《临床检验技术》课件-项目三：白细胞系统检验

：郭丽香1.白细胞显微镜计数血液经白细胞稀释液以一定的倍数稀释，同时破坏溶解成熟红细胞。将稀释的血液充入血细胞计数池，在显微镜下计数一定容积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。原理

试剂白细胞稀释液：2%乙酸溶液中加入10g/L结晶紫（或亚甲蓝）3滴。

冰乙酸：破坏红细胞，且使白细胞核固定清晰亚甲蓝或结晶紫：使白细胞核略着色，便于识别蒸馏水

操作加稀释液0.38ml：吸取1ml，放入小试管中0.38ml，其余弃去，观察刻度时注意凹液面与眼睛平行。↓全血20μL：可用手指采血或静脉血，吸血时微量吸管中血液不能出现断层，需擦净管外余血↓释放血液：吸管插到稀释液底部放出血液，并用上清液冲洗管内余血2~3次，勿弄混上清液，轻轻混匀，勿产生气泡

操作↓充池：计数板和盖玻片使用前用清洁、干燥、柔软的吸水纤维制品擦拭干净，将盖玻片竖着推入计数池上方，待红细胞完全破坏，吸取1滴混匀的稀释血液沿计数板与盖玻片之间的缝隙充入，充满计数池↓静置：静置2min～3min，待白细胞全部下沉到计数池平面上

操作↓低倍镜下计数：调暗光线，在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数，按照“数上不数下，数左不数右”原则计数。对于大方格右上角或左下角压在两条相交线上的细胞，只数右上角压线细胞，不数左下角压线细胞。

操作↓计算：白细胞数/L＝四大格白细胞数/4×10×20×106/L，÷4：即得每大格（0.1μl)内白细胞平均数；x10：每大方格容积为0.1μl换算成1μl；X20：血液稀释倍数；x106：将1μl换算成IL。↓结果报告：XX×109/L

操作↓废弃物处理:使用后的废弃物，按照医疗垃圾进行处理，一次性小试管、20μl微量吸管使用后应放入锐器盒，干棉球、擦镜纸使用后应放入医疗垃圾袋，送至内部指定的暂时贮存地点。

课程思政成人（4~10)x109/L新生儿（15~20)x109/L6月～2岁（11~12)x109/L

参考区间1.有核红细胞的影响白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，外周血出现大量有核红细胞时，可使结果偏高，应予校正。白细胞校正数＝X×100/（100+Y）X：未校正前白细胞数Y：分类计数时，计数100个白细胞时见到的有核红细胞。质量保证质量保证例：校正前白细胞数为12×109/L，在做白细胞分类计数时计数100个白细胞的同时数得的有核红细胞数为40个，则校正后白细胞数是多少？校正后白细胞数／L=12×109/L×

=8.6×109/L2.经验控制以血涂片中所见白细胞的多少粗略核对白细胞计数结果有无大的误差。质量保证血涂片白细胞/HPWBC（×109/L）2～44～74～67～96～1010～1210～1213～18血涂片白细胞密度与白细胞总数的关系白细胞显微镜计数原理、试剂小结白细胞显微镜计数操作白细胞计数显微镜计数参考区间、质量控制：郭丽香2.白细胞分类计数案例中山医院肝脏外科吴医生最近遇到一位肝脏不适的病人，此前他已经在多家医院诊断多次，但所有的肝功能检验报告都显示正常。困惑中的吴志全医生突然想到检验科潘柏申主任曾经的一次介绍：“最简单的血常规也许就能解决疑难杂症。”于是，他给病人开具血常规检验单。不久，他的电话响了起来，检验科医师告诉他：“你的病人也许不是肝脏问题，而是淋巴系统的疾病。”原来，检验医师发现了这例血液标本的特异之处——它的指标和数值都在正常范围内，可血液内的细胞长得和正常细胞不一样。在显微镜下，检验医生发现，血液里的细胞核长得不像正常细胞一样饱满、紧实，而是显得松散、“幼稚”。随后的检查发现，这位病人罹患的果然不是肝脏疾病，而是白血病。课程思政把血液制成细胞分布均匀的薄膜涂片，用瑞氏染料染色，根据各类白细胞形态特征予以分类计数，得出相对比值（百分率），并注意观察细胞数量、形态的变化。原理制备血涂片↓瑞氏染色↓低倍镜观察：观察白细胞分布及染色情况↓油镜分类：一般为100个，>15×109/L时可分类200个，<3×109/L时可分类50～100个。分类区域一般为片头至片尾的3/4区域（体尾交界处），按一定方式（如城垛样）有规律地移动视野。操作↓报告结果：以各种白细胞所占的比值或百分率表示。幼稚或异常白细胞，计算在白细胞分类比值或百分率中。发现有核红细胞，报告分类计数100个白细胞的同时见到的有核红细胞个数，不计入白细胞总数之内。发现疟原虫等寄生虫应报告，红细胞、血小板的形态如有异常改变应报告。操作中性粒细胞杆状核0.01-0.05（1％-5％）分叶核0.50-0.70（50％-70％）嗜酸性粒细胞0.005-0.05（0.5％-5％）嗜碱性粒细胞0-0.01（0％-1％）淋巴细胞0.20-0.40（20％-40％）单核细胞0.03-0.08（3％-8％）

参考区间白细胞生理性变化

新生儿白细胞较高，可达（15～30）×109/L，3～4d后降至10×109/L，逐渐减至成人水平。新生儿中性粒细胞占绝对优势，第6～9d减至与淋巴细胞大致相等，随后淋巴细胞逐渐增多，婴儿期以淋巴细胞数为主（可达70%），2～3岁后，淋巴细胞逐渐减低，中性粒细胞逐渐增高，4～5岁两者基本相等，形成中性粒细胞和淋巴细胞2次交叉变化曲线，到青春期时与成人相同。

临床意义6~9天4~5岁中性粒细胞（1）中性粒细胞生理性增多：①一天之内一般下午较上午高；②剧烈运动、情绪激动、严寒、暴热；③新生儿；④妊娠5个月以上及分娩时；⑤吸烟。

临床意义中性粒细胞（2）中性粒细胞病理性增多①急性感染；②严重的组织损伤及大量血细胞破坏；③急性大出血；④急性中毒；⑤白血病及恶性肿瘤。（3）中性粒细胞减少①某些感染：伤寒、副伤寒；②某些血液病：再障；③某些理化损伤：长期接受放射线；④自身免疫性疾病：SLE；⑤脾功能亢进。

临床意义嗜酸性粒细胞1.生理变化白天较低，夜间较高，上午波动大，下午较恒定。

2.病理变化（1）嗜酸性粒细胞增多：①超敏反应性疾病：如支气管哮喘、荨麻疹、过敏等。②寄生虫病：如蛔虫、钩虫等。③某些皮肤病：如银屑病、湿疹等。④某些血液病：如慢性粒细胞白血病。⑤某些恶性肿瘤，如霍奇金病。⑥某些传染病：如猩红热。⑦某些内分泌疾病，如脑垂体功能低下。

临床意义嗜酸性粒细胞（2）嗜酸性粒细胞减少：①伤寒、副伤寒、大手术后。②长期使用肾上腺皮质激素。

3.嗜酸性粒细胞计数的其它应用（1）观察急性传染病的预后。（2）观察大手术和烧伤病人的预后。（3）肾上腺皮质功能测定。

临床意义嗜碱性粒细胞（1）嗜碱性粒细胞增多①慢性粒细胞性白血病：常伴嗜碱性粒细胞增多，可达10%或更多。②嗜碱性粒细胞性白血病：嗜碱性粒细胞异常增多，可达20%以上，多为幼稚型。③过敏性疾病：溃疡性结肠炎、超敏反应等。④骨髓纤维化和某些转移癌。（2）嗜碱性粒细胞减少多无临床意义。

临床意义淋巴细胞（1）淋巴细胞病理性增多①绝对增多：某些病毒或细菌所致的传染病，如风疹、流行性腮腺炎、传单等；某些慢性感染，如结核病恢复期也可见淋巴细胞增多；急、慢性淋巴细胞性白血病淋巴细胞增多，白细胞总数增高。②相对增多：再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等淋巴细胞百分率相对增高。（2）淋巴细胞减少主要见于长期接触放射线或应用肾上腺皮质激素之后，免疫缺陷病、流感恢复期、自身免疫性疾病；在急性化脓性感染时由于中性粒细胞明显增高可导致淋巴细胞相对减少。

临床意义单核细胞（1）单核细胞增多正常儿童单核细胞较成人稍高病理性增多见于：①某些感染：如亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、急性感染的恢复期、活动性肺结核等。②某些血液病：单核细胞性白血病、粒缺恢复期、恶性组织细胞病、淋巴瘤及骨髓增生异常综合征（MDS）等。（2）单核细胞减少：意义不大。

临床意义白细胞分类计数原理小结白细胞分类计数操作白细胞分类计数参考区间和临床意义3.正常白细胞形态人类外周血中的细胞（瑞特染色）图示中性粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞嗜碱性粒细胞人外周血白细胞单核细胞正常白细胞形态分叶核、杆状核中性粒细胞1.胞体圆形，直径10-14μm。2.胞核呈杆状、分叶状，染色质粗糙，深紫红色。3.胞质粉红色，含较多细小、均匀的紫红色颗粒。中性粒细胞中性分叶核粒细胞与中性杆状核粒细胞标准1：凡细胞核完全分离或核间以一丝（仅为核膜，无染色质）相连者为分叶核粒细胞，否则为杆状核粒细胞。标准2：细胞核径最窄处小于最宽处1/3者为分叶核粒细胞，大于1/3者为杆状核粒细胞。嗜酸性粒细胞1.胞体圆形，直径12-17μm。2.胞核多分叶、眼镜形，核染色质粗糙，深紫红色。3.胞质着色不清，充满粗大、整齐、均匀、排列紧密、有立体感的橘黄色颗粒。嗜碱性粒细胞1.胞体圆形，直径10-16μm。2.胞核因颗粒覆盖而模糊，染色质粗糙，深紫红色。3.胞质着色不清，含少量大小不均匀、排列不整齐的紫黑色颗粒，常覆盖细胞核及细胞边缘。外周血涂片瑞特染色三种粒细胞颗粒的鉴别要点鉴别点中性颗粒嗜酸性颗粒嗜碱性颗粒大小细小，大小一致粗大，大小一致最粗大，大小不一形状细点粒状圆形形态不一颜色淡（紫）红色橘黄色深紫（黑）色数量多多一般较少分布均匀均匀、紧密不均，可覆盖胞核图示

淋巴细胞1.胞体圆形、椭圆形，直径6-15μm。2.胞核类圆形、肾形，染色质粗糙块状，深紫红色。3.胞质透明、淡蓝色，可有少量粗大、大小不均的紫红色颗粒。单核细胞1.胞体圆形、椭圆形或不规则，直径15-22μm。2.胞核肾形、马蹄形、不规则形，有扭曲折叠，染色质疏松网状，淡紫红色。3.胞质不透明、毛玻璃样，灰蓝色或灰红色，含细小、灰尘样紫红色颗粒。淋巴细胞单核细胞中性粒细胞课堂小结中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞淋巴细胞中性分叶核粒细胞嗜碱性粒细胞单核细胞4.中性粒细胞畸形一个实习生做显微镜检查发现“杜勒小体”图示Chediak-Higashi畸形Pelger-Huët畸形Alder-Reilly畸形遗传相关畸形May-Hegglin畸形中性粒细胞畸形Chediak-Higashi畸形常染色体隐性遗传病中性粒细胞（或单核、淋巴细胞）胞质中含有多量、粗大的包涵体，直径约2-5μm，大小、形状不一，呈紫红色、紫蓝色或淡灰色。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Chediak-Higashi畸形包涵体的本质是一种巨大的溶酶体，因溶酶体膜存在功能缺陷，不能被释放到吞噬空泡内，造成中性粒细胞趋化能力减弱，杀菌能力差。粒细胞功能受影响，患者常有严重感染。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Pelger-Huët畸形常染色体显性遗传病又称家族性粒细胞异常。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编核纤层蛋白B受体（LBR）基因突变。LBR连接核纤层蛋白B与核内异染色体，在多核细胞的核分叶过程中发挥作用。中性粒细胞（或其他粒细胞）胞核分叶能力减退，常呈杆状、肾形、眼镜形、哑铃形，但染色质致密、深染，聚集成小块或条索状。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Pelger-Huët畸形Pelger-Huët畸形假性P-H畸形临床常见获得性P-H畸形，见于MDS、急性髓细胞白血病，也可继发于严重感染。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编与核酸代谢酶紊乱有关。Alder-Reilly畸形常染色体隐性遗传病图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编粘多糖代谢障碍。骨或软骨疾病如脂肪软骨营养不良。粒细胞胞质内含有多量巨大、深染的嗜天青颗粒，颗粒呈深红或紫色，有时可成簇分布。由于溶酶体缺乏某些脂类水解酶，造成粘多糖和神经鞘磷脂堆集形成颗粒，常不影响粒细胞功能。也可见于淋巴细胞、单核细胞。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Alder-Reilly畸形应与嗜酸性颗粒、嗜碱性颗粒区别。May-Hegglin畸形常染色体显性遗传病非肌性肌球蛋白重链基因点突变。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编也可出现于其他粒细胞及单核细胞。胞质中出现形态不一的蓝色或淡蓝色包涵体，类似杜勒小体，但大而圆，其主要成份是“非肌性肌球蛋白突变体”。“血小板减少、巨大血小板、粒细胞包涵体”三联征。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编May-Hegglin畸形不，该图所示其实是May-Hegglin畸形！中性粒胞质中蓝色包涵体是“杜勒小体”吗？课堂小结序号名称遗传特性形态特点图例1Chediak-Higashi畸形常染色体隐性遗传粗大的直径约2-5μm的包涵体，大小、形状不一，呈紫红色、紫蓝色或淡灰色2Pelger-Huët畸形常染色体显性遗传胞核分叶能力减退，常呈杆状、肾形、眼镜形、哑铃形或少分叶，但染色质致密、深染，聚集成小块或条索状3Alder-Reilly畸形常染色体隐性遗传巨大、深染的嗜天青颗粒，呈深红或紫色包涵体，有时可成簇分布4May-Hegglin畸形常染色体显性遗传形态不一的蓝色或淡蓝色包涵体，似杜勒小体，但大而圆5.异型淋巴细胞图中箭头所指是哪种白细胞？思考单核细胞？不是单核细胞淋巴细胞？多为T细胞，少数为B细胞。按照其形态特征，分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三种类型在某些病毒、原虫感染或过敏原等因素刺激下，外周血淋巴细胞增生并发生形态变化，表现为胞体增大、胞质增多、嗜碱性增强、细胞核母细胞化等，称为异型淋巴细胞。异型淋巴细胞-异淋Ⅰ型异型淋巴细胞浆细胞型、空泡型胞体多为圆形，较正常淋巴细胞稍大；胞核呈圆形、椭圆形、肾形或不规则形，核染色质呈粗网状或不规则聚集呈粗糙块状；胞质较丰富，深蓝色，无颗粒，含大小不等的空泡或呈泡沫状。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Ⅱ型异型淋巴细胞单核细胞型、不规则型胞体较大；胞核圆形或不规则，核染色质较细致；胞质丰富，淡蓝或蓝色，有透明感，着色不均匀，边缘处蓝色较深，呈“裙边样”，可有少许嗜天青颗粒，一般无空泡。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编Ⅱ型异型淋巴细胞Ⅲ型异型淋巴细胞幼稚型、未成熟型胞体较大；胞核大，呈圆形或椭圆形，核染色质呈细致网状，可见1-2个核仁；胞质量少，呈深蓝色，多无颗粒，偶有小空泡。图片摘自《血象——外周血细胞图谱》张时民、王庚主编岗位应用异型淋巴细胞正常人外周血中偶见（0-2%）。异淋增多主要见于病毒感染，如传染性单核细胞增多症、流行性出血热、病毒性肝炎、疱疹等，也可见于某些原虫感染或过敏原刺激。岗位应用《ICSH外周血细胞形态特征的命名和分级标准化建议》中提及“反应性淋巴细胞”《欧洲血细胞共识》对于不典型淋巴细胞描述：①不典型淋巴细胞，疑为反应性②不典型淋巴细胞，疑为肿瘤性不典型淋巴细胞③不典型淋巴细胞，性质不确定岗位应用ICSH建议在炎症性和感染性疾病（尤其是病毒感染）中各种免疫刺激下，外周血中出现的形态改变的淋巴细胞，称为反应性淋巴细胞。在肿瘤性疾病（白血病和淋巴瘤）中出现的，称为异常淋巴细胞。课堂小结Ⅰ型异型淋巴细胞浆细胞型/空泡型Ⅱ型异型淋巴细胞单核细胞型/不规则型Ⅲ型异型淋巴细胞幼稚型/未成熟型良性病变：反应性淋巴细胞；恶性病变：异常淋巴细胞。临床拓展病例某患者，男，78岁，发热、淋巴结肿大，血常规示白细胞↑报告：查见异常淋巴细胞！岗位应用临床经验当病毒感染等原因导致外周血异淋增多时，通常其三种形态均可见到，即“三型见齐”。而如果仅见单一形态的“异淋”，则很有可能为肿瘤性淋巴细胞，需格外注意！69：郭丽香临床检验技术6.血细胞分析之白细胞70目录CONTENTS白细胞检验的参数01白细胞计数原理及临床意义02白细胞的形态学特点03白细胞的复检04典型的案例分析05序列号名称涵 义1WBC白细胞2NEUT%嗜中性白细胞百分比3LYMPH%淋巴细胞百分比4MONO%单核细胞百分比5EO%嗜酸性白细胞百分比6BASO%嗜碱性白细胞百分比7NEUT#嗜中性白细胞计数8LYMPH#淋巴细胞计数9MONO#单核细胞计数10EO#嗜酸性白细胞计数11BASO#嗜碱性白细胞计数12IG%幼稚粒细胞百分比13IG#幼稚粒细胞计数白细胞检验的参数幼稚粒细胞异常淋巴中性嗜酸单核淋巴嗜碱嗜碱其他白细胞白细胞计数原理及临床意义原理光散射（或加荧光染色）（五分类）；电阻抗法（三分群，五分类）

临床意义升高：白细胞增多常见于炎性感染、出血、中毒、白血病等。降低：常见于流感、麻疹等病毒性传染病及严重败血症、药物或放射线所致及某些血液病等。中性粒细胞：见于伤寒、副伤寒、疟疾、流感、化学药物中毒、X线和镭照射、抗癌药物化疗、极度严重感染、再生障碍性贫血、粒细胞缺乏症等。嗜酸性粒细胞：伤寒、副伤寒、应用肾上腺皮质激素后。淋巴细胞：多见于传染病急性期、放射病、细胞免疫缺陷等。白细胞分类计数的临床意义增多中性粒细胞：见于急性化脓感染、粒细胞白血病、急性出血、溶血、手术后、尿毒症、酸中毒、急性汞中毒、急性铅中毒等。嗜酸性粒细胞：见于变态反应、寄生虫病、某些皮肤病、手术后、烧伤等。嗜碱性粒细胞：慢性粒细胞白血病、何杰金病、癌转移、铅及铋中毒等。淋巴细胞：见于百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、腮腺炎、结核、传染性肝炎等。单核细胞：见于结核、伤寒、亚急性感染性心内膜炎、疟疾、黑热病、单核细胞白血病、急性传染病恢复期等。减少74白细胞的形态（粒细胞）白细胞的形态（淋巴、单核）①Ⅰ型空泡型②Ⅱ型不规则型③Ⅲ型幼稚型白细胞的形态（异型淋巴）①中毒颗粒白细胞的形态（感染）③杜勒小体②空泡变性序号规则名称复检界定门诊标准复检方法1WBC,RBC,HGB,PLT,Ret超出线性WBC>440ORRBC>8ORHGB>250ORPLT>5000OR网织红细胞百分比>23OR网织红细胞绝对值>0.72涂片镜检2WBC(200%)白细胞数3天内百分比增加或减少200重测标本3PLT(一)PLT>1000涂片镜检4PLT(二)血小板数7天内百分比增加或减少100检查标本5PLTclumpfla