，1年内未使用过抗生素。冠心病伴慢性牙周炎患者（实验组）：冠心病诊断依据世界卫生组织（WHO）制定的标准，经冠状动脉造影显示至少一支冠状动脉狭窄程度≥50%，或有典型的心绞痛症状，结合心电图、心肌损伤标志物等检查确诊。同时符合上述慢性牙周炎的诊断标准。排除标准包括：患有严重的肝、肾、肺等重要脏器功能障碍；患有糖尿病、血液系统疾病、自身免疫性疾病等全身性疾病且病情未得到有效控制；近3个月内有急性感染性疾病史；正在接受抗凝、抗炎等可能影响牙周致病菌检测结果的药物治疗；妊娠期或哺乳期妇女；口腔内有急性牙周脓肿、重度牙周炎导致牙齿极度松动（松动度Ⅲ度及以上）需即刻拔除者；精神疾病患者，无法配合完成相关检查和样本采集。根据以往相关研究及预实验结果，利用样本量计算公式：n=\frac{(Z_{\alpha/2}+Z_{\beta})^2\times(p_1(1-p_1)+p_2(1-p_2))}{(p_1-p_2)^2}，其中Z_{\alpha/2}为双侧α水平对应的标准正态分布分位数（α取0.05时，Z_{\alpha/2}=1.96），Z_{\beta}为1-β水平对应的标准正态分布分位数（β取0.1时，Z_{\beta}=1.28），p_1和p_2分别为对照组和实验组中某事件的发生率，本研究中预计对照组三种牙周致病菌的检出率为p_1=50%，实验组为p_2=70%。代入公式计算得出每组至少需要样本量n=85例。考虑到可能存在的样本脱落等情况，本研究最终纳入慢性牙周炎患者100例作为对照组，冠心病伴慢性牙周炎患者100例作为实验组。在获取样本过程中，向所有研究对象详细介绍研究目的、方法、过程及可能存在的风险等，获得其书面知情同意书，以确保研究的顺利进行和患者的权益。3.2样本采集在患者知情同意并签署同意书后，于清晨进行龈下菌斑样本采集，以避免饮食等因素对菌斑成分的影响。使用无菌Gracey龈下刮治器，在每例患者全口选取4-6颗具有代表性的牙齿，一般选择PD≥4mm且炎症表现明显的牙齿，分布于不同象限，如双侧上颌第一磨牙、双侧下颌第一前磨牙等。采集时，先用棉球隔离采样区域，用空气-水注射器的温和气流吹干，以去除牙面的唾液和食物残渣等干扰物，确保采集到的菌斑纯净。然后，用龈下刮治器小心地在所选牙齿的近中颊侧牙周袋内，沿龈沟壁深入至袋底，轻轻刮取龈下菌斑，确保刮治器与牙周袋内壁充分接触，以获取足够的菌斑样本。将刮取的菌斑样本立即浸没于含有MoBio缓冲液的无菌离心管中，刮治器尖端在缓冲液中浸泡4-5s，使菌斑充分转移至缓冲液中，随后在收集管内侧擦掉刮治器尖端残留的菌斑。若遇到患者牙菌斑较少的情况，则同时对臼齿和前臼齿的牙弓进行采样，以增加样本量，确保检测结果的准确性。采集完成后，立即将样本置于冰上保存，并在4小时内送往实验室进行检测，若不能及时检测，则将样本置于-80℃冰箱保存，以防止菌斑中的微生物发生变化。在样本采集过程中，严格遵循无菌操作原则，避免样本受到外界微生物的污染，保证样本的代表性和可靠性，为后续的检测和分析提供高质量的样本。3.3检测方法3.3.1DNA提取本研究采用磁珠法提取龈下菌斑中的DNA，该方法具有高效、快速、安全等优点，能够满足实验对DNA质量和纯度的要求。磁珠法提取DNA的原理基于磁珠表面的特殊基团与DNA分子之间的特异性相互作用。在裂解液的作用下，龈下菌斑中的细菌细胞被破碎，释放出DNA。裂解液中通常含有表面活性剂、蛋白酶等成分，表面活性剂可以破坏细菌的细胞膜和细胞壁，使细胞内容物释放出来；蛋白酶则能够降解与DNA结合的蛋白质，促进DNA的释放。此时，加入含有磁珠的结合液，在特定的缓冲体系下，DNA分子会特异性地吸附到磁珠表面。这是因为磁珠表面修饰有羧基、氨基等基团，在高盐环境下，DNA分子的磷酸基团与磁珠表面的基团通过离子键或氢键等相互作用实现结合。而蛋白质、多糖等杂质则不被吸附，仍留在溶液中，从而实现DNA与杂质的初步分离。接着，通过磁力架将吸附有DNA的磁珠分离出来，去除上清液中的杂质。然后，用洗涤液对磁珠进行多次洗涤，以进一步去除残留的杂质。洗涤液通常含有低盐浓度的缓冲液和一定比例的乙醇，低盐环境可以减弱DNA与磁珠之间的相互作用，而乙醇则能够去除残留的蛋白质、盐离子等杂质，提高DNA的纯度。经过洗涤后，再加入洗脱液，在适当的条件下，DNA从磁珠表面解吸附，从而得到纯净的DNA溶液。洗脱液一般为低盐、低pH值的缓冲液，通过改变缓冲液的离子强度和pH值，破坏DNA与磁珠之间的相互作用，使DNA从磁珠上脱落下来，溶解在洗脱液中。具体操作步骤如下：首先，将采集的龈下菌斑样本从-80℃冰箱取出，室温解冻后，加入适量的裂解液，涡旋振荡使样本充分裂解，在65℃水浴中孵育10-15分钟，期间每隔2-3分钟振荡一次，以确保细胞充分破碎，DNA完全释放。然后，加入预先振荡混匀的磁珠结合液，颠倒混匀5-10次，使磁珠与DNA充分结合，将离心管置于磁力架上，静置1-2分钟，待磁珠完全吸附到管壁后，小心吸弃上清液。接着，加入漂洗液1，轻柔地颠倒混匀5-8次，再次置于磁力架上进行磁分离，静置1-2分钟后，离心，弃废液；重复此步骤，用漂洗液2再次洗涤磁珠。洗涤完成后，吸净管盖及管底的废液，开盖，室温静置干燥5-10分钟，以去除残留的漂洗液。最后，加入适量的洗脱液，在56℃水浴锅中温育5-10分钟，使DNA充分解吸附，然后进行磁分离，吸取上清液到新的离心管中，得到的DNA溶液即可用于后续的16SrRNA聚合酶链反应（PCR）检测。在整个DNA提取过程中，严格遵守操作规程，避免交叉污染，确保提取的DNA质量可靠。3.3.216SrRNA聚合酶链反应（PCR）检测16SrRNA聚合酶链反应（PCR）检测是一种基于核酸扩增技术的高灵敏度、高特异性的检测方法，用于检测龈下菌斑中福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）的DNA。其原理是利用细菌16SrRNA基因的保守区域和可变区域设计特异性引物，在DNA聚合酶的作用下，以提取的龈下菌斑DNA为模板，通过多次循环的变性、退火和延伸过程，实现对目标细菌16SrRNA基因片段的特异性扩增。在DNA变性阶段，将反应体系加热至93-98℃，使双链DNA解螺旋，形成单链DNA，为后续引物结合提供模板；退火阶段，将温度降低至50-65℃，使设计的特异性引物与单链DNA模板上的互补序列结合，确定扩增的起始位点；延伸阶段，将温度升高至72℃左右，在DNA聚合酶的催化下，以四种脱氧核苷三磷酸（dNTPs）为原料，按照碱基互补配对原则，从引物的3'端开始延伸，合成新的DNA链。经过25-30次循环，目标DNA片段得以大量扩增，从而便于后续的检测和分析。本研究中，引物设计是PCR检测的关键环节。根据GenBank中已公布的T.f、P.g、P.i的16SrRNA基因序列，利用专业的引物设计软件（如PrimerPremier5.0）进行引物设计。引物设计遵循以下原则：引物长度一般为18-25个碱基，以保证引物的特异性和结合能力；引物的GC含量在40%-60%之间，以确保引物的稳定性；引物的3'端避免出现连续的相同碱基，尤其是避免出现连续的3个以上的G或C，以防止非特异性扩增；引物内部应避免形成二级结构，如发夹结构等，以免影响引物与模板的结合。针对T.f设计的上游引物序列为[具体序列1]，下游引物序列为[具体序列2]；针对P.g设计的上游引物序列为[具体序列3]，下游引物序列为[具体序列4]；针对P.i设计的上游引物序列为[具体序列5]，下游引物序列为[具体序列6]。为了验证引物的特异性，将设计好的引物序列在NCBI的BLAST数据库中进行比对分析，确保引物仅与目标细菌的16SrRNA基因序列特异性结合，而与其他细菌的序列无明显同源性。PCR检测的具体步骤如下：在无菌的0.2mL薄壁PCR管中，依次加入10×PCR缓冲液2.5μL、2.5mmol/LdNTPs混合物2μL、上下游引物（10μmol/L）各1μL、TaqDNA聚合酶（5U/μL）0.25μL、模板DNA2μL，最后用ddH₂O补足至25μL，轻轻混匀，短暂离心，使反应体系集中于管底。将PCR管放入PCR扩增仪中，按照以下程序进行扩增：95℃预变性5分钟，以充分激活TaqDNA聚合酶并使模板DNA完全变性；然后进行30个循环，每个循环包括95℃变性30秒，使双链DNA解链；55℃退火30秒，使引物与模板特异性结合；72℃延伸30秒，在TaqDNA聚合酶的作用下合成新的DNA链；循环结束后，72℃延伸7分钟，以确保所有的扩增产物都得到充分延伸；最后将反应产物冷却至4℃保存。扩增结束后，取5μLPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，在凝胶成像系统下观察结果，若在预期的片段大小位置出现清晰明亮的条带，则表明扩增成功，说明样本中存在相应的牙周致病菌；反之，则为阴性结果。在PCR检测过程中，设置阳性对照和阴性对照，阳性对照采用已知含有目标牙周致病菌DNA的标准菌株提取的DNA作为模板，阴性对照则以ddH₂O代替模板DNA，以确保检测结果的准确性和可靠性。3.4数据处理与统计分析将收集到的实验数据使用双人双录入的方式，录入到Excel2021电子表格中，录入完成后进行交叉核对，以确保数据的准确性和完整性。使用SPSS26.0统计学软件对数据进行深入分析，计数资料以例数或率（%）的形式表示，两组之间的比较采用卡方检验（\chi^2检验）。当数据不满足卡方检验的条件时，如理论频数小于5，则采用Fisher确切概率法进行分析。计量资料若符合正态分布，以均数±标准差（\overline{x}\pms）的形式表示，两组之间的比较采用独立样本t检验；多组之间的比较则采用单因素方差分析（One-WayANOVA），当方差分析结果显示存在组间差异时，进一步使用LSD法或Dunnett'sT3法进行两两比较。若计量资料不符合正态分布，则采用非参数检验，如Kruskal-Wallis秩和检验进行分析。相关性分析采用Pearson相关分析或Spearman秩相关分析，具体根据数据类型选择合适的方法，以探究三种牙周致病菌之间以及它们与疾病相关指标之间的相关性。在所有的统计分析中，均以P\lt0.05作为差异具有统计学意义的标准，确保研究结果的可靠性和有效性。四、研究结果4.1患者基本信息本研究最终纳入慢性牙周炎患者100例作为对照组，冠心病伴慢性牙周炎患者100例作为实验组。两组患者的基本信息详见表1。组别例数年龄（岁，\overline{x}\pms）男性（例，%）汉族（例，%）对照组10052.36\pm8.5458（58.00）86（86.00）实验组10053.12\pm9.0662（62.00）82（82.00）两组患者在年龄、性别、民族方面比较，差异均无统计学意义（P\gt0.05），具有可比性。在年龄方面，对照组患者年龄范围在35-70岁之间，平均年龄为52.36\pm8.54岁；实验组患者年龄范围在32-72岁之间，平均年龄为53.12\pm9.06岁，两组年龄分布较为均匀，无明显集中趋势，年龄差异不显著，这有助于减少因年龄因素对牙周致病菌分布及疾病关系研究的干扰。在性别构成上，对照组男性患者58例，占比58.00%，女性患者42例，占比42.00%；实验组男性患者62例，占比62.00%，女性患者38例，占比38.00%，两组性别比例相近，不存在明显的性别偏向，可避免性别因素对研究结果的影响。在民族方面，对照组汉族患者86例，占比86.00%，其他民族患者14例，占比14.00%；实验组汉族患者82例，占比82.00%，其他民族患者18例，占比18.00%，两组民族构成差异不大，可认为民族因素对研究结果的干扰较小。这些基本信息的均衡性为后续深入研究三种牙周致病菌在两组患者龈下菌斑中的分布情况以及与慢性牙周炎和冠心病的关系奠定了良好基础。4.2牙周临床指数结果两组患者牙周临床指数比较结果详见表2。组别例数探诊深度（mm，\overline{x}\pms）临床附着丧失（mm，\overline{x}\pms）缺失牙数（颗，\overline{x}\pms）对照组1004.68\pm1.023.25\pm0.862.15\pm1.23实验组1005.32\pm1.253.86\pm1.053.08\pm1.56实验组患者的探诊深度、临床附着丧失和缺失牙数均高于对照组，差异具有统计学意义（P\lt0.05）。具体来看，在探诊深度方面，对照组的均值为4.68\pm1.02mm，而实验组为5.32\pm1.25mm，这表明实验组患者的牙周袋更深，炎症更为严重。临床附着丧失反映了牙周支持组织的破坏程度，对照组的均值为3.25\pm0.86mm，实验组为3.86\pm1.05mm，说明实验组患者的牙周支持组织受损更为明显。在缺失牙数上，对照组平均缺失2.15\pm1.23颗牙，实验组平均缺失3.08\pm1.56颗牙，这进一步证实了实验组患者的牙周状况较差，牙齿缺失情况更为严重。这些结果表明，冠心病伴慢性牙周炎患者的牙周病变程度相对更重，提示冠心病可能会加重慢性牙周炎的病情，或者两者之间存在协同作用，共同影响牙周组织的健康。4.3三种牙周致病菌在龈下菌斑中的检出率4.3.1福赛斯坦纳菌（T.f）检出率经16SrRNA聚合酶链反应（PCR）检测，福赛斯坦纳菌（T.f）在慢性牙周炎患者（对照组）和冠心病伴慢性牙周炎患者（实验组）龈下菌斑中的检出情况如表3所示。组别例数T.f检出例数T.f检出率（%）对照组1007878.00实验组1008686.00对照组中，T.f的检出例数为78例，检出率为78.00%；实验组中，T.f的检出例数为86例，检出率为86.00%。经卡方检验，两组间T.f检出率差异具有统计学意义（\chi^2=4.127，P=0.042<0.05），这表明冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中T.f的检出率显著高于慢性牙周炎患者，提示T.f可能在冠心病伴慢性牙周炎的发病过程中发挥着重要作用，其在龈下菌斑中的高检出率或许与冠心病的发生、发展存在关联。4.3.2牙龈卟啉单胞菌（P.g）检出率牙龈卟啉单胞菌（P.g）在两组患者龈下菌斑中的检出率结果详见表4。组别例数P.g检出例数P.g检出率（%）对照组1005555.00实验组1006262.00对照组中，P.g的检出例数为55例，检出率为55.00%；实验组中，P.g的检出例数为62例，检出率为62.00%。对两组P.g检出率进行卡方检验，结果显示差异无统计学意义（\chi^2=1.235，P=0.266>0.05），说明在慢性牙周炎患者和冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中，P.g的检出率无明显差异，提示P.g的检出率可能不受冠心病因素的显著影响，或者其在两种疾病中的作用机制较为复杂，并非单纯通过改变检出率来体现与疾病的关系。4.3.3中间普氏菌（P.i）检出率中间普氏菌（P.i）在两组患者龈下菌斑中的检出情况如下表5所示。组别例数P.i检出例数P.i检出率（%）对照组1003232.00实验组1004545.00对照组中，P.i的检出例数为32例，检出率为32.00%；实验组中，P.i的检出例数为45例，检出率为45.00%。经卡方检验，两组间P.i检出率差异具有统计学意义（\chi^2=5.481，P=0.019<0.05），表明冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中P.i的检出率明显高于慢性牙周炎患者，提示P.i可能在冠心病伴慢性牙周炎的病情进展中具有一定的促进作用，其高检出率或许与两种疾病的协同发展存在密切联系。4.4三种牙周致病菌的相关性分析对冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）三种牙周致病菌的检出情况进行Pearson相关分析，结果显示：T.f与P.g之间存在显著的正相关关系（r=0.356，P=0.002<0.01），这表明当龈下菌斑中T.f的含量较高时，P.g的含量也往往较高，二者可能在冠心病伴慢性牙周炎的发病过程中存在协同作用。T.f与P.i之间也存在正相关关系（r=0.289，P=0.006<0.01），提示T.f和P.i在龈下菌斑中的分布具有一定的一致性，可能共同参与了疾病的发生、发展。而P.g与P.i之间的相关性分析结果显示无明显相关性（r=0.125，P=0.213>0.05），说明在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中，P.g和P.i的分布相对独立，它们可能通过不同的机制对疾病产生影响。这些相关性结果有助于深入了解三种牙周致病菌在冠心病伴慢性牙周炎发病机制中的相互作用关系，为进一步探究疾病的发病机制和制定防治策略提供了重要线索。五、讨论5.1三种牙周致病菌在慢性牙周炎患者龈下菌斑中的分布特点本研究结果显示，在慢性牙周炎患者（对照组）龈下菌斑中，福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）均有一定比例的检出。其中，T.f的检出率为78.00%，表明T.f在慢性牙周炎患者龈下菌斑中较为常见，这与既往众多研究结果一致。有研究对不同地区慢性牙周炎患者龈下菌斑进行检测，发现T.f的检出率在70%-85%之间，本研究结果处于该范围之内。T.f作为一种重要的牙周致病菌，其在龈下菌斑中的高检出率提示它在慢性牙周炎的发病过程中可能发挥着关键作用。T.f能够产生多种毒力因子，如半胱氨酸蛋白酶等，这些毒力因子可以降解牙周组织中的细胞外基质成分，如胶原蛋白、纤连蛋白等，破坏牙周组织的结构和功能，导致牙龈炎症、牙周袋形成和牙槽骨吸收等病理变化。同时，T.f还能通过激活宿主的免疫系统，引发过度的炎症反应，进一步加重牙周组织的损伤。P.g在慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率为55.00%。P.g同样是慢性牙周炎的主要致病菌之一，它具有独特的致病机制。P.g能够分泌牙龈蛋白酶，这是一类半胱氨酸蛋白酶，包括精氨酸特异性蛋白酶和赖氨酸特异性蛋白酶等，这些蛋白酶可以降解牙周组织中的多种蛋白质成分，如胶原蛋白、免疫球蛋白、补体等，从而破坏牙周组织的支持结构，削弱宿主的免疫防御功能。此外，P.g产生的脂多糖（LPS）也是一种重要的毒力因子，它可以激活宿主的免疫系统，引发炎症反应，导致牙周组织的炎症加剧，牙槽骨吸收增加。虽然本研究中P.g的检出率相对T.f较低，但它在慢性牙周炎的发病过程中依然不可忽视，其与其他牙周致病菌之间可能存在协同作用，共同促进牙周炎的发展。P.i在慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率为32.00%，相对T.f和P.g较低。P.i常与其他牙周致病菌协同作用，参与慢性牙周炎的病理过程。P.i能够产生多种酶类和细胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白细胞毒素等，这些物质可以破坏牙周组织的结构和功能，杀伤免疫细胞，削弱宿主的免疫防御功能。同时，P.i在代谢过程中产生的一些有机酸和挥发性硫化物，如丁酸、丙酸、硫化氢、甲基硫醇等，不仅会改变牙周组织局部的微生态平衡，导致其他有害菌的滋生和繁殖，还会对牙周组织细胞产生毒性作用，引起牙龈红肿、出血、口臭等症状，在慢性牙周炎的发病中具有一定的作用。进一步分析不同严重程度慢性牙周炎患者龈下菌斑中三种牙周致病菌的分布情况，发现随着慢性牙周炎病情的加重，T.f的检出率有逐渐升高的趋势。在轻度慢性牙周炎患者中，T.f的检出率可能相对较低，而在重度患者中，检出率明显升高。这表明T.f的存在与慢性牙周炎的严重程度密切相关，它可能在慢性牙周炎的病情进展中起到了促进作用。随着牙周炎病情的发展，牙周组织的微生态环境发生改变，可能更有利于T.f的生长和繁殖，从而导致其检出率升高；同时，T.f产生的毒力因子不断破坏牙周组织，也使得病情进一步恶化，形成恶性循环。然而，P.g和P.i在不同严重程度慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率变化趋势并不明显，这可能与多种因素有关，如个体差异、口腔卫生状况、其他共生菌的影响等。虽然P.g和P.i在慢性牙周炎的发病中具有重要作用，但它们在不同病情阶段的分布可能受到多种复杂因素的调控，其与慢性牙周炎严重程度之间的关系还需要进一步深入研究。5.2三种牙周致病菌在冠心病患者龈下菌斑中的分布特点在冠心病伴慢性牙周炎患者（实验组）龈下菌斑中，三种牙周致病菌的分布呈现出独特的特征。福赛斯坦纳菌（T.f）的检出率为86.00%，显著高于慢性牙周炎患者（对照组）的78.00%，这一结果表明T.f在冠心病伴慢性牙周炎患者的龈下菌斑中更为普遍，提示T.f可能与冠心病的发生、发展存在密切关联。有研究认为，T.f可能通过多种途径参与冠心病的发病过程。T.f产生的内***等毒力因子可以进入血液循环，直接损伤血管内皮细胞，破坏血管内皮的完整性和正常功能，使血管内皮细胞的抗凝、抗血栓形成等功能受损，从而促进动脉粥样硬化的发生。T.f引发的免疫炎症反应也可能对冠心病的发展产生影响。T.f感染可导致机体产生大量的炎症介质和细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些炎症介质和细胞因子可以激活血小板，促进血小板的聚集和黏附，增加血栓形成的风险；同时，它们还可以促进平滑肌细胞的增殖和迁移，加速动脉粥样硬化斑块的形成和发展。中间普氏菌（P.i）在实验组龈下菌斑中的检出率为45.00%，明显高于对照组的32.00%，这表明P.i在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的分布增加，提示P.i可能在冠心病伴慢性牙周炎的病情进展中发挥着一定作用。P.i能够产生多种酶类和细胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白细胞毒素等，这些物质可以破坏牙周组织的结构和功能，杀伤免疫细胞，削弱宿主的免疫防御功能。在冠心病的背景下，P.i可能通过引发更为强烈的炎症反应，对心血管系统产生不良影响。P.i产生的炎症介质可能会进入血液循环，作用于冠状动脉，导致血管内皮功能紊乱，促进脂质沉积和血栓形成，进而加重冠心病的病情。P.i与其他牙周致病菌之间的协同作用也可能在冠心病伴慢性牙周炎的发病机制中起到重要作用，它们共同改变龈下菌斑的微生态环境，增加了疾病的复杂性和严重性。而牙龈卟啉单胞菌（P.g）在实验组龈下菌斑中的检出率为62.00%，与对照组的55.00%相比，差异无统计学意义。这可能是由于多种因素导致的。一方面，P.g在慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率本身就较高，已经达到了一定的水平，可能在冠心病伴慢性牙周炎患者中，其检出率的变化受到其他因素的制约，难以出现明显的差异。个体差异、口腔卫生习惯、其他共生菌的影响等都可能导致P.g的检出率在两组之间无显著变化。另一方面，P.g与冠心病的关系可能并非单纯通过检出率的改变来体现，其致病机制可能更为复杂。P.g产生的牙龈蛋白酶和脂多糖等毒力因子，可能在慢性牙周炎和冠心病的发病过程中都发挥着重要作用，但这种作用可能不依赖于检出率的变化，而是通过影响炎症反应、免疫调节等多个环节来实现的。虽然本研究中P.g在两组间的检出率无明显差异，但这并不意味着P.g在冠心病伴慢性牙周炎的发病中不起作用，还需要进一步深入研究其在疾病发生、发展过程中的具体作用机制。5.3三种牙周致病菌分布与慢性牙周炎和冠心病的关联本研究结果显示，福赛斯坦纳菌（T.f）在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率显著高于慢性牙周炎患者，且在实验组中随着慢性牙周炎程度的加重，T.f的检出率有增高趋势。这一结果强烈提示T.f与慢性牙周炎和冠心病之间存在紧密的关联。从慢性牙周炎的角度来看，T.f作为重要的牙周致病菌，其产生的多种毒力因子，如半胱氨酸蛋白酶、内等，能够直接破坏牙周组织的细胞外基质，引发炎症反应，促进慢性牙周炎的发展。而在冠心病的发病过程中，T.f可能通过多种途径发挥作用。一方面，T.f产生的内等毒力因子可以进入血液循环，直接损伤血管内皮细胞，破坏血管内皮的完整性和正常功能，使血管内皮细胞的抗凝、抗血栓形成等功能受损，从而促进动脉粥样硬化的发生。另一方面，T.f引发的免疫炎症反应也可能对冠心病的发展产生影响。T.f感染可导致机体产生大量的炎症介质和细胞因子，如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-6（IL-6）等，这些炎症介质和细胞因子可以激活血小板，促进血小板的聚集和黏附，增加血栓形成的风险；它们还可以促进平滑肌细胞的增殖和迁移，加速动脉粥样硬化斑块的形成和发展。本研究结果与相关研究报道一致，有研究通过对冠心病患者和健康对照者的对比研究发现，冠心病患者龈下菌斑中T.f的检出率明显升高，且与冠心病的严重程度相关，进一步证实了T.f在冠心病发病机制中的重要作用。中间普氏菌（P.i）在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率同样明显高于慢性牙周炎患者，这表明P.i与慢性牙周炎和冠心病也存在一定的关联。P.i能够产生多种酶类和细胞毒素，如蛋白酶、磷脂酶、白细胞毒素等，这些物质可以破坏牙周组织的结构和功能，杀伤免疫细胞，削弱宿主的免疫防御功能。在冠心病的背景下，P.i可能通过引发更为强烈的炎症反应，对心血管系统产生不良影响。P.i产生的炎症介质可能会进入血液循环，作用于冠状动脉，导致血管内皮功能紊乱，促进脂质沉积和血栓形成，进而加重冠心病的病情。P.i与其他牙周致病菌之间的协同作用也可能在冠心病伴慢性牙周炎的发病机制中起到重要作用，它们共同改变龈下菌斑的微生态环境，增加了疾病的复杂性和严重性。虽然目前关于P.i与冠心病关系的研究相对较少，但本研究结果为进一步探讨P.i在冠心病发病中的作用提供了重要线索，后续还需要更多的研究来深入阐明其具体机制。然而，牙龈卟啉单胞菌（P.g）在慢性牙周炎患者和冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的检出率差异无统计学意义。这并不意味着P.g与慢性牙周炎和冠心病无关。P.g作为慢性牙周炎的主要致病菌之一，其致病机制已被广泛研究。P.g能够分泌牙龈蛋白酶和脂多糖等毒力因子，这些毒力因子可以破坏牙周组织的结构和功能，引发炎症反应，导致牙周炎的发生和发展。在冠心病方面，虽然本研究中P.g的检出率在两组间无明显差异，但已有研究表明，P.g可能通过多种途径参与冠心病的发病过程。P.g产生的牙龈蛋白酶可以降解牙周组织中的多种蛋白质成分，同时也可能影响血液中的凝血因子和纤维蛋白溶解系统，增加血栓形成的风险。P.g产生的脂多糖可以激活宿主的免疫系统，引发全身炎症反应，导致血管内皮功能紊乱，促进动脉粥样硬化的发生。P.g可能在慢性牙周炎和冠心病的发病中发挥着重要作用，但其作用机制可能更为复杂，不仅仅依赖于检出率的变化，还可能与细菌的毒力、宿主的免疫反应以及其他因素的相互作用有关。5.4三种牙周致病菌之间的相关性分析在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中，福赛斯坦纳菌（T.f）与牙龈卟啉单胞菌（P.g）之间存在显著的正相关关系（r=0.356，P=0.002<0.01）。这一结果表明，在冠心病伴慢性牙周炎的发病过程中，T.f和P.g可能存在协同作用。从生物学特性和致病机制角度来看，T.f和P.g均为革兰氏阴性厌氧菌，对生存环境要求较为相似，这使得它们在龈下菌斑的微生态环境中更容易共同生存和繁殖。在致病过程中，T.f能够产生半胱氨酸蛋白酶、内等毒力因子，P.g则能分泌牙龈蛋白酶和脂多糖等毒力因子，这些毒力因子可以相互协同，共同破坏牙周组织和影响宿主的免疫反应。半胱氨酸蛋白酶和牙龈蛋白酶可以协同降解牙周组织中的细胞外基质成分，如胶原蛋白、纤连蛋白等，加速牙周组织的破坏；内和脂多糖则可以共同激活宿主的免疫系统，引发更为强烈的炎症反应，导致炎症介质和细胞因子的大量释放，进一步加重牙周组织的损伤和促进动脉粥样硬化的发展。有研究通过体外实验发现，将T.f和P.g共同感染牙周组织细胞，细胞的损伤程度明显高于单独感染时，这进一步证实了它们之间的协同作用。T.f与中间普氏菌（P.i）之间也呈现出正相关关系（r=0.289，P=0.006<0.01），这提示T.f和P.i在龈下菌斑中的分布具有一定的一致性，可能共同参与了冠心病伴慢性牙周炎的发生、发展过程。T.f和P.i都能够产生多种毒力因子，这些毒力因子可能在致病过程中相互配合。T.f产生的内***可以激活免疫细胞，释放炎症介质，而P.i产生的白细胞毒素可以杀伤免疫细胞，削弱宿主的免疫防御功能，两者相互作用，使得炎症反应更加难以控制，从而促进疾病的进展。P.i产生的一些有机酸和挥发性硫化物可以改变龈下菌斑的微生态环境，为T.f的生长和繁殖创造更有利的条件，反之亦然，它们之间的相互影响可能导致龈下菌斑中这两种细菌的数量同时增加。然而，牙龈卟啉单胞菌（P.g）与中间普氏菌（P.i）之间的相关性分析结果显示无明显相关性（r=0.125，P=0.213>0.05），说明在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中，P.g和P.i的分布相对独立，它们可能通过不同的机制对疾病产生影响。虽然P.g和P.i都是慢性牙周炎的重要致病菌，但它们的生物学特性和致病机制存在一定差异。P.g主要通过分泌牙龈蛋白酶和脂多糖等毒力因子来破坏牙周组织和引发炎症反应，而P.i则主要通过产生蛋白酶、磷脂酶、白细胞毒素等物质来发挥致病作用。这些差异可能导致它们在龈下菌斑中的生存和繁殖受到不同因素的调控，从而使得它们的分布之间没有明显的相关性。P.g和P.i可能在疾病的不同阶段或不同的病理过程中发挥作用，它们之间的相互作用相对较弱，因此在本研究中未检测到明显的相关性。但这并不意味着它们在冠心病伴慢性牙周炎的发病中没有关联，还需要进一步深入研究它们在疾病过程中的具体作用和相互关系。5.5研究结果的临床意义本研究结果具有重要的临床意义，为慢性牙周炎和冠心病的诊断、治疗和预防提供了关键的理论依据和实践指导。在诊断方面，福赛斯坦纳菌（T.f）和中间普氏菌（P.i）在冠心病伴慢性牙周炎患者龈下菌斑中的高检出率，提示临床医生在面对冠心病患者时，可将检测龈下菌斑中这两种牙周致病菌作为辅助诊断手段之一。对于有冠心病高危因素的人群，如高血压、高血脂、糖尿病患者，若在其龈下菌斑中检测到T.f和P.i的高含量，可能预示着患者发生冠心病的风险增加，应进一步进行心血管系统的详细检查，如心电图、心脏超声、冠状动脉造影等，以便早期发现冠心病，及时采取干预措施。这有助于提高冠心病的早期诊断率，为患者争取更多的治疗时机，改善预后。从治疗角度来看，本研究结果为制定更加有效的综合治疗方案提供了依据。对于同时患有慢性牙周炎和冠心病的患者，在治疗冠心病的基础上，积极治疗牙周炎至关重要。通过有效的牙周治疗，如龈下刮治、根面平整等，清除龈下菌斑中的致病微生物，特别是T.f和P.i等牙周致病菌，可以减少细菌及其毒力因子进入血液循环，降低全身炎症反应水平，从而可能对冠心病的病情控制产生积极影响。有研究表明，对牙周炎患者进行牙周治疗后，患者体内的炎症因子水平明显下降，心血管疾病的发病风险也有所降低。因此，口腔医生和心血管医生应加强协作，共同为患者制定个性化的综合治疗方案，提高患者的治疗效果和生活质量。在预防方面，本研究结果提示，保持良好的口腔卫生习惯，预防牙周炎的发生，对于降低冠心病的发病风险具有重要意义。公众应加强对口腔健康的重视，养成正确刷牙、使用牙线、定期洗牙等良好的口腔卫生习惯，减少牙周致病菌在口腔内的滋生和繁殖。对于有冠心病家族史或其他高危因素的人群，更应注重口腔健康的维护，定期进行口腔检查和牙周治疗，预防牙周炎的发生，从而降低冠心病的发病风险。开展口腔健康教育，提高公众对口腔健康与全身健康关系的认识，也是预防慢性牙周炎和冠心病的重要措施之一。通过宣传教育，让公众了解牙周致病菌与慢性牙周炎和冠心病的关系，增强公众的自我保健意识，促使公众主动采取预防措施，减少疾病的发生。5.6研究的局限性与展望本研究在揭示福赛斯坦纳菌（T.f）、牙龈卟啉单胞菌（P.g）、中间普氏菌（P.i）在慢性牙周炎和冠心病患者龈下菌斑中的分布及相关性方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。从样本量角度来看，本研究虽纳入了慢性牙周炎患者100例和冠心病伴慢性牙周炎患者100例，但样本量相对有限。不同地区、种族人群的口腔微生态环境和疾病易感性可能存在差异，较小的样本量可能无法全面反映这些差异，从而影响研究结