分子模拟中的静电作用

柱色谱分离与薄层色谱类似，主要通过洗脱剂把分离的各组分逐个洗脱下来得的过程，也称为洗脱色谱。由于柱色谱中填充料的量远大于薄层色谱，因此柱色谱可用于分离比较大量（数克级）的物质。分离原理是根据物质在固定相上的吸附能力不同而进行分离，一般情况下极性大的物质易被固定相吸附，极性小的物质不易被固定相吸附，柱层析过程即是吸附、解吸、再吸附和再解吸的过程。实验室常用的柱色谱主要是吸附色谱，以硅胶或氧化铝为吸附剂。色谱柱的选择理论上是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。但采用粗长的柱子要消耗比较多的硅胶和溶剂。柱子径高比一般在1:5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分Rf值在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果杂质相差不到0.1，就要加大柱子，也可以减小淋洗剂的极性等。装柱实验室常用的装柱方法有两种：干法装柱和湿法装柱。干法装柱直接向玻璃柱子里加入硅胶，轻轻敲打色谱柱，使填装均匀，再加一层海沙，然后加入洗脱剂，使硅胶润湿。溶剂化后的硅胶应均匀、透明。湿法装柱将硅胶与一定量的洗脱剂调成悬浆状，倒入玻璃柱子内，打开活塞，使洗脱剂流出，洗脱剂慢慢下降而均匀沉降至色谱柱底端。①柱子下面的活塞不要涂润滑剂，容易被洗脱剂带到产品中；②干法和湿法装柱其实没有什么区别，只要能把柱子装实就行；③装柱过程中需防止开裂，容易影响分离效果。上样液体样直接将样品溶液用滴管或漏斗沿柱子内壁加入柱内，然后用少量的洗脱剂洗涤器皿与柱子，再打开活塞，使液体渐渐放出，待液面降至石英石以下，再开始加入洗脱剂洗脱固体样1）溶解度较好的固体样选择极性较小的溶剂将样品溶解后上柱（参照上述液体样）。常用溶剂有：二氯甲烷、甲苯、正己烷、石油醚等。所选溶剂的极性不能比洗脱剂极性大，否则溶液影响层析柱的分离效果；溶剂量也不能太大，以近饱和为佳。【注】用少量的溶剂溶样品加样时，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2～4cm就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。2）难溶固体样可以通过硅胶吸附样品的方式进行上样（拌样），选择能溶清的溶剂将样品溶清，然后加入适量硅胶（一般为样品量的1.5-3倍），用旋转蒸发仪减压蒸去溶剂，将样品均匀的吸附在硅胶表面，然后均匀填铺在柱子上端。对于上述的湿法、干法上样的选择①

湿上样会比较方便，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了；②

有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF，DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。洗脱与分离实验室常使用的过柱方式有：加压，常压，减压。①

过柱的压力可以增加洗脱剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也是最长；②

减压柱可以减少硅胶的使用量，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结）。③

加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力会使洗脱剂流得更快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（增氧泵就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。洗脱剂的选择应该以薄层色谱检测（TLC）为依据，所需点Rf值在0.2-0.3左右比较好。被分离的2个点之间的ΔRf值应尽可能大，最小应不小于0.1，否则分离效果会比较差或很难分离。洗脱液的收集洗脱液一般采用等份收集，而每份收集量的多少需要根据样品量而定。如果少量样品，每份收集得过多，就